方乐
- 作品数：11 被引量：36H指数：5
- 供职机构：南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省卫生厅科技计划项目江西省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 显微镜观察药敏检测技术检测结核分枝杆菌耐药性研究被引量：7
- 2013年
- 目的建立快速测定耐药结核分枝杆菌(MTB)的显微镜观察药敏检测(MODS)技术,并评价其临床应用价值。方法采用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS技术,并对最佳检测条件进行探讨。应用该技术对192株MTB临床分离株进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的药敏检测,并与传统绝对浓度法药敏结果进行比较,对两法检测结果不一致的菌株进行BACTEC-960测定。结果 MODS药敏检测时间中位数为6d。以绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS技术进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星药敏检测的敏感度分别为97.8%、98.7%、88.4%、93.2%、96.4%;特异度分别为98.0%、94.8%、94.3%、99.0%、95.6%;符合率分别为97.9%、96.4%、92.1%、96.4%、95.8%。结结论 MODS技术可作为MTB耐药性的快速检测方法。
- 黄自坤熊国亮姜碧霞方乐李玮婷徐晓萌李俊明
- 关键词：微生物敏感性试验显微镜检查
- 巨噬细胞LRG47/EBP50真核共表达质粒的构建及表达鉴定
- 2012年
- 目的:构建能共表达LRG47和EBP50的重组质粒pBud-LE,实现目的基因LRG47、EBP50在真核细胞中的表达,以便于后续从分子和细胞水平研究其抗结核分枝杆菌(Mtb)感染的效果和机制。方法:用RT-PCR方法从RAW264.7细胞中扩增获得小鼠的lrg47基因和ebp50基因,分步克隆入真核共表达质粒pBUDCE4.1中,构建真核共表达质粒pBud-LE。同时构建ebp50和红色荧光蛋白表达基因(rfp)的融合基因,置换pBud-LE中的ebp50基因,构建共表达LRG47和EBP50-RFP的重组质粒pBud-LER;将pBud-LE、pBud-LER通过脂质体转染入293T细胞,以pBud-LER转染观察转染效果,再分别采用RT-PCR和免疫印迹法鉴定质粒在真核细胞系中表达LRG47和EBP50的能力。结果:成功构建了真核共表达质粒pBud-LE和pBud-LER;转染293T细胞后,LRG47和EBP50在RNA水平和蛋白水平都明显升高。结论:成功的构建了真核共表达质粒pBud-LE。
- 罗清方乐李俊明
- 关键词：结核分枝杆菌EBP50共表达
- 腺苷脱氨酶对结核性脑膜炎诊断价值的Meta分析被引量：7
- 2011年
- 目的探讨脑脊液腺苷脱氨酶(ADA)检测在结核性脑膜炎(TBM)中的诊断价值。方法检索1990年1月—2010年10月Cochrane图书馆、PubMed和万方数据库等数据库,按照Cochrane协作网推荐的诊断试验纳入标准筛选文献,采用QUADAS工具评价纳入文献质量,应用Meta-D isc 1.4软件对纳入研究进行综合定量评价并绘制综合受试者工作曲线(SROC)。结果共检索到相关文献149篇,排除134篇,符合纳入标准的15篇进入Meta分析,涉及研究对象1 642例。异质性检验提示存在异质性,按随机效应模型进行Meta分析,ADA诊断TBM的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断优势比的汇总值分别为0.73〔95%CI(0.70,0.76)〕、0.90〔95%CI(0.88,0.91)〕、7.79〔95%CI(4.80,12.63)〕、0.25〔95%CI(0.17,0.35)〕和36.01〔95%CI(16.08,80.66)〕SROC下面积AUC为0.8856(Se=0.0412),Q值为0.8162。结论脑脊液ADA对TBM的临床诊断价值有较低的敏感度和较高的特异度,测定脑脊液ADA可作为诊断TBM的辅助诊断指标。
- 方乐李俊明万腊根黄自坤陈亮蔡恒毅张明飞
- 关键词：结核性脑膜炎腺苷脱氨酶META分析
- 显微镜观察药物敏感度检测技术在肺外结核诊断中的应用被引量：6
- 2012年
- 目的探讨显微镜观察药物敏感度检测技术（MODS）对肺外结核的诊断价值。方法采用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS。收集74份结核性胸膜炎患者的胸腔积液、63份结核性脑膜炎患者的脑脊液和18份非结核病患者胸腔积液和脑脊液标本，分别采用抗酸染色法、改良罗氏培养法和MODs进行结核分枝杆菌检测，对改良罗氏培养法和MODS培养获得的分枝杆菌采用免疫层析法鉴定，数据比较采用y。检验。结果MODS、改良罗氏培养法和抗酸染色法检测结核性胸膜炎的阳性率分别为58．1％（43／74）、18．9％（14／74）和6．8％（5／74）；检测结核性脑膜炎的阳性率分别为54．0％（34／63）、20．6％（t3／63）和4．8％（3／63）。MODS检测结核性胸膜炎和结核性脑膜炎的阳性率均高于改良罗氏培养法，差异有统计学意义（X^2=24．00，P〈0．01；X^2=14．97，P〈0．01）。所有改良罗氏培养法和MODS检测获得的分枝杆菌均为结核分枝杆菌。三种方法检测18份非结核病患者胸腔积液和脑脊液结果均为阴性。MODS检测脑脊液和胸腔积液标本的阳性检出中位时间分别为9d和14d，明显短于改良罗氏培养法所需的31d。结论MODS与传统病原学检测方法相比，具有敏感性好、检出时间短的优势，适用于肺外结核病的临床快速诊断。
- 黄自坤方乐姜碧霞熊国亮李俊明
- 关键词：脑膜结核显微镜检查
- 尿α_1酸性糖蛋白在预测T2DM患者糖尿病肾病进展中的价值被引量：5
- 2013年
- 目的探讨尿α1酸性糖蛋白(AAG)预测2型糖尿病(T2DM)患者糖尿病肾病(DN)进展中的价值。方法收集2008年7月至2011年10月入院治疗的T2DM患者100例,分别检测其尿AAG、随机尿微量白蛋白(MABL)和肌酐水平。将T2DM患者按尿AAG水平分为尿正常AAG组(NAAGU)组、微量尿AAG组(MAAGU)组和尿大量AAG组(MaAAGU)组,以MALB与尿肌酐的比值(ACR)为肾组织损害进展的参照标准,随访观察各组患者尿AAG水平与肾损害进展的关系。评价尿AAG水平对T2DM患者DN发生和发展的预测价值。结果在NAAGU组、MAAGU组和MaAAGU组中,分别有7.14%、16.67%和37.5%的T2DM患者发生了DN的进展,有8.33%的MAAGU组患者发生了DN的缓解,而在MaAAGU组中无一例患者发生DN的缓解。结论尿AAG测定可作为T2DM的辅助诊断指标之一,对T2DM患者DN的发生发展有较好的预测价值。
- 鞠北华方乐杨建安黄自坤李玮婷徐晓萌郭国爱李俊明
- 关键词：2型糖尿病Α1酸性糖蛋白糖尿病肾病
- 慢病毒载体介导的IL-10诱导耐受性树突状细胞的形成
- 2011年
- 探讨通过IL-10重组慢病毒载体转染小鼠未成熟树突状细胞(iDC),构建高分泌IL-10的耐受性树突状细胞的可行性。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)联合诱导并经CD11c免疫磁珠分选获得小鼠骨髓iDC,倒置显微镜下观察,流式细胞术分析细胞表面分子;IL-10重组慢病毒载体转染小鼠iDC,荧光显微镜下观察GFP表达,ELISA法测定转染细胞的IL-10表达水平,并行混合淋巴细胞反应,观察其诱导T淋巴细胞增殖的情况,流式细胞术检测调节性T细胞。结果:获得大量高纯度未成熟DC,随培养时间延长表现出典型的树突状形态,流式细胞术分析显示iDC表面MHCⅡ、CD80、CD86表达水平均显著低于mDC;未成熟DC经IL-10慢病毒转染后,荧光显微镜下观察GFP蛋白高度表达,ELISA检测IL-10表达水平明显高于对照组(P<0.05),且IL-10转染iDC体外刺激T淋巴细胞增殖的能力弱于未转染iDC,但调节性T细胞比例高于后者。IL-10基因通过慢病毒载体介导,成功整合到iDC基因内,使其高表达IL-10,基因修饰后的iDC的致免疫耐受作用得到了增强。
- 陈亮温桂兰许飞方乐
- 关键词：树突状细胞慢病毒IL-10免疫耐受
- 尿AAG检测在T2DM患者糖尿病肾病早期诊断中的应用研究
- 第一部分尿α1酸性糖蛋白在T2DM患者糖尿病肾病诊断中的应用价值
目的：探讨尿α1酸性糖蛋白(AAG)对2型糖尿病(T2DM)患者发生糖尿病肾病的临床诊断价值。
方法：收集2010年1月至2011年10月在南...
- 方乐
- 关键词：Α1酸性糖蛋白糖尿病肾病
- 尿羧肽酶B激活肽对重症急性胰腺炎诊断价值的分析被引量：3
- 2011年
- 目的探讨尿液羧肽酶B激活肽(CAPAP)检测在重症急性胰腺炎(SAP)中的诊断价值。方法检索1995年1月至2010年11月Cochrane图书馆、PubMed和万方数据库等数据库,按照Cochrane协作网推荐的诊断试验纳入标准筛选文献,采用QVADAS工具评价纳入文献质量,应用Meta-Disc 1.4软件对纳入研究进行综合定量评价并绘制综合受试者工作曲线(SROC)。结果 6篇文献符合纳入标准,异质性检验提示存在异质性。按随机效应模型Meta分析,CAPAP诊断SAP的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断优势比等汇总值分别为0.73、0.85、6.40、0.34、22.99。SROC下面积(AUC)为0.930 3,Q值为0.865 5。结论尿CAPAP对SAP临床诊断价值有较低的敏感度和较高的特异度,测定尿液CAPAP可作为诊断SAP的辅助指标。
- 方乐李俊明万腊根王娜罗清
- 关键词：重症急性胰腺炎
- 构建及鉴定TACO特异性10-23DRz表达载体重组耻垢分枝杆菌
- 2011年
- 目的 构建一种可表达特异性10-23脱氧核酶（deoxyribozyme,DZ）的巨噬细胞靶向性细菌载体疫苗,并鉴定其在巨噬细胞表达10-23DZ的能力以及抑制靶基因表达的效果.方法 采用亚克隆方法将分枝杆菌复制子oriM克隆入10-23DRz真核表达载体pSDE01中,获取可在分枝杆菌和真核细胞中穿梭的重组质粒pSDE02.在前期研究基础上选择一有效的针对巨噬细胞taco基因的10-23DZ--DZ1,根据DZ1序列设计并制备DZ1的双链表达序列,插入pSDE02中获取重组质粒pDZM01.将pDZM01经电穿孔方法转化入耻垢分枝杆菌Ms1-2c株构建重组耻垢分枝杆菌rMS-DZ1.分别采用Ziehl-Heelson染色法和直接荧光观测法鉴定重组耻垢分枝杆菌的巨噬细胞靶向性.用rMS-DZ1感染巨噬细胞株RAW264.7,分别于感染后的24 h和48 h采用斑点杂交方法检测rMS-DZ1在巨噬细胞中表达DZ1的情况,再分别采取RT-PCR和免疫印迹方法检测巨噬细胞TACO表达的差异.结果 限制性内切酶酶切、菌落PCR及测序结果显示pSDE02、pDZM01和rMS-DZ1构建成功.rMS-DZ1感染RAW264.7细胞后24 h和48 h,经点杂交方法均检测到了DZ1的表达.半定量RT-PCR和免疫印迹检测结果显示,与未感染组比较,rMS-DZ1感染后24 h和48 h时巨噬细胞TACOmRNA分别下降了67.90%和57.14%,TACO蛋白水平分别下降了53.85%和68.92%.同时,表达对照寡脱氧核糖核苷酸DZ1U的重组耻垢分枝杆菌rMS-DZ1U感染RAW264.7细胞后,其TACOmRNA和TACO蛋白水平与未感染组比较均无明显差异.结论 本研究成功构建了一种可表达特异性10-23DZ的巨噬细胞靶向性重组耻垢分枝杆菌的载体,可在巨噬细胞内表达并抑制相应靶基因的表达,可作为研制治疗用疫苗的基础,这也是国内外首次报道可表达10-23DZ的细菌性载体.
- 李俊明王娜罗清方乐黄自坤万腊根张才成
- 关键词：10-23脱氧核酶重组耻垢分枝杆菌巨噬细胞
- T2DM患者尿α1酸性糖蛋白水平变化及与糖尿病肾病的关系被引量：8
- 2012年
- 目的探讨尿α1酸性糖蛋白(AAG)对2型糖尿病(T2DM)患者发生糖尿病肾病(DN)的临床诊断价值。方法收集同期入院治疗的T2DM患者115例,根据Mogensen等分级标准正常白蛋白尿(NAU)组42例、微量白蛋白尿(MAU)组40例、大量白蛋白尿(MaAU)组33例,选择健康体检者(NC组)及呼吸系统感染性疾病患者(应激组)各40例,分别检测其尿AAG、血清AAG。结果 T2DM患者尿AAG水平显著高于NC组(P<0.05),且随24 h尿白蛋白排泄率(UAER)升高有上升趋势,NAU、MAU和MaAU各组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05),但NAU组尿AAG水平与NC组比较差异无统计学意义;应激组血清AAG水平显著高于NC组(P<0.05),但两组尿AAG水平比较差异无统计学意义。结论尿AAG水平对于早期DN诊断及DN严重程度分级具有潜在应用价值。
- 方乐姜碧霞黄自坤甘华侠李俊明
- 关键词：Α1酸性糖蛋白糖尿病肾病
