孙涛
- 作品数：12 被引量：59H指数：5
- 供职机构：重庆出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目质检公益性行业科研专项项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法的建立及应用被引量：3
- 2015年
- 以柑橘溃疡病菌特异性高的假定蛋白基因(登录号:AE008923.1)为靶标,设计并筛选4条引物来特异性识别靶标序列中的6个独立区域,建立柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法。该方法利用实时浊度仪检测反应过程中产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对LAMP整个反应过程的实时监控。从镁离子浓度、甜菜碱浓度、d NTPs浓度、引物浓度和反应温度5个变量参数对LAMP检测体系进行优化,并对方法的特异性、灵敏度、稳定性及实际样品检测效果进行评价。结果显示,该体系经优化后稳定性良好,可在66℃恒温条件下,60 min内完成检测;DNA检测下限可达0.02 ng/μL,灵敏度与荧光定量PCR方法相同,比常规PCR方法高1个数量级;能快速、准确地对田间疑似样品进行检测,与荧光定量PCR方法的检出情况一致,没有漏检。结果说明柑橘溃疡病菌实时浊度LAMP检测方法操作简便、所需时间短,特异性与灵敏度高,为柑橘溃疡病菌的快速筛查提供较好的途径。
- 封立平孔德英孙涛孙冬纪瑛王简
- 关键词：柑橘溃疡病菌
- DNA条形码技术应用于人参鉴定被引量：16
- 2013年
- 人参(Panax ginseng C.A.Meyer),被人们称为"百草之王",是国内外常用的珍稀名贵中草药和高级滋补品,濒临灭绝,是急需进行资源保护的珍贵物种。随着中草药市场的国际化,由于利益的驱动,市场上伪混品屡见不鲜,对其正确鉴定就成为进行资源保护的首要条件。国内外学者对人参等药用植物资源的鉴定和可持续利用进行了广泛研究。DNA条形码(DNAbarcoding)技术是分子鉴定的最新发展,即通过比较一段或几段通用DNA片段,对物种进行快速、准确的识别和鉴定,是近年来生物分类和鉴定的研究热点,在物种鉴定方面显示了广阔的应用前景。在分析传统的鉴定方法在适用范围和局限性的基础上,着重介绍了新兴的DNA条形码技术及其分析方法在人参鉴定上的特点及应用。
- 孙涛滕少娜孔德英宋云许谨李应国王昱李明福
- 关键词：人参DNA条形码
- 20种动植物疫病病原体新型检测技术研究及标准化应用
- 聂福平王昱李应国孔德英邓朝晖杨俊秦智锋陈兵孙涛
- 属动物传染病、病毒学及植物细菌学的学科。随着国际交往和动植物及其产品进出口贸易的增加，动植物疫病国际间传播的风险日益增大，对世界各国的人体健康、农牧业生产和生态环境安全已构成巨大威胁，世界各国都极为重视重要动植物疫病跨境...
- 关键词：
- 关键词：动物传染病病毒学
- 动物源血液中三聚氰胺的液相色谱质谱联用检测方法的建立被引量：2
- 2017年
- 为建立不同动物源血液中三聚氰胺的质谱联用检测方法,通过研究不同提取溶剂提取效率和不同固相萃取柱净化能力,进行回收率、精密度和检出限等技术要素评价。分析得到,以甲醇:水:乙酸溶液(49.5:49.5:1)作为提取试剂,MCX柱作为净化固相萃取柱,各种动物源血液样品中三聚氰胺回收率为90.0%~110%,精密度RSD为0.96%~4.64%,方法定量限为10μg·kg^(-1)。试验表明此方法灵敏度高,稳定性好,适用于动物血液样品中三聚氰胺有机物含量的检测。
- 夏明星黄均艳李光满陈忠祥孙涛李应国
- 关键词：三聚氰胺质谱联用
- 喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立
- 2017年
- 为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果表明:建立方法的特异性较强、灵敏度较高、重复性稳定性较好,最低检测限为0.2pg DNA/反应,标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.998。该方法操作简便,可用于进出境口岸喀斯特炭疽菌的检疫。
- 孙涛孔德英滕少娜邓朝晖
- 关键词：检疫
- 基于ITS2序列的黄连及其伪混品的分子鉴定被引量：8
- 2013年
- 为建立重要中药材黄连及其伪混品的DNA条形码鉴定方法,采用国际通用的条形码序列ITS2对黄连属3个物种6份样品的ITS2序列进行PCR扩增与测序,同时从GenBank下载黄连及其常见混伪品共8个物种18个样本的序列信息。采用MEGA5.05计算黄连及其伪混品的种内、种间K2P距离,并基于K2P模型构建NJ树。结果显示:ITS2种间遗传距离大于种内遗传距离,黄连属及其伪混品不同种样品分别聚类在一起,能很好地区分开来。故ITS2序列可以作为黄连及其伪混品鉴定用的条形码。
- 孙涛孔德英滕少娜陆丽华邓朝晖李应国
- 关键词：黄连DNA条形码ITS2
- 五倍子蜂蜜TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：9
- 2016年
- 为五倍子蜂蜜的鉴定检测提供技术支撑,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以五倍子树基因组中ITS基因为靶序列,设计并筛选出特异性引物探针,通过特异性、灵敏度和重复性等试验,建立五倍子蜂蜜TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果表明:建立的方法特异性良好,生成的标准曲线有良好的线性关系,相关系数(R2)为0.998,最低检测限为0.2pg DNA/反应。该方法特异性强、灵敏度高、结果可靠。
- 孙涛夏明星孔德英张学健滕少娜邓朝晖夏晓华李应国
- 关键词：蜂蜜
- 进境辣椒中低龄辣椒实蝇幼虫的鉴定被引量：2
- 2013年
- 自菲律宾进境旅客携带的小红辣椒中截获1头低龄实蝇幼虫。分别用辣椒实蝇(Bactrocera latifrons)、橘小实蝇(B.dorsalis)和地中海实蝇(Ceratitis capitata)的特异性引物lati1/lati2、PF-1/PF-2和CCCA-COL-L/CCCA-COL-R对样品总DNA进行PCR扩增和测序后,与Genbank中已知序列比对,结果表明该实蝇与Genbank中辣椒实蝇(FJ903498.1)的同源性达99%。结合形态学特征,确认截获的样本为辣椒实蝇(Bactrocera latifrons)。
- 孙涛陆丽华滕少娜邓朝晖赵野刘宏孔德英
- 关键词：低龄幼虫形态学鉴定分子生物学鉴定
- 几种苋属杂草的鉴定与分析被引量：2
- 2018年
- 重庆口岸近3年截获数据及当地调查显示,长芒苋等苋属超级农田杂草已在重庆几个重要口岸出现。基于此,对为害较严重的长芒苋、糙果苋、皱果苋等进行形态鉴定,并初步探索苋属杂草DNA条形码分子鉴定方法。
- 陆丽华孔德英孙涛滕少娜
- 关键词：分子鉴定
- 柑桔黄龙病LAMP快速检测方法的建立被引量：9
- 2013年
- 根据GenBank中柑桔黄龙病菌的外膜蛋白(OMP)基因序列,设计了一套环介导等温扩增引物,建立了柑桔黄龙病的环介导等温扩增检测方法。该方法灵敏度可达25pg/μL,与实时荧光PCR方法灵敏度相同。全部反应只需一个可控温的水浴锅在60分钟内即可完成,通过肉眼观察浊度状况即可判定结果。该方法具有简便、快速、灵敏、特异等特点,适用于基层工作站的柑桔黄龙病鉴定工作。
- 孔德英孙涛李应国滕少娜陆丽华邓朝晖
- 关键词：柑桔黄龙病环介导等温扩增
