孙敏
- 作品数：9 被引量：15H指数：3
- 供职机构：山西大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学环境科学与工程文化科学更多>>
- 慢性镉暴露对斑马鱼卵巢组织的氧化损伤和子代发育的母源影响被引量：3
- 2017年
- 目的:采用半静态毒性实验方法,研究慢性镉暴露对性成熟斑马鱼卵巢组织抗氧化酶活性、脂质过氧化水平的影响及其母源传递毒性效应。方法:依据前期测定的96 h LC50,参考国家渔业标准,设置5个镉处理组(0.058、0.116、0.232、0.580、1.160 mg/L)和1个对照组,镉暴露21 d后,对卵巢组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性及脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量进行测定,并对其受精率、F1代胚胎孵化率及96 hpf幼鱼体长进行统计分析。结果:不同浓度镉暴露均导致卵巢组织SOD、CAT和GPx活性显著降低、MDA含量显著升高并呈浓度依赖效应。子代母源毒性分析显示,与对照组相比,0.232和0.580 mg/L浓度组受精率均显著下降,0.232 mg/L浓度组F1代胚胎孵化率显著降低;各浓度组受精后96 h幼鱼体长与对照组相比有显著性差异,且随着镉浓度的增加体长显著变短。结论:慢性镉暴露导致斑马鱼卵巢组织抗氧化酶活性受到显著抑制,对组织和细胞造成严重氧化损伤,并通过母源传递导致子代发育的毒性效应。
- 刘洋王兰孙敏
- 关键词：斑马鱼卵巢
- 斑马鱼DrSpin-1基因的克隆和特征分析
- 2012年
- Spin蛋白家族是具有Spin/Ssty保守结构域并在配子发生过程中发挥关键作用的一类分子。研究利用简并引物PCR,从斑马鱼成熟卵母细胞SMART cDNA文库中筛选到260 bp的DrSpin-1和DrSpin-2部分序列,经序列同源性比对,斑马鱼DrSpin-1的部分氨基酸序列与银鲫CagSpin一致性高达81%。利用RACEPCR从该cDNA文库中获得斑马鱼DrSpin-1的全长cDNA序列。序列分析表明,DrSpin-1全长cDNA为1082 bp,开放阅读框771 bp,编码257个氨基酸,具有三个Spin/Ssty保守域,8个可能的磷酸化位点,初步确定斑马鱼DrSpin-1是Spin基因家族成员。斑马鱼DrSpin-1蛋白与已报道的鱼类Spin蛋白多重序列比对表明,DrSpin-1蛋白与银鲫CagSpin蛋白同源性最高。可以推测克隆得到的斑马鱼DrSpin-1与已知功能的银鲫CagSpin具有相近的表达谱和生物学功能,可能在配子发生和受精过程中发挥重要作用。
- 孙敏王晓磊桂建芳
- 关键词：斑马鱼基因克隆分子特征
- 河南华溪蟹nanos1、nanos2、piwi基因部分序列的克隆及表达特征被引量：1
- 2020年
- 为获取河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)nanos1、nanos2和piwi基因的表达特征,在前期河南华溪蟹卵巢组织转录组测序的基础上,对生殖相关基因nanos1、nanos2和piwi进行了克隆和分析,首次获得了河南华溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的部分cDNA序列。利用半定量PCR获取了河南华溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的组织表达谱特征和在卵巢发育过程中的表达变化规律。研究结果显示,nanos1基因在卵巢、精巢、鳃、心和肌肉中均有表达;nanos2基因在卵巢、精巢、副性腺、心脏、肠和肌肉中有较高表达,且卵巢中表达量高于精巢中表达量;piwi基因特异表达于卵巢和精巢。卵巢发育中3个基因的表达时序研究显示,nanos1基因从卵巢发育的增殖期、小生长期、大生长期到成熟期表达量逐渐升高,与之相反,nanos2和piwi基因的表达呈现相反的趋势。这些研究结果将为河南华溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的功能分析奠定基础。
- 刘俊卿孙敏王兰
- 关键词：PIWI克隆
- 摘除眼柄对河南华溪蟹蜕皮激素与几丁质酶含量和β-NAGase活性的影响被引量：4
- 2014年
- 为探索摘除眼柄对河南华溪蟹蜕皮机制的影响,采用灼伤挤压法摘除眼柄后,运用ELISA技术检测了河南华溪蟹血淋巴中蜕皮激素的含量和表皮组织中几丁质酶的含量,同时用比色法测定了表皮中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(β-NAGase)的活性。结果显示,摘除眼柄后河南华溪蟹血淋巴中蜕皮激素的含量出现先升高后下降的总趋势,在摘除眼柄96 h时,血淋巴中蜕皮激素含量上升到最大值[♂:(23.25±4.56)ng/L;♀:(35.75±7.15)ng/L]。表皮中几丁质酶的含量在摘除眼柄后亦出现先升高后下降的变化趋势,在摘除眼柄48 h达到最大[♂:(16.29±3.91)ng/L;♀:(30.49±5.28)ng/L],到120 h仍显著高于对照组。表皮中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(β-NAGase)的活性在摘除眼柄后持续升高,在144 h时达到最大[♂:(400.44±21.00)U/g;♀:(216.94±23.97)U/g],后逐渐下降,但依旧高于对照组。研究推测,摘除眼柄通过增加蜕皮激素含量、几丁质酶的含量和β-NAGase的活性来促进河南华溪蟹蜕皮。实验将为进一步研究甲壳动物蜕皮生长的调控机制提供新的理论基础。
- 裴思慧落继先邹恩民孙敏刘娜井维鑫王兰
- 关键词：蜕皮蜕皮激素几丁质酶N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶
- 动物生物学虚拟仿真实验“斑马鱼胚胎发育重要阶段观察”的建设与应用探索
- 2023年
- 动物生物学实验是生物科学专业的基础实验课程。为了提高动物生物学实验教学质量,更直观、形象、深入地展示与讲解多细胞动物起源于单细胞动物的生物发生律,本研究本着“能实不虚、以虚补实、虚实结合”的原则,结合实验教学经验与科研项目成果,建设了“斑马鱼胚胎发育重要阶段观察”虚拟仿真实验,并将之应用于动物生物学实验教学。该虚拟仿真实验实现了动态观察斑马鱼胚胎发育重要阶段的全过程,具有动静结合、阶段与过程结合、虚实结合的“三结合”特色,获评首批“国家级虚拟仿真一流课程”。
- 王兰王茜张左兵孙敏刘娜贾如董峰许鹏杨映娟落继先李涌泉马文丽
- 关键词：斑马鱼胚胎发育虚拟仿真实验动物生物学
- 急性镉暴露对斑马鱼早期胚胎发育的毒性效应被引量：2
- 2019年
- 为研究急性镉暴露对斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎发育的毒性效应,设置了6个镉浓度组(0,4.44,8.90,17.80,26.70,35.60μmol/L),分别对2,6,10,24 hpf(hour post-fertilization)胚胎进行了检测,分析了镉暴露后各个发育阶段胚胎死亡率和畸形率的变化,以及MDA含量和SOD活性的改变。结果显示,2 hpf的胚胎在不同浓度镉暴露下其死亡率未见明显变化(P>0.05),而6,10,24 hpf的胚胎在镉浓度高于8.90μmol/L时其死亡率极显著增加(P<0.01);畸形表型统计分析显示,镉浓度高于8.90μmol/L时,2,6,10,24 hpf胚胎畸形率均极显著性升高(P<0.01)。进一步检测2,24 hpf胚胎的MDA含量和SOD活性,结果表明,镉暴露后早期胚胎MDA含量均随镉浓度升高逐渐增加,尤其在较高浓度组(17.80,35.60μmol/L)显著高于对照组;而SOD活性随镉浓度升高发生显著变化。由此推断,急性镉暴露对早期斑马鱼胚胎发育具有较强的毒性作用,并造成了严重的氧化损伤。
- 杨瑞瑞王兰孙敏申萍
- 关键词：斑马鱼胚胎镉
- 河南华溪蟹生殖调控分子VASA的原核表达、抗体制备及免疫鉴定
- 2018年
- 为了研究生殖调控分子VASA在河南华溪蟹性腺发育过程中的表达模式和功能,本研究制备了VASA蛋白特异的多克隆抗体。选取河南华溪蟹vasa基因813 bp的特异区段,克隆到p ET32a载体,构建了原核表达载体p ET32a-Shvasa,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达和SDS-PAGE检测。结果显示,47 ku的VASA融合蛋白在菌液上清液中大量存在。VASA融合蛋白经Ni-NTA His-Bind亲和层析柱分离纯化后,免疫新西兰大白兔,制备了河南华溪蟹VASA蛋白的多克隆抗体。ELISA检测显示,VASA蛋白多克隆抗体的效价高达1.0×105。进一步通过免疫吸附实验和Western blot方法鉴定抗体特异性,研究表明,获得的多克隆抗体不仅能识别VASA融合蛋白,而且能特异识别河南华溪蟹卵巢中的天然VASA蛋白。研究为鉴定河南华溪蟹及其他蟹类生殖细胞提供了有效手段,为进一步解析十足目动物VASA蛋白的功能提供了分子基础。
- 杜晓琳王兰孙敏
- 关键词：原核表达抗体制备
- 银鲫卵母细胞Spindlin基因的表达特征及其功能分析被引量：4
- 2012年
- 在卵母细胞成熟过程中,Spindlin与纺锤体微管蛋白相互作用,在配子到胚胎的过程中具有调节细胞周期的作用。前期研究表明,银鲫Spindlin(CagSpin)与微管蛋白相互作用,并与减数分裂的纺锤体共定位。在成熟过程中,CagSpin被磷酸化,在卵母细胞受精和卵胚转换中发挥重要的作用。研究通过对激素诱导后的卵母细胞进行追踪,采用RT-PCR和Western-blot分析,揭示卵母细胞在完成成熟的过程中,CagSpin持续大量表达。采用体外诱导卵母细胞成熟技术和显微注射的方法,揭示过量表达CagSpin导致胚泡(Germinalvesicle,GV)不能破裂,卵母细胞成熟过程被抑制。这些结果表明,CagSpin在卵母细胞成熟过程中发挥着关键的作用,同时为深入研究CagSpin的功能提供依据。
- 孙敏王兰桂建芳
- 关键词：卵母细胞成熟体外诱导过表达
- Spindlin在银鲫卵母细胞中磷酸化修饰分析被引量：3
- 2011年
- Spindlin最早在小鼠中被发现和命名,是MOS/MAP激酶通路的底物。实验室之前在银鲫卵母细胞中克隆并分离鉴定出具有同小鼠相似序列特征和表达特性的Spindlin,命名为CagSpin(Carassius auratus gibelio Spindlin)。CagSpin是一个母源表达的蛋白,存在于卵母细胞生长、减数成熟以及早期胚胎发育过程中。研究结合去磷酸化和Western blot分析,检测到CagSpin在卵母细胞中发生磷酸化。进一步通过毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)对蛋白水解后的氨基酸残基进行分析,确定在银鲫卵母细胞中CagSpin蛋白的苏氨酸残基(threonine,Thr)被磷酸化,这一结果为CagSpin在卵母细胞中的磷酸化修饰提供了证据,表明磷酸化的CagSpin在银鲫卵子发生、卵母细胞成熟和卵—胚转换中可能起了重要作用。
- 孙敏王小磊桂建芳
- 关键词：磷酸化去磷酸化卵子发生卵母细胞成熟
