张宝
- 作品数：152 被引量：420H指数：10
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市重大科技攻关项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 小片段基因表达分析(MAGE)
- 2001年
- 张宝马文丽谭军郑文岭
- 关键词：基因表达谱MAGE基因转录
- 2016年广州市H1N1流感病毒变异情况分析
- 2019年
- 目的对2016年广州市15株流感病毒8个蛋白的氨基酸位点进行变异分析,了解病毒耐药性和致病性的变化,为后续病毒研究、寻找变异规律提供科学依据。方法从患者咽拭子中提取病毒,采用RT-PCR方法对病毒进行鉴定,应用二代测序技术测定15个分离株的全基因组序列,通过MAGA6.0软件与参考株pdm2009(A/California/07/2009(H1N1))进行比对,分析氨基酸变异情况。结果15个H1N1流感病毒分离株与参考株pdm2009(A/California/07/2009(H1N1))进行比对发现,8个蛋白片段的变异程度不高,HA蛋白受体结合位点未发现变异,NA蛋白在与耐药性有关的氨基酸位点均未发现变异,表明对神经氨酸酶抑制剂药物敏感,并发现影响抗原性、病毒感染细胞能力和病毒基因组的复制和转录有关的变异。结论2016年广州市H1N1流感病毒为保守毒株,未发现新的耐药病毒株,发现病毒致病力增强了,因此可能导致流感病毒的局部爆发。
- 赵思婷钟家禹张宝
- 关键词：H1N1流感病毒氨基酸
- 基于PCR的siRNA表达框的制备被引量：1
- 2006年
- 目的改进目前基于PCR的方法制备siRNA表达框,转染细胞后产生高效的RNA干扰作用。方法从K562细胞中提取基因组DNA,以此为模板,PCR扩增U6启动子序列并克隆至pMD18-T载体中,用载体上的引物进行扩增,所得产物即制成作为扩增siRNA表达框的模板。选择p53为靶基因,扩增制备siRNA表达框,测序验证后,转染SH-SY5Y 细胞48h后提取RNA进行RT-PCR,检测RNA干扰的效应。结果测序结果表明所克隆的U6启动子序列正确。细胞转染表达框,在mRNA水平上,p53基因的表达明显受到了抑制。结论本实验所制作的基于PCR的方法制备siRNA表达框可以很好地应用于RNAi作用研究。
- 郭秋野马文丽张宝吴清华严律郑文岭
- 关键词：RNAISIRNA
- 银染RD-PCR方法分离基因片段被引量：3
- 2002年
- 从正常培养的SH-SY5Y细胞中提取总RNA,经oligo(dT)纤维素柱纯化分离出mRNA,然后以oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3AI酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物进行扩增;采用5%非变性PAGE胶电泳分离后,用银染的方法显示DNA条带;在直视下回收DNA带,经过扩增后克隆入pMD18-T载体中并鉴定。结果建立了非放射性同位素的银染RD-PCR方法,用于分离基因片段。
- 张宝马文丽刘莉扬宋艳斌郑文岭
- 关键词：银染色法
- 基因芯片用于鼠疫快速诊断的初步研究被引量：2
- 2004年
- 目的将基因芯片技术用于鼠疫的快速诊断。方法分别采用RD标记技术对鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌的DNA样品进行标记,与芯片上的探针进行杂交。结果芯片能将鼠疫耶尔森菌与同属的2种致病性细菌鉴别开。结论基因芯片是一种有效的诊断工具,可用于鼠疫的诊断。
- 黄海马文丽董兴齐张宝吴清华郑文岭
- 关键词：基因芯片鼠疫耶尔森菌
- 限制性显示技术作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法的初步研究(英文)
- 2005年
- 目的初步研究限制性显示技术(RD-PCR)作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法对芯片杂交信号的影响。方法收集3个健康人外周血单核细胞,提取RNA后分为两组,采用RD-PCR进行样本双色(Cy3/Cy5)荧光标记,与3张Agilent60mer高密度(22K)人1B寡核苷酸芯片进行杂交。排除阴性和阳性对照信号值、Cy3和(或)Cy5的前景与背景间无统计显著性差异点的信号值,进一步排除两种荧光标记间存在统计显著性差异点的信号值,将3张芯片的共同信号值用于分析。SPSS软件进行常规统计分析和作图,R语言环境下的VSN统计包排除芯片间和两种不同荧光标记间的系统误差。结果3张芯片的8744个共同点用于本研究。芯片间及两种荧光标记间存在明显的可校正的系统误差。芯片间杂交信号值相关显著。RD-PCR样本标记方法对较低表达基因信号值较为敏感。结论初步的统计分析结果表明,RD-PCR是一种潜在的有用的高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法。
- 莫小阳马文丽李凌石嵘张宝徐秋林张海燕郑文岭
- 关键词：限制性显示技术
- SARS冠状病毒刺突蛋白在裂殖酵母中的表达被引量：1
- 2005年
- 根据SARS冠状病毒S蛋白主要抗原表位的分析,将S蛋白基因扩增成大小为800bp^1000bp的5个片段,分别与裂殖酵母载体pNMT1连接,经电穿孔转化TCP1菌株,得到诱导表达5个片段的裂殖酵母菌株。对诱导表达产物进行SDS-PAGE和Westernblot分析表明,S基因5个片段在裂殖酵母中分别得到不同程度的表达,为进一步研究新一代SARS疫苗提供了材料。
- 吴朝霞郑文岭张宝师永霞马文丽
- 关键词：SARS刺突蛋白裂殖酵母
- 星形神经胶质细胞对PC12细胞生长发育的影响被引量：15
- 2000年
- 在神经系统的生长发育过程中 ,星形胶质细胞对神经元生长发育的作用是一项重要的研究课题。本文以体外培养的 SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞与 PC12神经元按不同细胞数目比例 ( 5 0∶ 1～ 1∶ 1)共同培养 ,并用其制备的条件培养液培养 PC12细胞 ,用快速灵敏的 MTT比色法测定 PC12神经元的细胞活力 ,用光学相差显微镜观察 PC12细胞形态学变化。结果显示 ,星形胶质细胞条件培养液可增强 PC12细胞活力 ( MTT测定的 OD值由 0 .2 5 5± 0 .0 12提高到 0 .5 10± 0 .0 3 6,P<0 .0 0 1,且细胞折光性较对照组强 ) ,却不能促使 PC12神经元突起的生出。将星形胶质细胞与 PC12细胞按 3 0∶ 1～ 1∶ 1的比例共同培养时 ,既可提高 PC12细胞折光性和光晕又可促使其突起的生长 ;如按 5 0∶ 1～ 40∶ 1的比例共同培养时 ,只观察到提高 PC12细胞折光性和光晕 ,而无促使其突起生长发育的作用。本文结果提示 ,PC12神经元细胞活力的提高与星形胶质细胞分泌到条件培养液中的可溶性因子有关 ,而 PC12神经元突起生长发育可能是和与星形胶质细胞的直接接触以及二者的细胞数目比有关。
- 莫永炎陈瑗周玫张宝
- 关键词：神经元突起细胞培养星形胶质细胞PC12细胞
- DNA芯片技术检测乙型肝炎病毒及丁型肝炎病毒的初步研究被引量：11
- 2004年
- 现分别针对乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)基因保守区域设计多对聚合酶链反应(PCR)引物,打印制备成芯片,并用限制性显示(RD)技术标记样品,探索此方法制备基因芯片的可行性.
- 孙朝晖郑文岭张宝石嵘马文丽
- 关键词：丁型肝炎病毒乙型肝炎病毒DNA芯片技术HBV基因芯片
- 广东EV71病毒流行病学特征和毒力分析被引量：6
- 2015年
- 目的：研究广东省EV71病毒的流行病学特征和毒力的影响因素。方法：提取收集的样品或培养的病毒RNA、逆转录合成c DNA,应用PCR技术扩增全长EV71 VP1全长序列,应用MEGA5.0进行序列比对、建设进化树,确定病毒的分型。用Logistic回归分析对性别、年龄、病毒型别、VP1变异等因素对患者临床症状轻重的影响。结果：在2008-2010年期间,广东省流行的EV71病毒株为C4a型,但该型病毒已经出现了分化,即C4a1-C4a4。患者的临床症状与性别、病毒的型别无相关性,在4岁之前,病毒变异A289T易致重症患者（P〈0.05,OR=2.360,95%CI为1.163~4.659）。结论：在广东省EV71流行株主要为C4a1型,已经出现进化,且同时流行,需加强相关的监测;在流行期间需加强易感人群的防护。
- 吴娴波钟艳云曹宇娟柯昌文管大伟张宝
- 关键词：EV71病毒毒力流行病学特征
