方华
- 作品数：30 被引量：36H指数：4
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- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 重症肌无力增生型胸腺组织11KD差异蛋白带双向电泳图谱的建立被引量：1
- 2008年
- 目的建立分辨率高和重复性好的重症肌无力(MG)增生型胸腺组织11KD差异(异常)蛋白带的二维凝胶电泳图谱。方法首先采用SDS-PAGE电泳筛选出含有11KD差异(异常)蛋白条带的MG增生型胸腺组织,然后富集11KD蛋白条带。以17cm pH3-10固相pH梯度胶条(immobilized pH gradient,IPG)做第一向等电聚焦(IEF),12%SDS聚丙烯酰胺凝胶为第二向进行双向电泳(2-DE),PD Quest 7.1软件分析电泳图谱。结果11KD差异(异常)蛋白条带的出现率为72.2%;通过双向电泳,建立分辨率高和重复性好的重症肌无力(MG)增生型胸腺组织11KD差异蛋白带的双向凝胶电泳图谱,进一步分离11KD差异(异常)蛋白带,共得到(30±6)个蛋白点。结论通过蛋白质组技术快速建立重症肌无力11KD差异(异常)蛋白表达图谱,为进一步研究差异表达蛋白的功能提供实验基础。
- 李静孟高峰方华崔新征张建立刘素娜张清勇
- 关键词：重症肌无力胸腺双向电泳
- 重症肌无力患者胸腺组织中共刺激分子B7-H1的表达
- 2012年
- 目的:检测重症肌无力(MG)患者胸腺组织中共刺激分子B7-H1的表达。方法:以正常胸腺组织为对照,采用RT-PCR法检测胸腺增生(14例)、胸腺萎缩(5例)和胸腺瘤(6例)组织中B7-H1mRNA的表达,流式细胞仪分析胸腺组织中B7-H1蛋白的表达情况,免疫组化染色方法观察胸腺组织中B7-H1蛋白的分布。结果:不同类型胸腺组织中BH-H1mRNA和蛋白表达差异有统计学意义(FmRNA=5.152,P=0.005;F蛋白=116.049,P<0.001)。免疫组化染色结果显示,B7-H1蛋白阳性信号主要定位于胸腺组织的皮髓质交界处和髓质胸腺细胞膜上,胸腺增生组织中B7-H1蛋白阳性胸腺细胞数量较多,分布密集,信号强度高。结论:B7-H1mRNA和蛋白的高表达可能与MG胸腺组织异常增生有关。
- 高峰李立张俊杰方华刘素娜杜英关兵峰张清勇
- 关键词：B7-H1胸腺组织重症肌无力
- 重症肌无力患者胸腺增生组织中11000条带的蛋白质组学分析被引量：6
- 2012年
- 目的:探讨重症肌无力(MG)患者胸腺增生组织中相对分子质量为11000差异(异常)条带的蛋白质组成。方法:采用非还原性SDS-PAGE制备型电泳对11000条带进行筛选和富集;应用双向电泳得到蛋白质二维图谱,并对差异蛋白点进行质谱分析;应用免疫组化法比较20例MG胸腺增生组织和10例正常对照组织中4.1R蛋白的表达水平。结果:MG患者胸腺增生组织中目标条带的阳性率为72.7%(8/11),该条带由(30±6)个蛋白点组成,质谱分析显示有16个高表达差异蛋白点,其中3个蛋白得到鉴定,分别为4.1R蛋白、自整合抑制因子1和胆碱乙酰转移酶。免疫组化结果显示,与正常对照组的(0.98±0.18)相比,MG患者胸腺增生组织中4.1R蛋白表达水平为(1.55±0.46)明显增高(t=3.054,P=0.016)。结论:MG胸腺增生组织11000条带由多个蛋白点构成,这些蛋白主要功能涉及细胞骨架的组成、细胞内信息传递和乙酰胆碱合成等。
- 李永丽李立李静孟朱利伟崔新征方华杨鲲鹏张清勇高峰
- 关键词：重症肌无力蛋白质组学双向电泳
- 重症肌无力患者胸腺组织抑制性消减cDNA文库的构建及分析被引量：1
- 2012年
- 目的:构建重症肌无力(MG)患者胸腺组织抑制性消减cDNA文库,分析MG胸腺差异表达基因。方法:分别从6例正常和6例MG患者胸腺组织中分离出mRNA,逆转录合成cDNA,行抑制性消减杂交,将得到的差异表达基因进行T-A克隆,构建cDNA文库,并进行序列分析。应用实时荧光定量PCR检测20例MG患者、10例正常对照胸腺组织中GSTM3和KPNA5 mRNA的表达。结果:共获得125个阳性克隆;Blast同源性检索共得到27个差异表达基因;MG患者GSTM3、KPNA5基因表达量(0.671±0.097和0.712±0.080)高于正常对照胸腺(0.582±0.047和0.571±0.018),差异有统计学意义(tGSTM3=5.458,P<0.001;tKPNA5=2.755,P=0.010),与消减文库结果一致。结论:成功建立了MG胸腺组织抑制性消减cDNA文库。
- 杨俊红崔新征方华关兵峰赵国强张清勇高峰
- 关键词：重症肌无力差异基因CDNA文库胸腺
- 重症肌无力患者胸腺组织中胆碱乙酰转移酶和烟碱型乙酰胆碱受体的表达被引量：5
- 2012年
- 目的:探讨重症肌无力(MG)患者胸腺组织中胆碱乙酰转移酶(CHAT)和烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的表达。方法:采用免疫组化方法检测胸腺增生(20例)、胸腺瘤(10例)、胸腺萎缩(10例)及10例正常胸腺组织中CHAT和nAChR蛋白的表达情况。结果:不同胸腺组织中CHAT和nAChR蛋白的表达差异有统计学意义(F=16.271,15.083,P<0.001)。与正常胸腺和胸腺萎缩组织相比,胸腺瘤和胸腺增生组织中CHAT蛋白的表达增高(P<0.05);胸腺瘤组织中nAChR蛋白表达低于胸腺增生组织(P<0.05);胸腺萎缩组织中nAChR蛋白的表达也低于正常对照组(P<0.05)。结论:胸腺组织中CHAT和nAChR蛋白表达水平的改变可能是MG的发病机制之一。
- 关兵峰崔新征方华张迎娜赵莹张清勇高峰
- 关键词：重症肌无力胆碱乙酰转移酶胸腺
- 一种抗NT5C1A自身抗体检测方法及体外诊断试剂盒
- 本发明公开了一种抗NT5C1A自身抗体检测方法及体外诊断试剂盒，所述的检测方法包括提取人肌肉组织总RNA及获得总cDNA、构建重组表达pSJMY‑NT5C1A‑GFPC载体、制备含重组表达载体pSJMY‑NT5C1A‑G...
- 吕杰高峰赵雪张婧张迎娜张琳媛陈姝帆孙展方华
- 3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较被引量：4
- 2007年
- 目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱。结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加(P均<0.05)。结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础。
- 王桂叶高峰李静孟方华张清勇王玉玲张建立赵明理
- 关键词：双向电泳蛋白纯化胸腺
- 实验性自身免疫性重症肌无力大鼠多肌群SNX17基因的表达被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠多肌群分拣微管连接蛋白17(SNX17)的表达特点。方法:采用主动免疫法构建EAMG大鼠模型(EAMG组)并进行评估,以正常大鼠作对照(正常对照组),利用荧光定量PCR和Western blot检测2组大鼠胸锁乳突肌、膈肌、咬肌、心肌、肋间肌、前肢肌、腓肠肌和眼肌等8组肌群中SNX17、nAChR mRNA和蛋白含量变化。结果:成功构建了EAMG大鼠模型。与正常对照组相比,EAMG组大鼠心肌、肋间肌中SNX17 mRNA的表达升高(P <0. 05),膈肌中SNX17 mRNA的表达降低(P <0. 05);胸锁乳突肌、腓肠肌和眼肌中nAChR mRNA的表达降低(P <0. 05),心肌中n AChR mRNA的表达升高(P <0. 05);咬肌、心肌和腓肠肌中SNX17蛋白含量升高(P <0. 05),胸锁乳突肌、膈肌中降低(P <0. 05)。EAMG组腓肠肌中SNX17 mRNA与nAChR mRNA的表达呈负相关(r=-0. 773,P=0. 035),而在心肌中呈正相关(r=0. 947,P=0. 012)。结论:SNX17可能是神经肌肉接头处的关键蛋白。
- 张艳停吕杰赵雪张迎娜方华李倩如杜英张清勇杨俊红张运克高峰李昕
- 关键词：主动免疫实验性自身免疫性重症肌无力神经肌肉接头
- 一种基于细胞免疫荧光法的人CNTN1-Ab检测方法及试剂盒
- 本发明公开了一种基于细胞免疫荧光法的人CNTN1‑Ab检测方法及试剂盒，所述的检测方法基于双色间接细胞免疫荧光法，通过转染细胞表达自带GFP荧光信号的抗原蛋白，并使用红色荧光二抗显示捕获的标本中的阳性抗体，在荧光显微镜的...
- 张婧高峰赵雪张迎娜吕杰方华
- 共刺激分子B7-H1在重症肌无力患者胸腺组织中的表达
- 2009年
- 目的检测共刺激分子B7-H1在重症肌无力(MG)患者胸腺组织中的表达,探讨与MG发病的关系。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测30例MG患者B7-H1mRNA在胸腺组织中的表达水平,并分析与不同临床分型、病理类型之间的关系。同时设10例正常胸腺组织为对照组。结果MG组B7-H1mRNA表达水平为(0.46±0.21),对照组为(0.14±0.14),MG组较对照组显著增高(P<0.01)。而MG组不同临床分型组间和不同病理类型组间其表达水平均无显著性差异(P>0.05)。结论B7-H1mRNA在MG患者胸腺组织中的表达异常,可能影响到共刺激信号的传递,干扰到胸腺细胞的增殖与活化,参与MG的发病。
- 张俊杰高峰方华曹建西张清勇刘素娜
- 关键词：重症肌无力胸腺组织
