常立文
- 作品数：304 被引量：1,702H指数：21
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程交通运输工程更多>>
- 人表面活性物质蛋白B基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建及活性检测
- 2013年
- 目的构建人表面活性物质蛋白-B（SP-B）基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒，并分析其在H441细胞中的转录活性。方法（1）以人基因组DNA为模板，PCR扩增SP-B启动子（-218／＋435bp）序列片段，并通过TA克隆方法连接到pGM-T载体上，筛选阳性克隆将目的片段进行测序。测序鉴定正确后的目的片段被克隆到荧光素酶表达载体pGL3-Basic上构建pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒，酶切及测序鉴定重组质粒；（2）将构建的pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒酶切改造，sP-B启动子克隆进pGL4．17载体构建pGL4．17-SP-B-promoter重组质粒；经酶切及基因测序确认无误后，采用脂质体法将构建的两种重组质粒分别和内参质粒pRL-TK同时转染H441细胞，检测双荧光素酶活性。结果构建的重组质粒经酶切及测序鉴定完全正确，转染H441细胞后，检测细胞裂解液萤火虫荧光素酶（firefly）及海肾荧光素酶（renilla）活性，两者比值间接反映启动子活性，pGL3-basic／pGL4．17-SP-B-promoter重组质粒的firefly／reniUa比值（2．8±1．1、66．5±3．8）较空载体质粒pGL3-basic、pGIA．17（0．2±0．1，4．3±0．4）均明显升高（t=4．182，27．419，P=0．000）。pGL4．17重组质粒firefly／renilla比值明显高于pGL3-basic重组质粒，其差异有统计学意义（t=27．712，P=0．000）。结论成功构建具有sP-B基因转录活性的pGL3-basie／pGIA．17-SP-B-promoter重组质粒，oGL4．17萤组质粒荧光素酶活性高，为后续研究SP-B基因转录调控奠定了理论基础。
- 王席娟蔡保欢李文斌刘伟王靓常立文
- 关键词：肺表面活性剂遗传学遗传学质粒遗传学
- 静脉用脂肪乳剂在早产儿应用的相关问题被引量：5
- 2016年
- 脂肪乳剂是静脉营养的重要组成部分和能量的主要来源,在新生儿静脉营养中发挥重要作用。本文对不同成分的脂肪乳剂特点及在早产儿静脉营养应用新进展作一介绍。
- 常立文容志惠
- 关键词：静脉营养新生儿脂肪乳剂
- 高氧、维甲酸对原代培养胎鼠AECⅡ和LFs增殖与凋亡的影响
- 探讨高氧暴露对原代培养的胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)、成纤维细胞(LFs)增殖和凋亡的影响以及维甲酸(RA)的保护作用机制。通过建立高氧暴露原代培养的胎鼠AECⅡ和LFs模型,以RA作为干预方式,采用流式细胞术(An...
- 李文斌常立文容志惠王华卢红艳江鸿刘伟
- 文献传递
- 高浓度氧通过抑制粘着斑激酶表达损伤早产鼠肺泡Ⅱ型细胞
- 目的：探讨高氧暴露不同时间点早产鼠肺泡Ⅱ型细胞凋亡规律及其与调控粘着斑激酶表达变化的关系。方法：原代培养早产鼠AECⅡ，将分离、培养AECⅡ暴露于高氧环境中6h、12h、24h和48h，并以空气组作为对照组，采用Anne...
- 王华常立文李文斌卢红艳汪鸿
- 关键词：早产儿疾病肺损伤细胞凋亡动物模型
- 文献传递
- 支气管肺发育不良定义和命名的演变与治疗进展被引量：3
- 2016年
- 支气管肺发育不良（ bronchopulmonary dysplasia,BPD）又称慢性肺疾病（ chronic lung disease,CLD）,是早产儿常见的呼吸系统疾病；1967年由Northway等首次报道并命名,具有独特的病因、病理及临床特征。 Northway等报道的BPD又称“旧”BPD或“经典型”BPD。由于产前糖皮质激素和出生后外源性肺表面活性物质的应用,以及保护性通气策略的实施,显著地改变了早产儿呼吸系统疾病的表现形式和预后。 Northway描述的严重 BPD已很少见,更为常见的是轻型 BPD （又称为“新”BPD）。自从1967年首次提出BPD以来,BPD的定义或命名一直存在争议。本文系统介绍了BPD定义的历史变迁和治疗进展。
- 常立文
- 关键词：支气管肺发育不良慢性肺疾病
- 胰岛素样生长因子-1对新生大鼠神经细胞氧化损伤保护作用的研究被引量：7
- 2014年
- 目的探讨氧化应激状态下，胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对新生大鼠神经细胞氧化损伤的保护作用。方法原代培养新生大鼠大脑皮层神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞，不同浓度H2O2（0-60μM）诱导氧化应激细胞模型，LDH法检测各种神经细胞损伤程度，MTT法检测各种神经细胞活力；不同浓度H2O2（0～80μM）诱导氧化应激神经元细胞模型，Western blot检测IGF-1（25ng／mL）施加前后神经元细胞内Akt的磷酸化水平。结果与未经H2O2处理组相比，不同浓度H2O2处理细胞24h后，大脑皮层神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞损伤程度均有升高、细胞活力均有降低；但神经元变化更为显著，与少突胶质细胞和星形胶质细胞相比，差异有统计学意义（均P〈0.01）；不同浓度的H2O2处理大脑皮层神经元5min后，相比于未经H2O2处理组，可见Akt磷酸化水平呈H2O2浓度依赖性降低（均P〈0.01），而在上述处理基础上加入25ng／mL IGF-1后，IGF-1能够逆转低浓度H2O2导致的神经元细胞Akt磷酸化，与未经H2O2处理组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但是对高浓度H2O2导致的Akt磷酸化作用无明显效果，其磷酸化水平均低于未经H2O2处理组（均P〈0.01）；经不同浓度的H2O2处理1h后，再加入25ng／mL的IGF-1，IGF-1处理前后Akt磷酸化水平均已恢复至未经H2O2处理时的水平（均P〉0.05）。结论大脑皮层神经元对H2O2诱导的氧化应激损伤较其他神经细胞敏感；IGF-1对皮层神经元氧化应激损伤具有保护作用。
- 刘伟李文斌陈治军容志惠常立文
- 关键词：氧化应激胰岛素样生长因子-1神经细胞新生大鼠
- 早产儿支气管肺发育不良的发生率及其危险因素分析
- 目的：回顾性分析出生胎龄小于34周早产儿BPD发生的高危因素,为其防治提供临床依据。方法：回顾性收集2006年-2009年出生胎龄＜34周早产儿相关临床资料并进行分析。结果：(1)BPD发生率为9.24％(66/714)...
- 李文斌陈燕容志惠常立文
- 关键词：早产儿疾病支气管肺发育不良发病率临床病理
- 文献传递
- Notch信号在胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞与成纤维细胞共培养体系中的表达
- 2007年
- 目的建立肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)与肺成纤维细胞(LF)共培养模型,检测胎鼠AECⅡ共培养和单独培养时Notch1、3受体表达的变化。方法应用Millipore插入式培养皿和Costar六孔板构建AECⅡ/LF共培养模型,将未接种LF的Millicell2PCF插入式细胞培养皿置于接种有AECⅡ的培养板为AECⅡ单独培养组。光镜、透射电镜观察共培养与单独培养条件下AECⅡ大体形态、超微结构;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其AECⅡ增殖活力;反转录PCR法检测其AECⅡ分泌表面活性蛋白C(SP-C)功能,并用荧光定量PCR法检测其AECⅡNotch1、3mRNA的表达。结果AECⅡ/LF共培养组较AECⅡ单独培养组稳定保持了其立方形结构和细胞表型并克隆样生长,增殖活力强。电镜下可见单独培养48hAECⅡ呈现AECⅠ样改变,而共培养AECⅡ维持其正常生理形态。与单独培养组比较,共培养组AECⅡ分泌SP-C明显增多(P<0.05),Notch1 mRNA表达显著升高(P<0.05),而Notch3 mRNA显著降低(P<0.05)。结论AECⅡ同型细胞培养时转分化为AECⅠ,不同型细胞(AECⅡ/LF)共培养抑制其转分化,此转分化过程受Notch信号分子调控。
- 汪鸿常立文卢红艳李文斌蔡成黄光焰陈燕
- 关键词：肺成纤维细胞共培养NOTCH转分化
- Matrigel胶对高氧损伤早产鼠肺泡Ⅱ型细胞黏着斑激酶表达变化及其对肺泡Ⅱ型细胞增殖和凋亡的影响被引量：5
- 2012年
- 目的 探讨人工重组基底膜Matrigel胶对高氧暴露下早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（Alveolar Epithelial CellⅡ,AECⅡ）黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）表达变化及其对AECⅡ增殖、凋亡的影响.方法 原代培养早产鼠AECⅡ,建立高氧细胞模型,采用免疫印迹分析Matrigel胶对AECⅡFAK蛋白、磷酸化FAK（ FAK- Tyr397）蛋白、FAK mRNA表达的影响,以了解Matrigel胶对FAK活性的调节作用；并进一步用细胞核增殖抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）免疫细胞化学法和原位缺口末端标记（TUNEL）法分别检测FAK抑制和激活状态下AECⅡ增殖和凋亡状况.结果 接种于Matrigel胶后,AECⅡFAK蛋白、FAK-Tyr397蛋白及FAK mRNA表达水平均明显增加；与空气对照组比较,高氧暴露12h时,AECⅡPCNA表达强度明显下降（0.1498±0.009 vs 0.0953±0.006,P＜0.05）,TUNEL标记细胞明显增多（1.232 ±0.6 Vs 13.40±3.2,P＜0.01）；接种于Matrigel胶后AECⅡ凋亡指数差异无统计学意义,而PCNA表达强度明显增强（0.1498±0.009 Vs 0.1921±0.008,P＜0.01）.与高氧组比较,高氧＋Matrigel组AECⅡPCNA表达明显增高（0.0953±0.006 Vs0.1125±0.012,P＜0.05）,凋亡指数明显下降（13.40±3.2 Vs 7.641±1.6,P＜0.05）.结论 高浓度氧抑制AECⅡ增殖、诱导其凋亡,并抑制AECⅡFAK的表达；Matrigel胶具有抑制AECⅡ凋亡、促进AECⅡ增殖作用,对高氧暴露下AECⅡ具有保护作用,且与其促进FAK表达和活化有关.
- 王华李文斌常立文
- 关键词：黏着斑激酶肺泡细胞增殖早产
- 新生儿期消化道畸形的临床分析被引量：12
- 1998年
- 本文对我院十年来新生儿病房收治的62例消化道畸形进行回顾性分析，发现肠旋转不良最多见（25．8％），其次为巨结肠、空回肠畸形、食道闭锁及十二指肠畸形等；临床表现以呕吐最多，发生率达87.1％，其出现时间、方式、内容物又因畸形类型而各异，其他症征包括腹胀（53．2％）、胎便排出异常（42.0％）、黄痘（30．6％）及便秘、腹泻等。掌握这类疾病的临床特点有助于早期诊治。本文还对辅助检查的选择及治疗措施进行了探讨。
- 陈玲刘皖君常立文
- 关键词：新生儿消化道畸形
