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CFSE和AnnexinV双标记技术检测细胞毒性T淋巴细胞的杀伤效应: 2010年; 目的利用CFSE和AnnexinV对靶细胞进行染色，建立一种通过流式细胞仪技术检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤效应的新方法。方法应用磁珠分选OT—IT细胞受体（TCR）转基因小鼠CD8＋CTL细胞和脾脏树突状细胞（sDC），将2种细胞和鸡卯蛋白（OVA）抗原肽共培养65h后分析其细胞分裂增殖、IFN-γ和IL-4细胞内因子及穿孔素、颗粒酶等效应分子的表达特性，收获具备杀伤效应的CD8＋CTL细胞。利用预先激活的小鼠CD8^＋CTL细胞作为效应细胞，CFSE标记的同系小鼠脾细胞作为靶细胞，体内体外2种条件下利用AnnexinV染色靶细胞检测特异性CTL杀伤效应，并与CFSE^high曲和CFSE^low标记靶细胞检测体内CTL杀伤效应的经典方法进行比较。结果OT—I初始CD8^＋CTL细胞体外活化培养后有4个分裂峰，54．1％的CTL细胞表达IFN-γ，0．78％的细胞表达IL-4，穿孔素、颗粒酶2种CTL效应分子均为阳性表达，CD8＋CTL细胞已经具备CTL杀伤活性。体外实验结果显示OVA^＋靶细胞在共培养条件下，AnnexinV阳性细胞比例明显高于分离培养条件下[（62．4±3．5）％比（28．3±2．2）％，P〈0．01]，OVA的AnnexinV阳性靶细胞比例在不同培养条件下差异无统计学意义[（20．3±4．8）％比（17．3±2．9）％，P〉0．05]。共培养条件下OVA^＋靶细胞其AnnexinV阳性细胞比例也明显高于OVA^-靶细胞（P〈0．01），在分离培养条件下差异则无统计学意义（P〉0．05）。活化的CD8^＋CTL细胞所介导的杀伤效应具有抗原依赖性和部分的细胞接触依赖性。体内CTL实验中，利用CFSE和AnnexinV双标记的方法检测出靶细胞的杀伤率高于未孵育OVA抗原肽的对照组靶细胞[（52．63±8．12）％比（13．84±4．37）％，P〈0．01]。而同等条件下利用CFSE^high和CFSE^low双标记的方法检出靶细胞杀伤率为41%。结论CFSE和AnnexinV双标记靶细胞的方法检测CTL杀伤效应与�; 梁华刘霜沈弢; 关键词：细胞毒性 CFSE ANNEXINV 细胞毒性试验

抗原肽浓度对初始T细胞向Th1／Tc1、Th2／Tc2分化影响的研究: 2010年; 目的研究不同浓度抗原肽（OVA）对初始CD4^＋T细胞向Th1／Th2、初始CD8^＋T细胞向Tc1／Tc2分化偏向性的影响。方法采用系列浓度TCR特异性抗原肽与小鼠脾脏树突状细胞联合培养，然后刺激小鼠初始CD4^＋或CD8^＋T细胞。流式细胞术检测细胞内因子IFN-γ和IL4的表达水平，同时用CFSE检测活化T细胞的增殖水平。结果低浓度抗原肽刺激初始CD4^＋T向Th2、初始CD8^＋T向Tc2分化；而高浓度抗原肽刺激初始CD4^＋T向Th1、初始CD8^＋T向Tc1分化。Th细胞比Tc细胞受影响程度要明显。结论抗原肽在很大浓度范围内均可以刺激初始T细胞的活化，但随着浓度的升高，分化方向从Th2、Tc2逐渐向Th1、Tc1倾斜。这一结论为动物实验中疫苗免疫剂量的控制提供了重要的参考价值。; 梁华刘霜沈弢; 关键词：抗原肽树突状细胞分化

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刘霜

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