曾革非
- 作品数：18 被引量：70H指数：5
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用腺相关病毒载体介导人血管内皮生长因子受体KDR胞外区基因的表达被引量：2
- 2001年
- 新生血管大量形成在实体瘤的生长和转移中起着关键的作用。血管内皮生长因子 (VEGF)是介导肿瘤血管生成的最主要因素。从原代培养的人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)提取细胞总RNA ,采用逆转录PCR(RT PCR)方法得到VEGF受体KDR胞外区cDNA片段。将获得的受体基因克隆到AAV基因治疗载体pSNAV中 ,得到重组质粒pSNAV KDR。重组质粒转染BHK细胞 ,加入辅助病毒后 ,获得了表达目的蛋白的重组AAV。重组病毒表达的KDR在体外实验中具有与VEGF结合的活性。在体内实验中 ,重组AAV感染的黑色素瘤细胞在小鼠中形成肿瘤的血管化程度明显低于对照组。
- 曾革非张立国张智清
- 关键词：血管内皮生长因子受体腺病毒伴随病毒介导
- 血管内皮生长因子受体KDR胞外区基因对裸鼠人膀胱癌生长的影响被引量：2
- 2001年
- 目的 研究血管内皮生长因子 (VEGF)受体KDR胞外区基因对肿瘤新生血管的抑制作用。方法 采用脂质体转染技术 ,将KDR胞外区基因的真核表达质粒pcDNA 3.1/KDRn7转入人膀胱癌EJ细胞 ,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆 ,经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆 ,阳性细胞克隆进行了RT PCR鉴定。结果 鸡胚测活表明 ,EJ细胞表达rKDRn7的能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成 ;表达rKDRn7的EJ细胞株对裸鼠人膀胱癌生长及血管生成明显抑制 ,实验组的微血管密度 (MVD)为 12± 4,阴性对照组 6 2± 11。结论 阻断VEGF/KDR信号传导途径能够抑制肿瘤新生血管的形成 ,延缓肿瘤的生长速度。
- 张志超曾革非张智清张立国曾荔郭应禄
- 关键词：膀胱肿瘤膀胱癌血管内皮生长因子受体
- 流行性感冒病毒M2蛋白可溶性表达及其免疫原性的研究被引量：6
- 2001年
- 流行性感冒 (流感 )病毒的M2蛋白是其保护性抗原之一 ,在几乎所有甲型流感病毒中高度保守 ,因此可以用来研究具有交叉保护能力的流感疫苗。然而M2分子在病毒颗粒中含量非常少 ,用从病毒中纯化的方法很难获得足够的免疫原。在原核表达时发现 ,M2蛋白对宿主菌具有很强的毒性作用 ,导致其死亡 ,因此很难获得高表达。在本研究中 ,采用RT PCR方法从病毒感染的MDCK细胞中克隆了A1/PR/ 8/ 34毒株的M 2基因 ,然后通过基因工程手段缺失了M 2蛋白的跨膜区 2 6～ 5 5位氨基酸的编码序列 ,将其克隆到 pET 32a中 ,与硫氧还蛋白融合 ,在大肠杆菌中获得了高效表达 ,并且表达产物以可溶形式存在 ,不形成包涵体。利用硫酸铵盐析结合金属离子鏊和柱亲和层析的方法纯化了表达的融合蛋白。免疫荧光实验表明 ,融合蛋白免疫小鼠后产生的抗血清能够与流感病毒感染的细胞发生特异性的结合 ,证明表达产物具有流感病毒M2蛋白的抗原性。
- 张立国曾革非董婕陈爱君姚立红郭元吉张智清
- 关键词：流行性感冒病毒可溶性表达免疫原性
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肾癌中的分布及其意义被引量：5
- 2001年
- 目的 研究肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)受体在肾癌组织中的分布及其意义。 方法 采用RT PCR及NorthernBlot的方法检测TRAIL受体在肾癌组织及正常肾组织 ,肾癌细胞系GRC I和正常肾小管细胞系HK 2中的表达。 结果 死亡受体DR4、DR5在肾癌组织及正常肾组织 ,肾癌细胞系GRC I和正常肾小管细胞系HK 2中强表达 ;假受体DcR 1在正常肾组织和正常肾小管细胞系HK 2中强表达 ;假受体DcR 2未见表达。 结论 TRAIL基因在肾癌肿瘤细胞的凋亡机制中可能发挥重要的作用。
- 张志超张智清张强张立国曾革非郭应禄
- 关键词：肿瘤坏死因子配体肾肿瘤TRAIL
- 人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化
- 2000年
- 目的 为了获得大量重组人血管内皮细胞生长因子（ Ｈｕｍａｎ Ｖａｓｃｕｌａｒ ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ， ｈＶＥＧＦ），以研究其在心血管和药学领域具有的潜在药用价值。方法 用ＰＣＲ方法扩增目的基因ｈＶＥＧＦ１６５，连接到 ｐＥＴ－３ａ载体上，并转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，建立可高效表达的ｐＥＴ－３ａ／ｈＥＶＧＦ１６５重组质粒，经ＩＰＴＧ诱导表达， Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测表达产物的抗原性，通过 Ｍｏｎｏ Ｑ阴离子层析和ＦＰＬＧ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２分子筛柱层析，进行初步纯化，用 ＭＴＴ法检测其生物学活性。结果 ｐＥＴ－３ａ／ｈＥＶＧＦ表达产物经纯化后，其纯度可达到９０％以上，表达的ｒｈＥＶＧＦ１６５能 呈剂量依赖性地促进人静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的增殖。结论组建了天然形式ｈＥＶＧＦ１６５的大肠杆菌菌株，并摸索 出一套纯化工艺，为大规模生产重组ｈＥＶＧＦ１６５奠定了基础。
- 周小明曾革非钭理强安乃莉姚立红陈爱君张智清
- 关键词：血管内皮细胞因子纯化大肠杆菌
- 应用硫氧还蛋白促进外源蛋白在大肠杆菌的可溶性表达被引量：22
- 1999年
- 为了观察硫氧还蛋白（ＴｒｘＡ）促进外源蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的作用，我们从质粒ｐＥＴ－３２ａ（＋）上克隆了ｔｒｘＡ基因，构建了ＴｒｘＡ表达质粒ｐＴ－ＴｒｘＡ。将该质粒与其它蛋白基因的表达质粒共同转化Ｅｃｏｌｉ并同时获得表达。结果表明，共表达ＴｒｘＡ可以明显促进外源蛋白，如甲状旁腺激素相关蛋白（ＰＴＨｒＰ）、ＰＴＨｒＰ受体（ＰＴＨｒＰ－Ｒ）和血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的可溶性表达。说明共表达ＴｒｘＡ有助于外源蛋白的正确折叠，防止包涵体的形成。
- 安乃莉张智清王嵩刘红兵曾革非姚立红陈爱君
- 关键词：硫氧还蛋白共表达外源蛋白大肠杆菌
- TNF受体(P55)和IgGFc的融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 在真核细胞表达具有生物活性的可溶性肿瘤坏死因子 (TNF)受体蛋白 ,用于中和TNF的毒性。方法 将TNFR(P5 5 )的胞外区基因和人IgGFc段基因通过 18个碱基的凝血酶切点连接 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,在COS7和BHK细胞分别得到目的蛋白的表达。结果 在真核表达系统表达了TNFR(P5 5 )胞外区与人IgGFc段的融合蛋白 ,免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及抑制TNF的活性。结论 真核表达的融合蛋白产物具有可溶性TNF受体 (P5 5 )的生物学活性。
- 安乃莉徐春晓姚立红陈爱君曾革非张立国张智清
- 关键词：肿瘤坏死因子真核表达系统
- 血管内皮生长因子可溶性受体flt-1_(n3)对裸鼠人膀胱癌生长的影响被引量：4
- 2001年
- 目的 研究血管内皮生长因子 (VEGF)受体flt 1胞外区基因抗肿瘤新生血管生成的作用。 方法 采用脂质体转染技术将含有flt 1胞外区前三个IgG样结构区域的真核表达质粒 pcD NA3.1/KDRn7转入人膀胱癌EJ细胞 ,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆 ,经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆 ,阳性细胞克隆进行PCR和RT PCR鉴定。对裸鼠人膀胱癌组织切片进行免疫组化染色 ,定量分析微血管密度。 结果 PCR和RT PCR结果显示重组质粒转入EJ细胞及在转录水平表达 ;免疫组化的微血管密度实验组明显低于阴性对照组。 结论 阻断VEGF/flt 1信号传导途径能够抑制肿瘤新生血管的形成 。
- 张志超张智清曾革非张立国郭应禄
- 关键词：膀胱肿瘤血管内皮生长因子受体
- TNF受体(P55)胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2001年
- TNF与多种疾病密切相关。为了获得大量具有生物学活性的可溶性TNF受体用以拮抗TNF的毒性作用 ,在原核表达系统中表达了TNFR(P5 5 )的胞外区与TrxA的融合蛋白。将TNFR(P5 5 )胞外区去信号肽的前三个结构域基因克隆入融合蛋白表达载体 pET 32a ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中高效表达了TrxA TNFR融合蛋白。表达产物以包涵体形式存在 ,经过变性和复性 ,并经镍金属鳌和柱亲和层析纯化 ,得到了纯度较高的可溶性受体蛋白的初纯品。免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明 :该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及良好的抑制TNF的生物学活性。
- 安乃莉徐春晓姚立红陈爱君曾革非张立国张智清
- 关键词：基因克隆融合蛋白大肠杆菌
- 可溶性人肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)在大肠杆菌中的表达及其活性检测被引量：3
- 2001年
- 肿瘤坏死因子 (TNF)是一种多功能性的细胞因子 ,与许多重大疾病有关。为了抑制TNF的生物学活性 ,将TNF受体Ⅱ胞外区在大肠杆菌中进行了可溶性表达 ,并通过金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。结果表明 ,纯化的重组蛋白能够识别并结合TNF ,同时能中和TNF的生物学活性 ,抑制其对细胞的杀伤作用 ,具有潜在的临床应用前景。
- 徐春晓姚立红陈爱君安乃莉曾革非张立国张智清
- 关键词：肿瘤坏死因子受体可溶性受体大肠杆菌
