孔凡慧
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 前列腺按摩后尿液中融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA的定量检测在前列腺癌诊断中的应用被引量：1
- 2010年
- 目的:建立实时荧光定量RT-PCR检测前列腺按摩后尿液中融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA的方法学并探讨T1E4 mRNA在前列腺癌临床诊断中的应用价值。方法:前列腺癌(PCa)患者46例,前列腺增生(BPH)患者44例,收集前列腺按摩后尿液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,实时荧光定量RT-PCR方法分别检测PSA mRNA和T1E4 mRNA,以T1E4 mRNA/PSA mRNA比值表示融合基因T1E4 mRNA的含量。比较PCa组与BPH组尿液T1E4 mR-NA的含量(T1E4 mRNA/PSA mRNA比值),用受试者工作曲线(ROC)评价尿液T1E4 mRNA含量对前列腺癌的诊断价值,并分析尿液T1E4 mRNA阳性率与前列腺癌骨转移及Gleason评分之间的关系。结果:PCa组尿液T1E4 mRNA含量(9.6×10-3,0～12.6)明显高于BPH组(0,0～8.5×10-3)(P<0.01)。尿液T1E4 mRNA含量诊断前列腺癌的曲线下面积(AUC)为0.810(95%CI:0.719～0.902),以1.0×10-5为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异性分别为71.7%和81.8%。尿液T1E4 mRNA阳性率与前列腺癌骨转移及Gleason评分之间无关。结论:前列腺按摩后尿液中融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA含量检测对前列腺癌诊断有较高的敏感度和特异性,作为前列腺癌早期诊断指标具有良好的应用前景。
- 沈默孔凡慧陶志华戴美洁陈伟吴秀玲
- 关键词：尿液前列腺癌融合基因
- 尿液中PCA3 mRNA和融合基因TMPRSS2:ERG mRNA的检测在前列腺癌早期临床诊断中的应用被引量：6
- 2011年
- 目的研究前列腺按摩后尿液中PCA3 mRNA联合融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA的定量检测在早期前列腺癌临床诊断中的应用价值。方法收集前列腺癌(PCa)患者53例和前列腺增生(BPH)患者37例,收集前列腺按摩后尿液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,用实时荧光定量RT-PCR的方法检测PSA mRNA、PCA3 mRNA和T1E4 mRNA的含量,以PSA mRNA来校正尿液中的前列腺癌细胞。以PCA3 mRNA/PSA mRNA表示PCA3 mRNA的含量,以T1E4 mRNA/PSA mRNA表示融合基因T1E4 mRNA的含量。用ROC曲线对T1E4 mRNA及PCA3 mRNA诊断PCa的性能进行分析。结果尿T1E4 mR-NA/PSA mRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.802(95%CI:0.709～0.895),以0.007为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度分别为56.6%和94.6%。尿PCA3 mRNA/PSA mRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.646(95%CI:0.533～0.758),以0.001为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度为47.2%和73.0%。PCa组PCA3 mRNA(P=0.009)及T1E4 mRNA(P=0.000)的含量均高于BPH组,T1E4 mRNA联合PCA3 mRNA定量检测的敏感度为81.1%,比单独应用PCA3 mRNA和T1E4 mRNA检测的敏感度分别提高了33.9%和24.5%。结论前列腺癌按摩后尿沉渣中可以检测到TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA,联合PCA3 mRNA和T1E4 mRNA两个指标定量检测,可以显著提高检出前列腺癌的敏感度。此联合检测方法可以用于早期的前列腺癌诊断。
- 戴美洁孔凡慧沈默周武陈伟吴秀玲翁志梁陶志华
- 关键词：前列腺癌融合基因尿液
- 前列腺按摩后尿液中融合基因TM-PRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA的定量检测在前列腺癌诊断中的应用
- 沈默孔凡慧陶志华戴美洁陈伟吴秀玲
- 前列腺按摩后尿液中PCA3mRNA联合融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4mRNA的定量检测在前列腺癌早期临床诊断中的应用
- 戴美洁孔凡慧陶志华
- 前列腺癌标本库的初步建立及其应用价值被引量：3
- 2011年
- 目的有计划地建立前列腺癌标本库，摸索科研标本库建立和管理的合理操作流程，为系统开展前列腺癌研究打好基础。方法采集前列腺癌患者初诊和治疗随访过程中及前列腺增生患者的静脉血及尿液标本，处理得到各类标本保存于一80℃冰箱。获取患者新鲜组织标本，保存于液氮，并收集肿瘤组织石蜡标本保存。结果标本库共计纳入184例病理确诊的前列腺癌患者、294例前列腺增生患者及3例PIN患者，各类标本均按预期方案处理及保存。以标本库工作为基础，课题组进行了大量的科研工作，取得了一定成果。结论前列腺癌标本库建立的流程已基本成熟，初步建立的标本库能为各项研究提供标本和相关资料来源。
- 沈默陶志华陈伟吴秀玲许刚胡王强张晓霞孔凡慧
- 关键词：前列腺癌标本库数据库
- PCA3基因启动子多态性快速分型的DHPLC法建立
- 2010年
- 目的建立DHPLC技术分析PCa特异性PCA3基因启动子多态性的技术平台。方法在PCA3基因启动子区域设计1对引物，以本室先前已经建立的11种（C2T6、C2T5、C3T5、C2T5／C2T6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7）已知多态性的PCA3基因启动子的克隆质粒为标准品，通过优化DHPLC检测体系，建立其多态性克隆质粒的标准图谱。采用完全随机设计，从200例病理确诊为PCa患者中选取147例，对其PCA3基因启动子的扩增产物进行DHPLC分析，比较各标本洗脱峰与标准克隆质粒的DHPLC图谱，以判断临床标本PCA3基因多态性类型，并对这些基因型再行克隆测序予以验证。结果通过克隆质粒优化DHPLC检测体系，最适检测体系为：含44．3％A洗脱液（0．1mol／L TEAA、0．025％ACN）和55．7％B洗脱液（0．1mol／L TEAA、25％ACN）的起始洗脱梯度，含35．3％A洗脱液和64．7％B洗脱液的终止洗脱梯度，柱温53℃，流速：0．9ml／min，在该条件下DHPLC用8种杂合型克隆质粒（C2T5／C2T6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7）进行重复性验证，结果显示，同一多态性色谱峰中2峰的出峰时间之差的批间CV值在0％～6．67％之间。11种克隆质粒多态性标本仅通过1～2次洗脱，就能根据峰型和各峰的出峰时间将其区分开。147例PCa患者中，144例DHPLC检测结果和克隆测序结果一致（Kappa=1，P=0．000），并出现3种新的峰型，经克隆测序验证为3种新的多态性（C3T5／C1T6、C2T5／C1T8、C3T5／C2T7）。结论成功建立的DHPLC分析PCA3基因启动子多态性的技术方法，可对PCA3基因启动子多态性进行基因型别鉴定。该方法具快速、准确、经济、高通量、重复性好、自动化等特点，为进一步研究PCa基因多态性提供了技术平台。
- 胡王强孔凡慧张晓霞周武陈兵华胡理怀陶志华
- 关键词：前列腺肿瘤
