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麦族WKS基因的重组和遗传转化: 2012年; 小麦条锈病是由专性寄生真菌Puccinia striiformis f.sp.tritici引起的重要病害,在世界范围内广泛流行。小麦条锈病抗性基因Wheat Kinase-START 1(WKS1),是近年克隆的高温抗条锈病基因。本研究从二粒小麦、长穗偃麦草、百萨薄冰草和顶芒山羊草中克隆了6个WKS同源基因(WKS1或WKS2)的cDNA片段;通过基因切换创建了WKS1和WKS2之间的重组基因8个;并构建了WKS同源和重组基因相应的植物表达载体。为验证基因功能,分别将WKS同源和重组基因导入了高感锈病的短柄草株系,获得了转基因稳定整合和表达的阳性植株。本项研究为创建新型WKS基因和揭示WKS1基因的作用机理奠定了基础。; 李坤吕波姜辉吴佳洁付道林; 关键词：小麦短柄草条锈病

小麦BAC shotgun测序文库的构建被引量：3: 2007年; 为给小麦基因组中某一基因区域的测序与分析奠定基础,以小麦7B和7D染色体上的10个BAC克隆为材料,运用Large-Construct Kit和TOPO TA cloning kit两个商品化的试剂盒及HydroShearDNA剪切仪建立了BAC shotgun文库构建的技术体系,即利用该体系可以获得高纯度的BAC 20-50μg以及DNA 3-5 kb的目标小片段,5-20 min即可完成连接,一次转化可获得2000个重组克隆。利用这一方法,现已构建了10个小麦BAC shotgun文库,这些文库可为小麦基因组特定区段的研究奠定基础。; 张俊成孔秀英吴佳洁刘越张春庆; 关键词：小麦 BAC克隆

细菌人工染色体(BAC)文库及其在小麦中的应用被引量：2: 2006年; 细菌人工染色体(BAC)具有容量大、遗传稳定、易于操作等优点,在基因组研究和基因功能分析等方面得到了广泛应用。对BAC文库克隆载体的类型、小麦BAC文库的构建及其应用进行了综述,并对其前景进行了展望。细菌人工染色体载体是由大肠杆菌的F-因子发展而来,第一代BAC克隆载体pBAC108l能容纳300kb的片段,但它只具有转化选择标记,没有重组选择标记。第二代载体是将LacZ基因插入到多克隆位点中形成具有重组选择标记类型的载体如pBeloBAC11,在该载体的基础上经过改造和改进又发展了一些特殊用途的载体,如富集基因类型和遗传转化类型的载体。近年来利用这些载体构建了小麦二倍体、四倍体、六倍体基因组BAC文库以及小麦特定染色体BAC文库,并以单克隆或混合池的形式保存。这些小麦BAC文库对于小麦基因克隆、基因组及基因区物理图谱的构建以及比较基因组学等方面的研究具有重要的意义。; 刘越孔秀英吴佳洁肖建会刘旭; 关键词：小麦细菌人工染色体文库基因组学

“济麦”系列品种成熟胚再生体系的优化研究被引量：5: 2012年; 建立成熟的外植体再生体系,搭建有效的转化平台是实现小麦基因工程改良的重要途径。与未成熟胚相比,利用小麦成熟胚作为外植体不仅取材方便,而且不受环境和季节的限制。因此,建立小麦成熟胚再生体系是小麦组织培养发展的重要趋势。本研究利用"济麦"系列5个品种济南17、济麦19、济麦20、济麦21和济麦22,以适于组培的小麦品种Bobwhite作对照,研究了不同浓度2,4-D、玉米素(ZT)和激动素(KT)对小麦成熟胚的愈伤诱导和分化成苗的影响。结果表明,与对照品种Bobwhite相比,"济麦"系列品种具有更高的成熟胚出愈率,品种间差异显著,呈现出基因型效应。在相同2,4-D诱愈浓度条件下,不同品种间分化和成苗率差异极显著。"济麦"系列品种的成苗率均低于对照品种Bobwhite(13.55%),说明进一步优化愈伤的再生成苗能力是未来建立再生体系的关键。相同品种条件下,2,4-D诱愈浓度对出愈、分化和成苗率影响显著,当2,4-D诱愈浓度4mg/L时,除济麦20以外,其它五个品种均能分化成苗,其中济麦22成苗率约10.33%,接近Bobwhite水平。本研究为建立和完善"济麦"系列品种的成熟胚再生和遗传转化体系奠定了基础。; 王树芸吕波李坤吴佳洁付道林; 关键词：小麦成熟胚 2,4-D 激动素玉米素

大麦TILLING体系在抗病基因研究中的应用被引量：3: 2012年; 基因组靶向定位诱导损伤技术(Targeting Induced Local Lesions In Genomes,TILLING)是在化学诱变和PCR定向筛选基础上发展起来的检测点突变的反向遗传学研究方法,在多种重要农作物上都有应用。本研究使用化学诱变剂甲基磺酸乙酯(Ethyl methane sulfonate,EMS)处理大麦品种‘Tamalpais’,获得了2154个M2株系,同时开发了基于芹菜内切酶CEL I(celery juice extract)的酶切筛选体系。针对植物水杨酸抗病途径相关的两个重要基因EDR1和NPR1,检测到5个M2突变株系。序列分析表明,2个突变发生在内含子、1个NPR1基因的同义突变、2个EDR1基因的错义突变(His351Tyr和Pro556Ser)。本项研究为麦类作物反向遗传学研究奠定了基础。; 胡鑫齐新丽吕波吴佳洁付道林; 关键词：EMS NPR1基因

大麦转化中潮霉素和草丁膦的筛选效果研究被引量：4: 2013年; 本研究以大麦品种"Golden Promise"幼胚为受体材料,建立了农杆菌介导的大麦遗传转化方法。实验利用携带潮霉素磷酸转移酶基因HptII(潮霉素抗性)和草丁膦乙酰转移酶基因Bar(草丁膦抗性)的载体PC551,研究了潮霉素及草丁膦对转基因幼胚的愈伤组织诱导、植株再生、生根等过程的影响,结果表明潮霉素的筛选效果优于草丁膦。通过除草剂Rely280涂抹、PCR检测以及黄色荧光观察等多种方法验证转基因后代,结果表明以潮霉素为筛选剂得到再生苗的阳性率显著高于以草丁膦为筛选剂的阳性率。因此在大麦遗传转化体系中,潮霉素更适合作为筛选剂。; 韩秀丽王文良田田张陵云吴佳洁; 关键词：大麦潮霉素草丁膦

小麦太谷核不育基因ms2及其应用: 本发明公开了一种小麦太谷核不育基因ms2及其应用。本发明提供的蛋白质，命名为ms2蛋白，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和...; 孔秀英贾继增夏川张立超段佳磊吴佳洁刘越肖建会; 文献传递

大麦EMS突变群体的创建及功能评价被引量：9: 2012年; 为开展麦类作物功能基因组学研究,选用综合性状突出的大麦品种Tamalpais,通过化学诱变剂甲基磺酸乙酯(Ethyl methane sulfonate,EMS)处理,创建了含有10 389个M2单株的突变群体。该群体数据分析表明,温室条件下,6.21%的M2幼苗呈现叶片颜色变异;大田实验中,M2群体出现丰富的表型变异,主要包括幼苗匍匐、分蘖、株高、生育期、叶色、叶形、叶条纹、叶斑、穗部特征、育性等,其中幼苗匍匐、分蘖、株高、叶色、叶条纹、叶斑的突变频率分别为0.11%、6.03%、0.13%、2.5%、0.18%、0.17%。抽样调查显示,M2世代的胚坏死率较低,仅有9%左右的单株表现出过半的胚坏死率。运用TILLING技术成功获得大麦COI1同源基因的突变体,筛选结果同时表明,该突变群体的突变频率约为平均每673kb一个点突变。因此,Tamal-pais群体突变表型丰富、TILLING检测可行,可作为麦类作物基因图位克隆与功能验证的重要素材,适用于麦类作物的正向和反向遗传学研究。; 齐新丽徐智斌裴洪翠胡鑫吴佳洁李宪彬王涛付道林; 关键词：大麦反向遗传学功能基因组学 TILLING COI1 基因

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吴佳洁

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