刘源洁
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：武汉大学生命科学学院病毒学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丙型肝炎病毒NS5A基因在昆虫细胞中的表达及其分布研究被引量：1
- 2002年
- 应用ＰＣＲ方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒ｐＢＡＣ２５ 中扩增出全长的ＮＳ５Ａ基因ＤＮＡ片段（约１．３４ｋｂ），ＰＣＲ扩增ＮＳ５Ａ基因片段克隆到转移载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＡ中。重组转移质粒ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ５Ａ ＤＮＡ与野生型杆状病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ共转染ＳＦ－９昆虫细胞，通过空斑纯化获得带有ＮＳ５Ａ基因的重组病ＡｃＮＳ５Ａ。对重组病毒基因组ＤＮＡ进行 酶切和ＰＣＲ鉴定，证实ＨＣＶ ＮＳ５Ａ基因已插入重组病毒基因组中。ＡｃＮＳ５Ａ感染ＳＦ－９细胞后，在 细胞中表达出一条６４ｋＤ的蛋白，用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析，结果表明这种蛋白与抗ＨＣＶ ＨＳ５Ａ特 异性抗体发生强烈反应，说明ＮＳ５Ａ基因已在细胞中得到表达，应用免疫荧光技术与免疫组化 技术进一步研究ＮＳ５Ａ蛋白在昆虫细胞中不同时间的表达情况及其分布，结果表明，ＮＳ５Ａ蛋白 在ＡｃＮＳ５Ａ重组病毒感染细胞２４ｈ后主要分布在细胞质膜上，而在４８ｈ后则同时分布于细胞质膜 和细胞核内 ，在７２ｈ则完全布满整个细胞，我们认为ＮＳ５Ａ蛋白定位于质膜和细胞核中，暗示着在病毒复 制过程中ＮＳ５Ａ蛋白可能参与病毒ＲＮＡ在质膜上复制和细胞基因表达的调?
- 冯磊叶林柏阮华郜金荣徐进平刘源洁吴正辉
- 关键词：HCVNS5A免疫荧光免疫组化昆虫细胞丙肝病毒
- HCV NS2基因表达载体的构建及在E.coli中表达
- 2001年
- 应用 PCR方法从含有丙肝病毒全长非结构蛋白基因的载体 p Blue Bac2 5中扩增出全长的 N S2基因DNA片段 ,分别克隆到表达载体 p QE3 0和转座载体 p Fast Bac HTb的多克隆位点 ( MCS) .PFast NS2通过转座插入穿梭载体 Bacmid的表达盒 ;p QENS2转化 JM10 9菌株 ,诱导表达出 N端含有 6个 His的全长 NS2蛋白 ,用 Ni-NTA- agarose柱层析纯化 ,获得提纯的全长 NS2蛋白 .
- 赵月娥叶林柏郜金荣徐进平刘源洁吴正辉
- 关键词：纯化丙型肝炎病毒NS2基因基因表达
- 丙型肝炎病毒E2基因DNA免疫实验动物研究被引量：2
- 2002年
- 将编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２蛋白４１７～７５０位氨基酸的ＤＮＡ片段 克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ ３．１（－）中的ＣＭＶ ＩＥ启动子下游，构建成ＨＣＶ Ｅ２重组真核表达质粒 ｐｃＥ２。ＥＬＩＳＡ法检测ｐｃＥ２ ＤＮＡ免疫兔血清中的Ｅ２抗体变化和维持规律，结果显示免疫２０ｄ已有 抗体产生，３０ｄ后开始进入高峰，４０ｄ时达到最高值，至第９０ｄ抗体水平保持平稳，抗体滴度 达到１∶１６００左右。流式细胞计数仪（ＦＡＣＳ）检测ｐｃＥ２ ＤＮＡ免疫鼠ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞变 化情况，与注射空载体ｐＣＤＮＡ３．１（－）的阴性鼠相比，ＣＤ４＋淋巴细胞水平略有上升，ＣＤ８＋ 细胞水平有较大升高，增幅达３５．４６％。免疫组化检测结果显示注射ｐｃＥ２的小鼠组织中有明显 的阳性着色，而注射ｐｃＤＮＡ３．１（－）的对照组小鼠免疫组化结果为阴性。以上结果表明：ｐｃＥ２ 在实验动物内表达出的ＨＣＶ Ｅ２蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答，尤其 是ＭＨＣ－１限制性杀伤性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平的提高对清除 病毒是十分有利的，因此ＨＣＶ Ｅ２ ＤＮＡ免疫有可能成为预防和治疗ＨＣＶ感染的一条新途径。
- 刘源洁叶林柏徐进平郜金荣冯磊孙明颢李江吴正辉
- 关键词：丙型肝炎病毒HCVDNA免疫E2基因实验动物
- 人t-PAP区在大肠杆菌中表达及其活性研究被引量：3
- 2001年
- 用 PCR方法获得编码人组织型纤溶酶原激活物 (tissure- type plasminogen activator,t- PA) C端 P区肽段的 DNA,并经测序证实 ,长 810 bp,含有全部的 t- PA的丝氨酸蛋白酶编码序列 .将这段序列克隆到表达载体p QE30中转化大肠杆菌 JM10 9菌株 ,经 SDS- PAGE检测 :转化菌株中表达出分子量约 2 9× 10 3的蛋白 ,用纤维平板法测定激活纤溶活性 ,结果表明表达的 t- PA蛋白 C端 P区具有很强的激活纤溶蛋白酶原的活性 .证实 t- PA蛋白 C端 P区的酶结构区的功能是独立的 。
- 赵月娥郜金荣叶林柏徐进平刘源洁吴正辉
- 关键词：活性纤溶酶原激活物大肠杆菌
