唐倩
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 人呼吸道合胞病毒M蛋白非复制型重组腺病毒的构建和鉴定被引量：2
- 2008年
- 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)基质蛋白(matrix protein,M)在RSV形态发生上具有重要作用,因含有CTL及CD4+T细胞抗原表位,在疫苗研究上具有一定意义。为此,应用RT-PCR方法从感染RSV的HEp-2细胞中扩增获得M蛋白基因,构建了含M基因的非复制型重组腺病毒并进行表达和鉴定。基因序列分析显示RSV M基因仅有一处碱基发生错义突变。获得的非复制型重组腺病毒FGAd/RSVM感染293细胞,观察到细胞出现CPE,RT-PCR发现M基因有转录,Western blotting及间接免疫荧光分析检测到M蛋白。成功克隆A亚型RSV Long株M基因,并获得一株可表达A亚型RSV M蛋白的非复制型重组腺病毒FGAd/RSVM,可用于体内研究观察其免疫效果及免疫保护作用。
- 尚智何金生张梅虞结梅陆燕燕谢灿唐倩魏薇
- 关键词：人呼吸道合胞病毒M蛋白
- 呼吸道合胞病毒分泌型融合蛋白的真核表达和纯化
- 2009年
- 目的研究人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial viruse，RSV）分泌型融合蛋白（secreted fusion protein，sV）基因在杆状病毒中的表达及纯化。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物，以PCR方法将F蛋白基因的跨膜区和胞质区核酸序列替换为6×His核酸序列，获得COOH’端带有His标签的重组SF-His蛋白编码基因，利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统，构建可表达sF蛋白的重组杆状病毒，用脂质体Cellfeetine reagent转染sf9细胞，实现sF在sf9细胞中的表达，Ni柱亲和层析纯化sF蛋白。结果成功获得了sF-His编码基因，构建的重组杆状病毒可高效表达sF，Ni-柱纯化后sF的浓度为1．084mg／ml，纯度达90％以上。结论杆状病毒系统是制备sF的有效方法，纯化的sF蛋白为RSV新型疫苗及单克隆抗体和诊断试剂等研究奠定了基础。
- 付远辉魏薇何金生郑娴娴王小波唐倩张梅屈建国洪涛
- 关键词：糖蛋白类
- 人呼吸道合胞病毒微型复制子功能的初步研究
- 目的:人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)广泛分布于世界各地,是导致婴幼儿严重下呼吸道感染最重要的病毒病原,目前尚无有效的治疗方法。利用RNA病毒反向遗传学操作获...
- 唐倩
- 关键词：人呼吸道合胞病毒增强型绿色荧光蛋白
- 文献传递
- 人呼吸道合胞病毒微型复制子的构建被引量：1
- 2009年
- 【目的】构建RSV微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。【方法】构建含RSV病毒前导序列(Leader,genomic promoter,Le)、转录起始信号(gene start,GS)、多克隆酶切位点、转录终止信号(gene end,GE)和尾随序列(Trailer,antigenomic promoter,Tr)的基因片段GSGE,通过引入T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase,T7RNP)启动子、克隆入载体px8δT和插入增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)等多步操作,获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP。同时构建可表达大蛋白(large protein,L)的质粒pcDNA3.1/L及表达转录延长/转录终止抑制因子(M2ORF1protein,M2-1)的质粒pcDNA3.1/M2-1。通过脂质体法共转染RSV微型复制子质粒及四种RSV核壳体蛋白质粒至可表达T7RNP的BSRT7/5细胞系,倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况。【结果】成功构建了px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP及pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1,五质粒共转染BSR T7/5细胞,倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光的表达。【结论】构建的RSV微型复制子具有转录和复制功能,将有助于进一步开展以RSV反向遗传操作为基础的RSV疫苗研发及药物筛选。
- 唐倩虞结梅何金生张梅魏薇付远辉郑娴娴王小波张莹洪涛
- 关键词：人呼吸道合胞病毒增强型绿色荧光蛋白
- 人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白非复制型重组腺病毒的构建和表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建含有A亚型人呼吸道合胞病毒（Human Respiratory Syneytial Virus，RSV）融合糖蛋白（Fusion glycoprotein，F）基因的非复制型第一代重组腺病毒（First generation adenovirus vector，FGAd），并研究F基因在重组腺病毒中的表达。方法利用限制性内切酶Xho I和Hind Ⅲ从质粒pGEM3zf-F中切下目的基因F，克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV，再与pAdeasy-1在大肠埃希菌BJ5183中进行同源重组，鉴定正确后，用脂质体法转染293细胞，Western Blot鉴定目的基因表达。结果获得了表达RSVF基因的非复制型重组腺病毒FGAd／F，Western Blot检测到F基因的表达。结论获得一株可表达A亚型RSVF的非复制型重组腺病毒FGAd／F，可用于体内研究观察其免疫效果及免疫保护作用。
- 袁媛何金生付远辉张梅唐倩李栋梁魏薇屈建国洪涛
- 关键词：重组腺病毒呼吸道合胞病毒
