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张慧
作品数:
3
被引量:4
H指数:2
供职机构:
浙江树人大学
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发文基金:
浙江省教育厅科研计划
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
严杰
浙江树人大学
王欢
浙江大学医学院病原生物学系
王艳芳
杭州师范大学基础医学部
孙爱华
杭州医学院
孙萍萍
浙江大学医学院病原生物学系
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王欢
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中华微生物学...
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2012
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基于幽门螺杆菌UreB优势抗原表位多抗原肽疫苗制备及其免疫保护作用
被引量:2
2012年
目的构建串联式幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527原核重组表达系统,制备UreB322和UreB527表位与多肽载体Poly—Asp.Lys的多抗原肽(MAP)疫苗并确定其免疫原性和免疫保护性。方法采用连接引物PCR构建含肠激酶(EK)位点的串联式UreB322和UreB527表位基因及其原核表达系统。表达的目的重组融合蛋白8×[rEK-UreB322-EK-UreB527-EK]经EK水解后用SephadexG-25柱分离rUreB322-EK和rUreB527-EK片段。采用碳二亚胺法将rUreB322-EK、rUreB527-EK与Poly.Asp—Lys载体分子交联,制备出多抗原肽疫苗MAP—rUreB322/B527。采用ELISA和Westernblot分别检测各重组表位肽及MAP-rUreB322/527的抗原性和免疫反应性。采用幽门螺杆菌SS1株感染BALB/c小鼠模型检测MAP—rUreB322/527免疫保护效果。结果获得了8次重复串联的UreB322和UreB527编码基因及其原核表达系统,目的融合蛋白8x[rEK—UreB322-EK—rUreB527-EK]表达量可达细菌总蛋白的48%。肠激酶可将目的融合蛋白完全水解为rUreB322-EK和rUreB527-EK片段。rUreB322-EK和rUreB527-EK与Poly—Asp-Lys交联率高达92.5%。幽门螺杆菌全菌抗体及rUreB.IgG均能识别rUreB322.EK、rUreB527.EK和MAP.rUreB322/527并与之结合。MAP.rUreB322/527免疫小鼠血清抗体水平明显高于rUreB(P〈0.05)。50或100p,gMAP—rUreB322/527对幽门螺杆菌SS1株感染小鼠的保护率(83.3%和91.7%)明显高于等量rUreB(41.7%和50.0%)(P〈0.05)。结论本研究成功地构建了幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527重复串联式编码基因及其原核表达系统,基于UreB优势抗原表位的多抗原肽疫苗MAP—rUreB322/527能显著提高免疫保护效果。
王艳芳
王欢
张慧
严杰
阮萍
关键词:
幽门螺杆菌
免疫保护
幽门螺杆菌GroEL蛋白重组表达及表达产物小鼠免疫保护作用
被引量:2
2012年
目的检测幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列差异,确定重组表达的GroEL蛋白(rGroEL)抗原性、免疫反应性以及对幽门螺杆菌感染小鼠的免疫保护性。方法采用PCR及测序法了解幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列。构建幽门螺杆菌groEL基因pET42a-E.coli BL21DE3原核表达系统,采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统确定rGroEL表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL。采用ELISA和Western blot检测rGroEL的抗原性和免疫反应性,采用幽门螺杆菌全菌为包被抗原的ELISA确定GruEL膜定位。采用幽门螺杆菌小鼠感染模型了解rGroEL免疫保护作用。结果35株幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列相似性高达99.4%~100%。rGroEL表达量可达细菌总蛋白的56%,SDS—PAGE后提纯的rGmEL在凝胶中显示为单一的条带。rGroEL可诱导家兔和小鼠产生高效价IgG抗体,同时也能被幽门螺杆菌全菌抗体(Hp-IgG)或rGroEL-IgG识别并与之结合。GroEL是幽门螺杆菌表面蛋白抗原。50、100或200μg rGroEL免疫可分别使50.0%(6/12)、75.0%(9/12)和91.7%(11/12)小鼠免于幽门螺杆菌SS1株的感染,200μg rGroEL免疫保护率(91.7%)显著高于50μg rGroEL(50.0%)(P〈0.05)。结论幽门螺杆菌GroEL蛋白是序列保守、具有良好免疫原性和免疫保护性的表面抗原,可作为基因工程疫苗候选抗原。
王艳芳
张慧
王欢
孙萍萍
严杰
孙爱华
关键词:
幽门螺杆菌
免疫保护作用
基于幽门螺杆菌UreB优势抗原表位多抗原肽疫苗制备及其免疫保护作用
目的构建串联式幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527原核重组表达系统,制备UreB322和UreB527表位与多肽载体Poly-Asp-Lys的多抗原肽(MAP)疫苗并确定其免疫原性和免疫保护性。方...
王艳芳
王欢
严杰
张慧
阮萍
关键词:
幽门螺杆菌
免疫保护
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