叶志华
- 作品数：16 被引量：44H指数：4
- 供职机构：广东省微生物研究所更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 人ZP3基因的RT-PCRcDNA克隆被引量：1
- 2005年
- 目的:研究人ZP3基因的结构及构建人ZP3基因原核表达系统。方法:从人卵巢组织中分离出mRNA并以此作为模版,通过RT-PCR扩增出人ZP3基因cDNA片段,然后将其克隆在pUC18质粒上,并对克隆片段进行序列分析。结果:共克隆到ZP3-A(1300bp)、ZP3-B(1180bp)、ZP3-C(1200bp)和ZP3-D(1080bp)4种不同长度的人ZP3基因cDNA片段,对其中最长的ZP3-A片段的测序结果表明,它包含了人ZP3基因阅读框内的全部序列,与NCBISequenceViewer中公布的人ZP3mRNA序列(NM-007155)相比较,在1275bp长的编码区内只有一个碱基不同,两者同源性达到99.92%。结论:本研究克隆到的ZP3-AcDNA片段确是人ZP3基因无疑。
- 叶志华梁建庆
- 关键词：CDNA克隆
- 从鲮鱼脑下垂体组织提纯的方法
- 1989年
- 前言鲮鱼(Cirrhina molitorelle)是我国珠江流域南部的重要养殖鱼类,种苗要求量很大,靠脑下垂体催产远远不足供应。另外,优良鱼种的培育也很重要。因此,希望能通过基因工程新技术,构建带有鲮鱼生长激素基因和促性腺激素基因的工程菌,以便人工生产激素,还可以籍以培养生长较快、鱼体较大的鱼种。
- 彭红庄詹敏叶志华简浩然
- 关键词：鲮鱼提纯
- 多组织核酸分子膜的前期开发研究
- 叶志华梁培华郭俊丁野青丁达明张向阳梁建庆姚志海柳海林杜纲国高冬梅
- “多组织核酸分子膜的前期开发研究”项目是由广东省微生物研究所和深圳市君轩生物技术有限公司联合申请的广东省科技攻关项目（编号：2KM02504G），于2000年12月获准立项，资助经费为10万元，研究期限为2001年1月至...
- 关键词：
- 关键词：RNA
- chiA基因在稻根联合固氮菌E26和NG13中的表达被引量：5
- 2001年
- 将带有粘质沙雷氏菌几丁质酶基因 (chiA)的 1 8kbHinfⅠ片段分别克隆到表达载体pKK2 2 3 3和质粒pMC71A上 ,构建成几丁质酶表达质粒pKChiA和pMChiA。将这 2种质粒转化稻根联合固氮菌阴沟肠杆菌E2 6 (EnterobactercloacaeE2 6 )和催娩克氏菌NG1 3 (Klebsiellaoxy tocaNG1 3 ) ,chiA基因在这 2菌株中获得高效表达。对表达产物的细胞定位测定表明 ,几丁质酶不仅存在于细胞周间质和胞内 ,而且还分泌到培养物上清液中。在对数生长后期 ,胞外、胞间质和胞内的几丁质酶活性分布分别为 2 3 %～ 2 8%、45 %～ 5 1 %和 2 1 %～ 3 2 %。经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明 ,表达的几丁质酶蛋白分子量为 5 8kD。在受体细胞内 ,质粒pMChiA的稳定性要比质粒pKChiA高。
- 叶志华梁建庆
- 转化条件对质粒DNA转化大肠杆菌的影响被引量：12
- 2004年
- 研究了质粒DNA大小、质粒DNA浓度、CaCl2 浓度、热休克时间及感受态细胞保藏时间等因素对大肠杆菌HB1 0 1和JM1 0 5转化频率的影响 ,并对转化子中质粒DNA进行了分离、酶切、琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明 ,CaCl2 浓度、质粒大小和浓度 ,以及感受态细胞的活力对转化频率有重要影响 ,42℃热休克处理可以提高转化频率。
- 梁建庆叶志华江秀梅彭李岚张海滨
- 关键词：质粒大肠杆菌
- 海藻糖产生菌的筛选及其发酵条件研究被引量：10
- 2002年
- 通过液体发酵筛选,从土壤中分离的241株菌株及保藏的95株菌株中得到15株海藻糖生产菌,对这些菌株进一步筛选得到产海藻糖最多的一株菌Bacillussp.。其发酵最适合条件为:以麦芽糖为碳源,发酵初始pH值7 0,接种量为6%,30℃条件下培养48h。另外该菌株在分别以葡萄糖和蔗糖为碳源的培养基中都能产生海藻糖。
- 曾国驱黄晓兰蔡小伟李雄梁建庆叶志华
- 关键词：发酵条件
- 几丁质酶表达质粒pKChiA和pMChiA的构建及表达被引量：13
- 2001年
- 从质粒pLCHIA中切出含粘质沙雷氏菌 (Serratiamarcescens)几丁质酶基因 (chiA)的 1 8kbHinfI片段 ,将其插入到表达载体pKK2 2 3 3强启动子Ptac下游的SmaI位点内 ,构建成几丁质酶表达质粒pKChiA。再用内切酶BamHI从pKChiA质粒中切出 2 1kbPtac ChiA片段 ,并将其重组到质粒pMC71A的单一BamHI位点内 ,构建成另一种几丁质酶表达质粒pMChiA。这两种质粒可在大肠杆菌HB1 0 1和JM1 0 5中高效表达 ,几丁质酶表达水平比质粒pLCHIA高 1～ 3倍。
- 叶志华梁建庆
- 关键词：几丁质酶基因粘质沙雷氏菌
- 质粒pMC71A-LEU转化阴沟肠杆菌E26-1的研究被引量：1
- 2000年
- 质粒pMC71A－LEU在对阴沟肠杆菌E26－1（EnterobactercloacaeE26－1）的转化中研究了感受态细胞、CaCl2浓度、热激温度和质粒DNA量对转化频率的影响。结果表明，在阴沟肠杆菌F26－1生长到OD600＝0．45时，用50mmol／LCaCl2处理细胞，加入100ng质粒DNA，在32℃热激2min，转化频率最高，可达1×103转化子／μgDNA。
- 叶志华梁建庆
- 关键词：阴沟肠杆菌基因工程
- 从草鱼肝细胞中分离大分子量的DNA的简便方法
- 1987年
- DNA的分离是从事分子生物学、分子遗传学和基因工程研究所必须掌握的基本技术之一。在鱼基因库的构建中，首先就需要分离到大分子量(100Kb以上)的鱼DNA作为克隆的材料。许多研究表明，真核生物的每个染色单体仅含有一条双螺旋DNA，其分子量平均为1×10^11道尔顿。
- 叶志华丘晓颖杨秀兴许双何能波简浩然
- 关键词：DNA肝细胞分子遗传学草鱼基因库基因工程
- 重组人卵透明带-3蛋白的高效表达及其分离制备的研究
- 叶志华梁建庆
- 该项目取得主要成果及创新点：1.成功克隆到全长的人ZP3基因cDNA片段，测序结果表明该片段包含了人ZP3基因编码区的1275bp长的全部序列，与NCBI Sequence viewer中公布的人ZP3mRNA序列(NM...
- 关键词：
- 关键词：基因表达
