张书芹
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 急性髓系白血病细胞单链DNA适体的体外筛选
- 2012年
- 目的:筛选识别急性髓系白血病M2型(acute myeloblastic leukemia M2 subtype,AML-M2)CD33+/CD34-细胞的核酸适体(aptamers)。方法:以AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞为靶细胞,正常人CD33+/CD34-细胞为反筛选细胞,采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponential enrichment,C-SELEX)技术,体外反复筛选单链DNA(single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库的适体,经聚合酶链式反应(polymerasechain reaction,PCR)扩增产生次级文库。然后将最终轮次的次级ssDNA文库克隆、测序并分析各适体的一级和二级结构。结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示:每轮筛选出来的次级ssDNA文库PCR扩增产物均可见到清晰的DNA条带。经过13轮的反复筛选,次级ssDNA文库与细胞结合的荧光强度从2.14%上升到51.12%,至第13轮趋于稳定状态。对30个克隆子序列测定结果显示:22个适体一级结构分别含有AAGTA,TATCT,AGATG和AAATT 4个保守序列,另8个适体无此保守序列。二级结构模拟结果显示:30个适体含有4种不同的茎环、凸环模拟结构。结论:C-SELEX技术可用于急性髓系白血病原代细胞适体的筛选,筛选到的AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞适体有望用于白血病的诊断与治疗。
- 朱平王光平张书芹徐雅静彭敏源银辉陈焱谭三勤陈方平
- 关键词：适体
- 铜绿假单胞菌通过MAPK信号传导通路诱导U937细胞表达IL-8被引量：3
- 2009年
- 目的探讨铜绿假单胞菌(PA)活菌对不同分化状态的U937细胞表达IL-8的诱导作用及通过MAPK信号传导通路的调控机制。方法应用人单核白血病细胞系-U937细胞,采用ELISA和RT-PCR法对PA诱导不同分化状态的U937细胞IL-8蛋白分泌和其mRNA表达进行研究,并观察MAPKs抑制剂PD98059和SB203580对IL-8表达的影响。结果PA可促进U937细胞及PMA分化的U937细胞IL-8的mRNA及蛋白分泌,而且具有明显的量效和时效关系。分别用SB203580抑制p38MAPK通路、用PD98059抑制ERK通路,均能引起抑制剂浓度依赖的IL-8的表达(P<0.01)。结论PA以浓度和时间依赖的方式感染U937细胞,促进IL-8的分泌和mRNA表达,PA可能通过MAPK信号通路启动IL-8的高效表达和分泌。
- 柴文戍王洪梅张书芹
- 关键词：铜绿假单胞菌IL-8PD98059SB203580
- 急性髓系白血病患者造血干／祖细胞特异性微小RNA的筛选及表达研究被引量：1
- 2012年
- 目的筛选和分析急性髓系白血病（AML）患者骨髓造血干／祖细胞（HSPC）特异性微小RNA（miRNA，miR）的表达及其水平。方法分选AML患者骨髓及造血干细胞移植供者（正常对照）外周血CD34＋细胞，提取细胞总RNA，通过与miRNA芯片杂交后筛选差异表达的miRNA，随后采用实时定量PCR技术对差异表达的miR-10a和miR-220c进行定量验证，并进行DNA序列分析。结果miRNA芯片杂交结果显示，AML患者骨髓与正常对照CD34＋细胞之间，表达差异达1倍以上的miRNA有191个。差异有统计学意义的有94个，其中44个表达增高，50个表达降低。实时定量PCR结果显示，AML患者骨髓CD34＋细胞miR-10a和miR-220c表达水平是正常对照的19．6％和19．0％，PCR产物克隆DNA测序以及DNA序列同源检索证实确为miR-10a和miR-220c。结论AML患者与正常人HSPC存在多种差异表达的miRNA，miR-10a和miR-220c表达明显下调。
- 王光平张书芹朱平彭敏源谭三勤银辉徐雅静陈炎陈方平
- 关键词：微小RNA
- 铜绿假单胞菌活菌诱导不同分化状态的U937细胞表达IL-8的研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)活菌对不同分化状态的U937细胞表达IL-8的诱导作用及通过蛋白激酶C(PKC)和核因子κB(NF-κB)的调控机理。方法采用ELISA和RT-PCR法,分别对Pa诱导不同分化状态的人单核白血病细胞系U937细胞分泌IL-8及U937细胞IL-8 mRNA表达进行研究,应用Western blot检验IκB及NF-κB的蛋白表达,观察PKC和NF-κB活化抑制剂对IL-8表达的影响。结果Pa可促进U937细胞及佛波酯(PMA)分化的U937细胞IL-8 mRNA的表达及IL-8的分泌,而且具有明显的量效和时效关系。Pa能直接诱导并迅速活化NF-κB,1h达到高峰,以后逐渐下降。PKC阻断剂calphostin C及NF-κB阻断剂PDTC均能显著抑制NF-κB的活化及IL-8的表达(P<0.01)。结论IL-8的产生可能与U937细胞的分化状态有关;Pa可能通过PKC信号通路促进NF-κB的活化,从而启动IL-8的高效表达和分泌。
- 柴文戍朱晓敏张书芹范锦秀陈佰义
- 关键词：铜绿假单胞菌IL-8
- 急性髓系白血病CD33^+/CD34^+细胞表面核酸适配体的筛选及结构分析被引量：5
- 2011年
- 目前,对急性白血病细胞表面特异性分子标记物所知甚少,因而白血病的诊断尚缺乏白血病细胞的特异性方法。为此,本研究采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,cSELEX)技术,筛选与急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)M2型(AML-M2)患者CD33+/CD34+细胞结合的核酸适配体(aptamer),为寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物提供基础。首先,通过免疫磁珠方法分选出AML-M2患者骨髓CD33+/CD34+细胞并将其作为靶细胞,正常人CD33+/CD34+细胞为反筛选细胞,采用cSELEX技术,从单链DNA(single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库中筛选与AML-M2CD33+/CD34+细胞结合的适配体。随后,通过克隆和测序分析各适配体的结构。结果显示,经过13轮次的反复筛选,ssDNA文库的适配体与AML-M2患者CD33+/CD34+细胞的富集度从0.7%增加到52.9%,至第13轮时趋于稳定。对所获得的30个适配体序列分析表明,大多数适配体含有CCCCT、CTCTC和CTCAC保守序列中的一种。二级结构分析显示,30个适配体中含有3种不同类型的模拟二级结构。结论 :本研究成功筛选到AML-M2型白血病CD33+/CD34+细胞的适配体,这为进一步寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物以及AML-M2型白血病的分子诊断创造了基础。
- 张书芹王光平朱平梁嘉佳徐雅静彭敏源陈炎谭三勤陈方平
- 关键词：急性髓系白血病适配体
- 急性髓系白血病M<,2>CD33<'+>/CD34<'+>细胞表面核酸适体的筛选与克隆及序列分析
- 背景与目的:白血病是一种起源于骨髓造血干细胞的恶性疾病,对白血病的准确诊断,有助于白血病的正确治疗并提高其治愈率,但目前仍然缺乏针对白血病细胞特异的诊断方法。指数富集配基的系统进化(systematic evolutio...
- 张书芹
- 关键词：急性髓系白血病分子诊断
- 文献传递
