刘颖
- 作品数：3 被引量：12H指数：1
- 供职机构：河南农业大学更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 表达高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的伪狂犬病病毒拯救与纯化
- 2023年
- 为研制预防高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染的重组伪狂犬病病毒(PRV)活载体疫苗候选毒株,本研究依据HP-PRRSV HuN4毒株GP5基因序列设计并合成1对特异引物,BamHⅠ引入到引物的5′端,从HP-PRRSV毒株的RNA中,用RT-PCR扩增HP-PRRSV GP5基因。将BamHⅠ酶切的PCR产物与同样酶切并去磷酸化的PRV转移载体pG相连接,构建重组质粒pG-GP5/HP-EGFP。采用脂质体转染法将pG-GP5/HP-EGFP质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV-gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)的ST细胞中,经病毒空斑纯化,获得携有HP-PRRSV GP5基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记基因的重组伪狂犬病病毒rPRV-GP5/HP-EGFP。将重组病毒rPRV-GP5/HP-EGFP接种CRISPR/Cas9 EGFP敲除质粒转染过的ST细胞,经4轮病毒空斑纯化,最终获得无绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-GP5/HP。经PCR鉴定及测序,证实获得的rPRV-GP5/HP在EGFP基因上缺失了1 232 bp。经RT-PCR和间接免疫荧光试验进一步表明成功构建重组病毒rPRV-GP5/HP。
- 张刘辉刘颖马晓赵友驿韩莹莹金钺陈红英
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因伪狂犬病病毒
- 甜瓜果实发育过程中糖积累及蔗糖代谢相关酶的变化
- 甜瓜是世界性的重要园艺作物。我国甜瓜的生产量占世界总产量和总面积的40％以上,为了进一步改善甜瓜果实品质,创新甜瓜种质资源,本文以甜瓜自交系HN-001、HN-002、HN-004为试材,授粉后定期取样测定发育过程中果实...
- 刘颖
- 关键词：甜瓜果实发育糖分积累蔗糖代谢酶
- 文献传递
- 表达高致病性和NADC30样PRRSV毒株GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒的构建
- 2023年
- 参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表达质粒pBApo-EF1α_Pur_DNA的BamHⅠ和HindⅢ位点,然后扩增含GP5/NA的表达盒,将其导入含高致病性PRRSV(HP-PRRSV)GP5基因的伪狂犬病病毒(PRV)转移质粒pG-GP5/HP-EGFP中,构建重组质粒pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。用脂质体转染法将PRV变异株3基因缺失株rPRV-gE-/gI-/TK-基因组与pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP质粒共转染ST细胞,得到携带有HP-PRRSV和NADC30-like PRRSV的GP5基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组PRV株rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。该重组病毒与CRISPR/Cas9-EGFP敲除质粒共转染ST细胞,经4轮病毒空斑纯化得到了无绿色荧光标签的重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30株。经PCR和RT-PCR证实成功构建重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30。
- 王林青侯承尧马晓刘颖刘芳金钺陈红英
- 关键词：GP5基因
