孙慧玲
- 作品数：11 被引量：40H指数：4
- 供职机构：北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金北京市农林科学院青年基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 疫苗生产工艺技术研究
- 石岗艾国光王宏俊孙慧玲李永清姚炜光徐伟民宋程聂蜂光顾铭
- 该项目在生物反应器中加入直径60～250微米的微球即微载体，扩大单位体积的比表面积，从而高密度培养Vero细胞或鸡胚成纤维细胞，大量增殖鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV），提高鸡传染性法氏囊病病毒疫苗的产量。使Vero细胞...
- 关键词：
- 关键词：生物反应器VERO细胞鸡传染性法氏囊病病毒
- 副猪嗜血杆菌EZ-Tn5转座子插入突变体库的构建及减毒株的筛选被引量：5
- 2011年
- [目的]获得副猪嗜血杆菌减毒株。[方法]应用转座子技术构建转座子插入突变体库,卡那抗性筛选阳性菌株,PCR扩增卡那特异片段去除假阳性,小鼠感染试验检测突变株毒力,并对获得的减毒株进行生物学特性检测。[结果]所获得减毒突变菌株具有与野毒株相似的增殖能力,传代后毒力稳定,遗传学特性稳定。[结论]该研究结果为进一步探讨HPS毒力因子、致病机制奠定了基础。
- 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌转座子突变体库减毒株
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白pilA基因的克隆与表达被引量：3
- 2011年
- [目的]克隆和表达副猪嗜血杆菌菌毛蛋白pilA基因。[方法]对已发表的HPS的pilA序列进行分析,合成引物,并以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS的pilA编码基因,获得目的基因片段;构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达至大肠杆菌BI21(DE3)中,进行SDS-PAGE与Western blot检测。[结果]表达的重组蛋白分子质量与预期的43 kD一致。[结论]该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。
- 叶飞张培君田德雨孙慧玲王宏俊龚玉梅贺云霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌克隆
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5基因的克隆和表达被引量：7
- 2010年
- 副猪嗜血杆菌病(Haemophilus parasuis)是规模化猪场的重要细菌性疾病之一。对已发表的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子量大约为41 kDa,利用基因工程的方法将该基因片段定向克隆至表达载体pGEX-6p-1中,诱导表达后的分子量约为67 kDa。该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。
- 叶飞张培君田德雨徐慧孙慧玲王宏俊龚玉梅贺云霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌克隆
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白TbpB基因的克隆和表达
- 2011年
- 为了克隆和表达副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白TbpB基因,试验采用基因工程的方法对已发布的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计并合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得长为1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子质量约为41 ku,将该基因片段定向克隆至表达载体pGE X-6p-1中。结果表明:诱导表达后分子质量约为67 ku,与副猪嗜血杆菌阳性血清发生了特异性反应。说明该蛋白与抗体发生了反应,有一定免疫原性。
- 叶飞张培君田德雨孙慧玲王宏俊龚玉梅贺云霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌克隆
- 副猪嗜血杆菌15个血清型标准分离株对小鼠毒力的研究被引量：8
- 2011年
- 为了确定Balb/c小鼠是否适合作为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的试验动物模型,试验用1～15血清型HPS标准菌株感染Balb/c小鼠,每只小鼠接种量为1.0×109 cfu。结果表明:用血清型1,2,5,10,12,13,14接种的5只小鼠均死亡4只,用血清型4,15接种的5只小鼠分别死亡2,3只,用血清型3,6,7,8,9,11接种的5只小鼠均没有死亡;各血清型的毒力与猪体试验的结果基本相符。说明Balb/c小鼠适合作为副猪嗜血杆菌的试验动物模型。
- 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌标准菌株小鼠毒力
- 沙门氏菌fimY基因的原核表达及禽沙门氏菌抗体检测ELISA研究被引量：4
- 2012年
- 为研发禽沙门氏菌抗体检测方法,采用大肠杆菌系统表达沙门氏菌属保守的菌毛fimY基因,纯化的目的蛋白经Western blot分析,能与免疫鸡血清和感染鸡血清产生特异性反应条带,证明该重组蛋白既有反应原性也有免疫原性。以此纯化蛋白为抗原建立了间接ELISA(fimY-ELISA)。通过检验已知沙门氏菌鸡源血清、相关非沙门氏菌鸡源血清对fimY-ELISA进行评价,发现其在敏感性方面高于快速平板凝集试验(RPA)和自制的脂多糖抗原ELISA(LPS-ELISA)、肠炎沙门氏菌抗原ELISA(SE-ELISA),但在特异性方面不如LPS抗原ELISA;在与RPA的符合率方面与LPS-ELISA、SE-ELISA基本一致。
- 陈小玲李永清孙慧玲徐福洲章振华杨兵
- 关键词：ELISA特异性
- 副猪嗜血杆菌EZ-Tn5转座子插入突变体库的构建及减毒株的筛选(英文)被引量：1
- 2011年
- [目的]获得副猪嗜血杆菌减毒株.[方法]应用转座子技术构建转座子插入突变体库,卡那抗性筛选阳性菌株,PCR扩增卡那特异片段去除假阳性,小鼠感染试验检测突变株毒力,并对获得的减毒株进行生物学特性检测。[结果]所获得减毒突变菌株具有与野毒株相似的增殖能力,传代后毒力稳定,遗传学特性稳定。[结论]该研究结果为进一步探讨HPS毒力因子、致病机制奠定了基础。
- 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌转座子突变体库减毒株
- 副猪嗜血杆菌病研究进展被引量：13
- 2011年
- 副猪嗜血杆菌(HPS)是猪上呼吸道的一种常见病原菌。在一定的条件下,可引起猪的格拉瑟病(Glasser’s disease),常与猪流感病毒并发,引起断奶前后仔猪以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等为特征的临床症状,给养猪业带来很大的损失。为了更加全面的了解该病原菌,论文就近年来副猪嗜血杆菌病的病原学、流行病学、致病机理、临床诊断和防控等方面做简要的概述。
- 叶飞贺云霞徐慧孙慧玲王宏俊龚玉梅张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌病原学流行病学致病机理
- 副猪嗜血杆菌aroA基因自杀载体的构建被引量：1
- 2011年
- 为了构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变自杀载体,试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD,根据副猪嗜血杆菌aroA基因设计PCR特异性引物,上游引物5'末端加BamHⅠ位点,下游引物5'末端加SalⅠ位点,PCR扩增aroA基因后连接到T载体,经酶切位点分析发现在aroA中有1个HindⅢ位点,将氯霉素表达盒通过该位点,构建T-aroA-cm载体,再通过BamHⅠ和SalⅠ将aroA-cm定向克隆到自杀质粒pSD中。结果表明:成功获得aroA基因插入突变自杀载体。说明进一步进行同源重组,从而构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变株。
- 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅黄秀芬张莉张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌
