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孔华: 作品数：104 被引量：389H指数：9; 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项海南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>

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油莎豆块茎油脂积累相关基因CeWRI1的克隆与功能分析: 2022年; 起源于非洲的油莎豆是迄今唯一已知在块茎中高水平积累油脂的新型草本油料作物。基于我国当前食用植物油和生物柴油原料供给紧张的局面,挖掘参与油莎豆块茎油脂积累的关键基因具有重要的理论意义和应用价值。WRI1(WRINKLED1)隶属于AP2/ERF转录因子家族,是一类被证实在油料种子发育过程中控制碳源由糖向油分配的关键基因。本研究采用RT-PCR技术从油莎豆的块茎中分离到一个WRI1同源基因(CeWRI1),该基因的编码区为1116 bp,预测编码371 AA,其理论分子量为41.58 kDa,等电点为5.76,总平均疏水指数为–0.750,不稳定系数为60.75,细胞核定位,这与其转录调控功能是一致的。与拟南芥WRI1类似,序列分析显示CeWRI1含有2个保守的AP2结构域(PF00847)、1个VYL基序和1个14-3-3/BPM结合基序;相比AP2结构域和N端,其C端序列的变异较大,但包含与蛋白降解相关的PEST基序。qRT-PCR分析显示,CeWRI1在叶片、叶鞘、根、匍匐茎和块茎等主要组织中都有表达,且其在起始期、膨大初期、膨大中期、膨大晚期和成熟期等不同发育时期块茎中呈现先降后升的J型表达趋势,表达丰度最高的为成熟期,最低是膨大中期,这与油脂的积累模式大体一致。在烟草中的功能分析显示,CeWRI1的异源瞬时过表达可显著提高叶片的油脂(甘油三酯)含量,这进一步证实该基因具有油脂调控功能。上述结果表明CeWRI1是调控油莎豆块茎高水平积累油脂的关键基因之一,这不仅为进一步揭示油莎豆块茎油脂积累的调控机制奠定了坚实的基础,也为后期的品种改良提供了宝贵的基因资源。; 徐硕邹智肖艳华张丽孔华孔华郭安平; 关键词：甘油三酯 QRT-PCR

水稻4个生长时期茎部可培养内生菌多样性分析被引量：7: 2015年; 为了解水稻不同生长时期内生细菌的动态变化及其多样性,以水稻品种明恢63(MH63)为研究对象,种植于海南省三亚市连作水稻试验田中,分别于水稻幼苗期、分蘖期、开花期和结实期(2014年1月到4月份)分离茎部可培养内生细菌。结果表明:共获得了细菌域4个门6个纲51个属99个种共计529株分离菌株,其中幼苗期分离到23个属33个种,分蘖期分离到30个属44个种,开花期分离到15个属20个种,结实期分离到20个属29个种。上述4个生长时期均分离到伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)、草螺菌属(Herbaspirillum)和黄杆菌属(Flavobacterium),且以伯克霍尔德氏菌属为优势菌属。多样性指数排序:分蘖期>幼苗期>结实期>开花期;优势度指数排序:开花期>结实期>幼苗期>分蘖期。水稻茎部内生细菌具有较丰富的遗传多样性,不同生长期的种群数量、优势度存在差异,开花期优势菌群集中,优势属突出,优势度较高;而分蘖期优势度较低,但种群种类较丰富,且分布均匀。; 王雪君贾瑞宗郭运玲徐林左娇孔华郭安平; 关键词：水稻内生细菌多样性

番木瓜干旱胁迫相关CpDHN基因的克隆与原核表达被引量：3: 2020年; 本研究基于转录组获得的CpDHN转录本序列,以番木瓜‘台农二号’组培苗叶片为材料,采用RT-PCR技术克隆了该基因包含完整ORF在内的425 bp cDNA序列。序列分析表明,CpDHN预测编码93个氨基酸,其理论分子量为10.50 kDa、等电点为6.62、总平均疏水指数为-1.984、核定位。除保守的K片段外,蛋白还含有1个S片段,可归为KS型脱水素。在拟南芥中的10个脱水素中,CpDHN与AtLEA8的亲缘关系最近,相似性为53.3%。值得注意的是,虽然CpDHN的编码区不存在内含子,但其3’UTR含有1个与AtLEA8类似的内含子。表达谱分析显示,该基因在根和叶片中均受干旱胁迫诱导。此外,还构建了CpDHN的原核表达载体,SDS-PAGE分析显示,该蛋白在大肠杆菌中可高效表达。这些结果为下一步的功能鉴定奠定了坚实的基础。; 郭静远郭静远孔华孔华郭运玲; 关键词：番木瓜脱水素基因克隆原核表达

菌落PCR快速扩增工业酿酒酵母基因组DNA片段被引量：7: 2010年; 针对工业酿酒酵母细胞破壁难和提取基因酵母组DNA费时长(2-3 h/样品)的问题,研究了SDS-微珠涡旋破壁的方法。以破壁液上清为模板进行菌落PCR扩增酿酒酵母南阳K基因组中铜抗性蛋白基因(cup1)片段和rDNA片段。结果表明,在不需要提取酵母基因组前提下,利用该方法能有效地扩增酵母基因组DNA片段,同时该方法也适用于对转基因酿酒酵母进行菌落PCR从而实现对转化子的准确和快速地鉴定筛选,是一种成本低和易于操作的适于处理大量样品的方法。; 阳辛凤高秋芳李锡敏郭安平孔华贺立卡; 关键词：酿酒酵母菌落PCR 破壁

转基因玉米安全性评价研究进展: 随着人类对玉米产量需求的不断增大，当前的玉米遗传育种技术已不能满足不断增长的需要。转基因技术的研究与发展为玉米遗传改良技术提供了广阔的前景。随着转基因玉米大面积商业化种植，转基因安全问题成为多方面关注的焦点。本文概述转基...; 左娇郭运玲孔华徐林周霞郭安平; 关键词：玉米转基因

硝酸银对根癌农杆菌介导的木薯遗传转化的影响: 2013年; 旨在提高木薯遗传转化效率,以成熟培养10-15 d的华南木薯SC8品种的胚状体子叶为外植体,研究硝酸银在根癌农杆菌介导的木薯遗传转化中的影响。结果表明,硝酸银对木薯SC8胚状体子叶愈伤形成有明显的抑制作用,对不定芽的分化有显著的促进作用。硝酸银的浓度在2-8 mg/L,对未经农杆菌处理的SC8胚状体子叶不定芽的分化率从58.5%提高到87.5%;愈伤组织形成率从92%下降到15.3%。对经农杆菌处理的SC8胚状体子叶不定芽的分化率从55.3%提高到85.3%;愈伤组织形成率从87.5%下降到8.5%。同时发现,经农杆菌转化后不定芽诱导所需硝酸银的最适浓度高于未经农杆菌处理的不定芽诱导所需硝酸银最适浓度,前者为8 mg/L,后者为6 mg/L。硝酸银对木薯SC8的遗传转化有促进作用。; 郭运玲尹奇孔华黄启星左娇贺立卡郭安平; 关键词：硝酸银木薯不定芽诱导

一种高效提取热带植物DNA的方法: 本发明公开了一种高效提取热带植物DNA的方法，取热带植物的叶片、根、茎或果实，粉碎，置于无菌容器中，加入本发明的裂解缓冲液，混匀；调节温度为60-70℃进行水浴反应20-40min，取反应后混合溶液离心，取上清液，加入异...; 黄启星王旭初孔华郭运玲郭安平; 文献传递

海南地区番木瓜花叶病病原的分子鉴定与多样性分析被引量：1: 2014年; 番木瓜环斑病毒(Papaya ring spot virus,PRSV)和番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)是热带、亚热带地区严重威胁番木瓜农业生产的主要病害。本研究对27份疑似番木瓜花叶病病叶样品进行分子鉴定,提取病叶总RNA,反转录获得对应的cDNA,根据PRSV病毒的CP、P1、Hc-Pro和NIb基因序列和PLDMV病毒的CP基因序列设计特异性引物进行PCR检测和测序分析。研究发现PRSV感染20例(74.1%),PLDMV感染3例(11.1%),PRSV和PLDMV交叉感染的样品1例(3.7%)。多样性分析结果表明,海南地区PRSV病毒存在3个株系,株系之间出现明显分化;海南地区PLDMV病毒与日本和台湾地区报道的PLDMV病毒株系有共同的起源。研究结果表明PRSV和PLDMV是海南地区番木瓜花叶病的主要病原,其中PRSV病毒3个株系之间P1基因同源性在95%以下,这可为后续研究构建抗PRSV和PLDMV的双价表达载体提供数据支持。; 张雨良黄启星朱丽娣孔华曾会才姜浩元刘志昕; 关键词：番木瓜 PRSV

蛋白质组学关键技术的优化改进及其在热带作物研究中的应用: 王旭初郭安平庞永奇黄启星王丹常丽丽孙勇易小平孔华郭运玲; 该项目通过优化改进已有的BPP蛋白提取方法和传统的考马斯亮蓝染色技术，得到适合于含多酚、多糖类热带作物的蛋白提取方法，并发明一种新的GAP凝胶染色技术，提高了蛋白染色的灵敏度和稳定性。同时针对热带地区高温高湿度的环境条件...; 关键词：; 关键词：蛋白质组学品种选育

CUP1为筛选标记的酿酒酵母整合型多基因表达载体的构建: 2011年; 为了赋予工业酿酒酵母对淀粉和纤维素的降解活性,提高酿酒酵母对粗木薯粉进行酒精发酵时的酒精产率;另一方面,为了解决工业酿酒酵母不适于使用营养缺陷型筛选标记对转化子进行筛选的问题,以及避免引入抗药性标记基因带来的安全性问题,构建了以抗铜蛋白基因CUP1为筛选标记的酿酒酵母整合型多基因表达载体。以载体pYES2-PMF-rDNA为基础,以新的筛选标记基因CUP1替换原有的尿嘧啶Ura-基因,得到载体pYES2M。再顺序插入葡聚糖内切酶基因eg3、葡萄糖淀粉酶基因ga1和β-葡萄糖苷酶基因bgl1,构建得到以CUP1为筛选标记的酵母整合型三价表达载体pYES2M-eg3-ga1-bgl1,其中每个基因都具有独立而完整的表达盒,包括启动子、信号肽和终止子,从而实现多基因单表达载体一次转化。; 阳辛凤徐林弓淑芳郭安平孔华贺立卡; 关键词：酿酒酵母

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