张树林
- 作品数：147 被引量：648H指数：15
- 供职机构：西安交通大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用抑制性消减杂交技术克隆HBV全S蛋白反式激活蛋白1的反式激活基因被引量：1
- 2005年
- 目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白反式激活蛋白1(CSTP1)的反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBVCSTP1反式激活相关基因.方法:以HBVCSTP1表达质粒pcDNA3.1(-)-CSTP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mKNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建入HBVCSTPl反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到86个白色克隆,进行菌落PCK分析,均得到100-1000bp插入片段.挑取25个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得23个已知基因序列和2个未知基因.未知基因的功能还正在研究中.结论:应用SSH技术成功构建了HBVCSTP1反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.该文库的建立为进一步阐明HBVCSTP1反式调节的靶基因及致肝病发生的分子生物学机制提供理论依据.
- 白桂芹成军张树林刘妍刘蔚张黎颖
- 关键词：抑制性消减杂交技术反式激活基因S蛋白CDNA消减文库HBV基因差异表达
- 应用抑制性消减杂交技术克隆HBV全S蛋白反式激活蛋白1的反式激活基因
- 目的应用抑制性消减杂交技术(SSH)构建乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白反式激活蛋白1 (CSTP1)的反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBV CSTP1反式激活相关基因。方法以 HBV CSTP1表达质粒pc...
- 白桂芹成军张树林刘妍刘蔚张黎颖
- 文献传递
- 慢性肝病并发自发性细菌性腹膜炎治疗进展
- 2001年
- 朱凤群张树林
- 关键词：慢性肝病自发性细菌性腹膜炎
- 应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒E2蛋白反式调节基因
- 2005年
- 目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCVE2蛋白反式调节相关基因。方法以HCVE2表达质粒pcDNA3.1(-)_E2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR)扩增,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HCVE2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到78个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到100～1000bp插入片段。挑取38个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得35个已知基因序列和3个未知基因。通过生物信息学分析获得其全长序列,其功能正在研究中。结论应用SSH技术成功构建了HCVE2反式调节基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明HCVE2反式调节的靶基因及致慢性肝脏疾病发生的分子生物学机制提供理论依据。
- 白桂芹成军刘妍杨倩黄艳萍蔺淑梅杨瑗张树林
- 关键词：丙型肝炎病毒E2蛋白抑制性消减杂交新基因
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因2基因组DNA结构分析及其不同剪切体的克隆化研究被引量：7
- 2004年
- 目的:HCV NS5A病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因NS5ATP2及其不同剪接体基因序列的确立、克隆化研究. 方法:依据我室构建的NS5A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,利用生物信息学技术获得,提取HepG2 细胞的总RNA,进行反转录(RT-PCR),扩增产物与原核表达载体连接,进行测序鉴定. 结果:经测序鉴定成功获得新基因的编码序列,并意外发现了NS5ATP2的不同剪接体,对NS5ATP2基因组进行分析,获得剪接体的编码序列,并成功进行了克降化研究. 结论:利用分子生物信息学技术,发现并鉴定了HCV NS5A反式激活作用的新的靶基因NS5ATP2(615)及其可变剪接体NS5ATP2(216),为研究新基因的生物学功能及丙肝发病机制提供新的依据.
- 杨倩成军刘妍洪源王建军张树林
- 关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A剪切体克隆化
- 基因表达谱芯片筛选NS5ATP2剪切体NS5ATP2-512转染细胞差异表达基因
- 2005年
- 目的应用基因芯片技术检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活基因NS5ATP2剪切体512的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明NS5ATP2剪切体512蛋白可能的分子生物学功能。方法设计并合成NS5ATP2基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS5ATP2蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的NS5ATP2编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,在此过程中发现其剪切体NS5ATP2512并构建真核表达载体pcDNA3.1(-)NS5ATP2512。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析。结果构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误。提取高质量的mRNA,逆转录为cDNA,进行DNA芯片技术分析。在1152个基因表达谱的筛选中,发现有14个基因表达水平显著上调,15个基因表达水平显著下调。结论应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS5ATP2剪切体NS5ATP2512转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明NS5ATP2512蛋白可能的生物学功能提供依据。
- 白桂芹张树林成军杨倩蔺淑梅刘妍黄燕萍
- 关键词：丙型肝炎病毒剪切体
- 应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒全S蛋白反式激活基因
- 2005年
- 目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBV全S蛋白反式激活相关基因。方法以HBV全S表达质粒pcDNA3.1(-)全S转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HBV全S蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到86个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到100-1000bp插入片段。挑取35个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得33个已知基因序列,和2个未知基因,通过生物信息学分析获得其全长序列,其中之一命名为全S蛋白反式激活基因1(CSTP1),已在GenBank中注册,注册号AY553877。未知基因的功能还正在研究中。结论应用SSH技术成功构建了HBV全S反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明HBV全S反式调节的靶基因及致肝病发生的分子生物学机制提供理论依据。
- 白桂芹成军张树林刘妍黄燕萍蔺淑梅刘蔚张黎颖杨瑗
- 关键词：反式激活抑制性消减杂交克隆
- 酶切联合巢式PCR法检测外周血单个核细胞中的HBV DNA与HBVcccDNA被引量：1
- 2008年
- 目的:检测慢性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中HBV的存在状态.方法:采用巢式PCR法检测慢性HBV感染者PBMCs中的HBV DNA;用Hirt法、绿豆核酸酶、设计跨越单链区和三链区巢式PCR引物,以尽可能去除rcDNA的影响,检测共价闭合环状DNA(cccDNA).结果:采用酶切联合巢式PCR法在慢性HBV感染者PBMCs中可扩增出cccDNA,同时未扩增出rcDNA;120例慢性HBV感染者PB-MCs中HBV DNA,cccDNA阳性检出率分别为62.5%,45.8%,HBV DNA阳性检出率明显高于cccDNA(P<0.01);其中HBeAg阳性组PBMCs中HBV DNA检出率(80.0%)和cccDNA阳性率(45.0%)均明显高于HBeAg阴性组(61.7%,30.0%,P<0.01).结论:酶切联合巢式PCR法检测cccDNA可有效避免rcDNA对cccDNA扩增的干扰;结果表明乙肝病毒不仅可感染PBMCs,并可在其中复制;HBeAg阳性者PB-MCs中HBV DNA及cccDNA检出率高.
- 蔺淑梅张英陈瑞琳张曦陈天艳叶峰赵英仁张树林
- 关键词：外周血单个核细胞共价闭合环状DNA
- 小儿白血病水痘及水痘罕见并发症的救治被引量：1
- 1998年
- 1.小儿白血病水痘的救治白血病患儿罹患水痘时常发生内脏播散,病死率达7％～25％。
- 周先志王凝芳石建时闻炜罗淑兰韩玉坤陈菊梅张树林李琳
- 关键词：小儿白血病水痘并发症病死率救治成功内脏
- 乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2原核表达载体的构建及诱导表达被引量：1
- 2008年
- 目的体外构建乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2原核表达载体并观察其表达情况。方法以含有HBEBP2全长序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得HBEBP2基因片段,将HBEBP2连接到pGEM-T载体,在测序证实正确后将其插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21大肠埃希菌,经IPTG诱导,并通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定融合蛋白的表达。结果扩增获得的HBEBP2基因片断被成功构建到大肠埃希菌原核表达载体中。经IPTG诱导,得到了融合蛋白的表达,经Western blot分析证实其分子量为34kD,具有抗原性。结论体外成功表达HBEBP2蛋白,为进一步研究HBEBP2蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础。
- 李小权王琦成军张树林洪源向天新
- 关键词：乙型肝炎病毒原核表达体外
