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周秘: 作品数：15 被引量：78H指数：6; 供职机构：河北联合大学更多>>; 发文基金：石药集团医药联合研究基金河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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刺五加GAPDH基因全长cDNA的克隆与生物信息学分析被引量：2: 2013年; 采用cDNA末端RACE技术,从刺五加叶片中克隆到GAPDH基因cDNA的全长序列,并运用生物信息学方法对该基因的cDNA序列、保守区、氨基酸序列、亲缘关系等特征进行分析,并预测其编码蛋白质的结构和功能。研究结果表明,刺五加GAPGH基因的cDNA全长为1 437 bp,开放阅读框全长为1 023 bp,编码一个具有340个氨基酸残基的蛋白,蛋白分子质量为37.070 ku,理论等电点(pI)为7.71。刺五加GAPDH蛋白不存在跨膜结构域,定位于细胞质中,属于亲水蛋白。; 修乐山柴丽花周秘邢朝斌; 关键词：刺五加 GAPDH 克隆

刺五加鲨烯环氧酶基因的表达及其与刺五加皂苷含量的相关性分析被引量：7: 2013年; 目的:应用实时定量PCR技术对刺五加鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因进行表达分析,探讨其与刺五加皂苷含量的关系。方法:以3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因为内参照基因,通过实时定量PCR检测SE基因的相对表达量,分光光度法测定刺五加皂苷含量。结果:不同产地、器官中的SE表达量存在显著差异(P<0.05),其中,雾灵山产地的表达量最大,达最小值(伊通产地)的4.81倍,各器官中,叶的表达量最大,为根的1.92倍。从叶片萌芽期到衰老期,SE的表达呈先升后降趋势,各发育期之间差异显著(P<0.05),其中盛花期的表达量最高,达萌芽期的3.71倍;茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)可提高SE的表达量,但未达显著水平。刺五加叶的皂苷含量与SE的表达量之间存在显著的正相关关系(P<0.05)。结论:不同产地、器官及生长发育时期刺五加SE的表达量间差异显著,且SE的表达与刺五加的皂苷含量显著相关。; 李宝财修乐山周秘朱金丽邢朝斌; 关键词：实时定量PCR 刺五加皂苷

刺五加法呢基焦磷酸合酶基因的表达及其与皂苷含量的相关性分析被引量：6: 2013年; 根据刺五加法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的cDNA序列信息,设计特异性引物,利用半定量RT-PCR技术,对刺五加FPS基因在不同产地、不同器官、不同发育时期及茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的表达情况进行分析。结果表明,FPS基因在不同产地、时期、器官及MeJA处理后的刺五加中均有表达,但表达量存在显著差异。FPS在萌芽期的表达量最高,盛花期的表达量最低,两者比值为4.19且差异显著;本溪、珲春、鸡西、雾灵山、穆棱、梅河口、伊通产地刺五加的FPS相对表达量依次降低;在不同器官中以叶的表达量最高;MeJA处理后FPS的表达量比用蒸馏水处理的对照组均有显著提高。FPS的相对表达量与刺五加叶器官的皂苷含量存在显著的正相关关系。; 周秘柴丽花修乐山邢朝斌; 关键词：刺五加皂苷

刺五加功能基因密码子偏好性的分析被引量：11: 2013年; 目的分析刺五加功能基因密码子的使用方式及其影响因素。方法以刺五加的17条功能基因为材料,利用CodonW和SPSS软件进行多元统计分析和对应性分析。结果刺五加功能基因密码子3个位置的GC量依次为51.03%、41.23%和40.04%,三者均与整个编码区的GC量显著相关(P<0.05),GC12与GC3的相关系数为0.262,未达到显著水平。同义密码子的相对使用频率大于1的密码子共27个,其中22个以A或T碱基结尾。对应性分析的结果表明,第1轴显示了22.78%的差异,与GC3、密码子适应指数和密码子偏好指数均极显著相关(P<0.01),相关系数分别为0.786、0.686和0.617,与有效密码子数的相关性未达显著水平。第2轴显示了19.28%的差异,且仅与有效密码子数极显著相关(r=0.635)。确定了刺五加功能基因的17个最优密码子。结论刺五加的功能基因偏好使用以A或T碱基结尾的密码子,其使用模式受选择和突变的共同影响。; 邢朝斌吴鹏修乐山周秘; 关键词：刺五加密码子用法功能基因

应用SEFA-PCR扩增刺五加内生青霉鲨烯合酶基因的旁邻序列: 2012年; ①目的克隆刺五加内生青霉Penicillium minioluteum P116-1a鲨烯合酶(squalene synthase,SS)基因的旁邻序列。②方法根据已经获得的P.minioluteum P116-1a SS DNA序列设计特异性性引物,采用SEFA-PCR(self-formed adaptor PCR)扩增其3'和5'末端未知序列。③结果 3'末端扩增获得长约5 000 bp的片段,5'末端扩增获得长约3 000bp的片段。④结论首次应用SEFA-PCR技术扩增获得P.minioluteum P116-1a SS基因的末端序列,为进一步研究该基因对刺五加皂苷含量的作用机制奠定了基础。; 朱金丽何闪周秘修乐山邢朝斌; 关键词：染色体步移

刺五加细胞色素P450基因的克隆与表达分析被引量：2: 2014年; 根据已报道的人参、三七等植物的细胞色素P450(Cytochrome P450,P450)基因的cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加P450基因的cDNA全长序列,并分析其在不同生长发育时期和器官中的表达情况。结果显示,克隆了全长为1 410 bp的刺五加P450基因的cDNA序列,该基因编码469个氨基酸残基组成的蛋白质。GenBank登录号为KF498590,与人参、三七的P450氨基酸序列一致性分别为91.5%和90.4%。刺五加的P450基因在不同生长发育时期和器官中均有表达,但表达量具有显著差异(P<0.05)。最大表达量出现在盛花期,为最低表达量(萌芽期)的1.26倍。各器官中,叶片的表达量最高,是最低量幼茎的1.49倍。; 邢朝斌吴鹏李非非刘岩周秘修乐山; 关键词：刺五加细胞色素P450 克隆

珍稀植物跳舞草愈伤组织的诱导被引量：1: 2014年; ①目的筛选出跳舞草外植体的最佳消毒方案及愈伤组织诱导的最佳条件。②方法以跳舞草的叶片为实验材料,利用离体培养技术,分析了不同消毒时间和培养条件对跳舞草愈伤组织诱导的影响。③结果外植体最佳的消毒方案为:75%的酒精消毒30s;愈伤组织诱导的最佳条件为:MS,NAA:0.02 mg/L,BA:2 mg/L,糖:30 g/L,琼脂:6 g/L。④结论为进一步建立跳舞草组培快速繁殖体系奠定了基础。; 周秘柴丽花李非非龙月红邢朝斌; 关键词：跳舞草

刺五加肌动蛋白基因的克隆和表达稳定性分析被引量：8: 2013年; 目的克隆刺五加Eleutherococcus senticosus的肌动蛋白(actin,ACT)基因并使其成为可用的内参基因。方法运用RT-PCR法克隆ACT基因的部分序列,并以其为内参基因进行半定量PCR和real-time PCR分析。结果克隆了长度为1 031bp的刺五加ACT基因,推测其编码343个氨基酸,与光皮桦Betula luminifera、陆地棉Gossypium hirsutum、茶树Camellia sinensis的ACT氨基酸序列同源性分别为99.42%、98.83%、98.54%。刺五加ACT基因在不同器官和不同生长发育时期的表达量基本恒定,以其为内参基因的半定量PCR和real-time PCR均具有良好的扩增效果和重现性。结论首次分离并报道了刺五加ACT的cDNA克隆,证实该序列可以作为基因表达分析的内参基因,建立了其real-time PCR反应体系。; 邢朝斌龙月红修乐山柴丽花周秘; 关键词：刺五加肌动蛋白基因实时定量PCR CDNA克隆

刺五加内生青霉鲨烯合酶蛋白表达和定位: 2014年; 目的:对刺五加的内生菌青霉属Penicillium minioluteum P116-1a的鲨烯合酶(Squalene synthase,PmSS)进行原核表达和荧光定位。方法:将PmSS基因连接pET-30a(+),转化BL21(DE3)后诱导表达,通过SDS-PAGE分析表达效果。利用荧光表达载体pDsRed2-N1对PmSS蛋白定位。结果:成功构建了PmSS基因的体外表达载体pET-30a-PmSS,在BL21(DE3)能表达出约60 kDa的蛋白。温度为30℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L时的表达量最高。荧光定位结果显示,PmSS呈点状或面状集中分布于内质网上。结论:获得了PmSS重组蛋白并确定了PmSS的表达部位,为进一步研究P.minioluteum提高刺五加皂苷含量的机制奠定基础。; 何闪朱金丽周秘邢朝斌; 关键词：刺五加 PENICILLIUM 荧光蛋白

刺五加叶绿体基因组密码子的用法分析被引量：20: 2013年; 目的:分析刺五加叶绿体基因组密码子的使用方式及其影响因素。方法:以刺五加叶绿体基因组的52条编码基因为材料,利用CodonW和SPSS软件进行多元统计分析和对应性分析。结果:刺五加叶绿体基因组密码子3个位置GC的量依次为46.46%,38.26%,29.88%,其中GC1与GC2呈极显著相关关系(P<0.01),GC12与GC3的相关系数为0.205,未达到显著水平。同义密码子的相对使用频率(relative synonymous codon usage,RSCU)>1的密码子共30个,其中29个以A或T碱基结尾。对应性分析的结果表明:第1轴显示了10.35%的差异,与有效密码子数(effective number of codons,ENC)和GC3显著相关,相关系数分别为-0.288,0.353;确定了刺五加叶绿体基因组的16个最优密码子。结论:刺五加叶绿体密码子第3位偏好以A或T碱基结尾,密码子使用模式受选择和突变及其他因素共同影响,其中选择的作用略大。; 邢朝斌曹蕾周秘修乐山; 关键词：刺五加密码子用法密码子偏好性

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