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排序方式：

牛转FAD3B基因胎儿成纤维细胞中内参基因的稳定性评估被引量：4: 2012年; 采用RT-PCR扩增亚麻种子(Linum usitatissimumLinn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平。以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象,评价9种候选内参基因ACTB、GAPDH、18S rRNA、UXT、PPP1R11、RPS15A、SF3A1、EEF1A2和HMBS的稳定性。根据GeNorm、NormFinder和BestKeeper 3种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序。结果显示,内参基因稳定性的综合排序为PPP1R11>EEF1A2>18S rRNA>RPS15A>GAPDH>HMBS>UXT>ACTB>SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因。稳定内参的选择可以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础。; 王子东苏建国段彪杨春荣高广琦康峰张荣芳胡晓明扈廷茂李光鹏; 关键词：转基因细胞内参基因 GENORM NORMFINDER

内蒙古白绒山羊的体细胞克隆被引量：4: 2011年; 内蒙古白绒山羊是具有悠久历史的绒肉兼用的品种,对荒漠和半荒漠环境有较强的适应性.山羊绒是来自绒山羊的细绒毛,具有极高的商业价值.为了扩大优秀绒山羊数量,本试验尝试利用体细胞克隆技术进行绒山羊克隆研究.从一只成年优秀公绒山羊中,取其耳缘组织,培养获得成纤维细胞.从当地屠宰场获得山羊卵巢,抽取卵母细胞并体外培养成熟.然后以绒山羊成纤维细胞为核供体,通过体细胞克隆技术生产克隆胚胎.核移植重构胚的融合率、卵裂率和囊胚发育率分别为75.8%,72.6%和11.6%.将处于1-至2-细胞期的胚胎移植入同期发情受体母山羊输卵管中,于2009年4月30日诞生了一只克隆绒山羊.该克隆羊的生长状态及产绒量与细胞核供体山羊相一致,呈现良好的发育态势,说明体细胞克隆技术可以成为良种绒山羊的扩繁途径.; 白春玲张立吴侠焦泽华雪莲魏著英程磊段彪康峰王建国旭日干李光鹏; 关键词：体细胞克隆绒山羊胚胎移植卵母细胞

克隆绵羊遇到的问题及其分析被引量：3: 2011年; 本研究以体外成熟不同时间的绵羊卵母细胞为胞质受体,对去核、融合、不同激活方法、卵裂率、桑/囊胚率和克隆胚受胎率等作了研究与分析.观察妊娠受体母羊的状态、胎儿体内发育情况,分析影响胎儿发育的原因.结果显示,成熟培养18h、22h、24h卵母细胞的盲吸去核率无显著性差异(84.9%,86.6%,84.3%,p>0.05),但显著高于26h组的去核率(71.7%).离子酶素联合cycloheximide(CHX)对重构胚进行激活,卵裂率显著高于A23187联合6-DMAP的激活方法(84.6%vs 63.2%,p<0.05),但二者处理对桑/囊胚率发育无显著差异(25.5%vs18.7%,p>0.05).作为胞质受体,成熟20h的卵母细胞与成熟24h和26h的卵母细胞相比,不利于重构胚的体外发育,桑/囊胚率差异显著(12.3%vs 25.3%,23.4%,p<0.05).分别以美丽奴、杜泊肉羊的体细胞为供体细胞进行克隆生产,90天以后的妊娠率为10%-17%,发育到期率为10%以上.出生羔羊的体重普遍较大.; 雪莲程磊张立白春玲吴侠董树华魏著英苏广华焦泽华段彪康峰银凤霞李俊龙李光鹏; 关键词：细胞核移植胚胎体外发育体内发育

牛卵泡抑素基因和ω-3多不饱和脂肪酸去饱和酶基因转基因载体的构建及其检测: 以转基因细胞作为供体细胞,利用核移植技术生产转基因动物是目前转基因家畜的主要技术手段。针对与牛生长发育和肉质改善相关的基因,我们构建了牛卵泡抑素基因真核表达载体、牛卵泡抑素基因与co-3多不饱和脂肪酸去饱和酶基因真核共表...; 康峰; 关键词：真核表达载体构建体细胞核移植; 文献传递

新生犊牛的关键护理提高克隆牛存活率被引量：2: 2011年; 对犊牛生产过程与产后护理方面做了大量细致的观察、管理、护理,使体细胞克隆牛出生率以及犊牛出生后存活率大大提高,新生克隆犊牛存活率高达83%.; 程磊康峰张立董树华焦泽华苏广华刘扬薛利强李光鹏; 关键词：克隆牛护理存活率

优秀肉羊克隆及遇到的问题: 克隆技术可以完整地保持优良畜种的性状，促进家畜品种改良，快速增加优秀个体数量，推动家畜生产科技化和产业化的进程。本研究分别从最好的德美、杜泊种公羊个体取得体细胞，并以此进行克隆羊生产，对克隆羊生产的整个过程进行了适当的分...; 康峰白春玲程磊苏广华银凤霞李光鹏; 关键词：肉羊克隆技术生产过程; 文献传递

转不饱和脂肪酸基因bfat-1杜泊羊细胞系的建立: n-3型的不饱和脂肪酸(PUFAs)对人类健康大有裨益，但是哺乳动物自身却不能合成n-3型PUFAs，原因在于缺乏将n-6型PUFAs转化成n-3型PUFAs的酶类。本研究从线虫中提取了fat-1基因并进行人源化处理，即...; 段彪康峰魏著英李光鹏; 关键词：转基因克隆杜泊绵羊体细胞核移植; 文献传递

牛卵泡抑素基因克隆及真核表达载体构建被引量：1: 2011年; [目的]克隆牛的卵泡抑素基因(Follistatin,FSTN)基因,构建真核表达载体。[方法]用Trizol法从牛的卵巢中提取总RNA,反转录成cDNA,用带有酶切位点牛FSTN的特异性引物扩增其完整编码区序列,连接到T载体、测序,序列无误后亚克隆入真核表达载体pIRES2-AcGFP1中,酶切及PCR鉴定载体。[结果]经酶切及PCR鉴定表明成功构建了真核表达载体pIRES2-AcGFP1-FSTN。[结论]成功构建了真核表达载体pIRES2-AcGFP1-FSTN,为促进肌肉生长的转基因优质肉牛品种培育奠定了基础。; 康峰苏广华苏建国段彪王子东李光鹏; 关键词：基因克隆真核表达载体构建

牛卵泡抑素基因克隆及真核表达载体构建: 牛FSTN基因及pMD18-T-FSTN的PCR扩增结果表明获得了预期大小片段，测序结果说明扩增的目的片段准确无误。经酶切及PCR鉴定表明成功构建了真核表达载体pIRES2-AcGFP1-FSTN。真核表达载体pIRES...; 康峰苏建国段彪王子东李光鹏; 关键词：卵泡抑素基因克隆真核表达载体; 文献传递

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康峰