李卫松
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 供职机构：西安交通大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠胚胎神经干细胞的体外培养与鉴定被引量：6
- 2011年
- 目的通过改进和优化神经干细胞(NSCs)的体外培养方法,为进一步研究NSCs的生物学行为提供基础。方法孕14 d的美国癌症研究所(ICR)小鼠,无菌条件下剪取前脑皮质,采用机械法分离原代细胞进行培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代和培养。以1%胎牛血清诱导分化。应用免疫荧光方法行巢蛋白(nestin),β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色,对培养的细胞进行鉴定。结果从胚胎小鼠前脑皮质中分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈nestin免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-tubulinⅢ和GFAP阳性细胞。结论机械法分离胚胎小鼠前脑皮质细胞,机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代和培养,能够成功获得胚胎小鼠前脑的NSCs。
- 张蓬勃李卫松高明李玲王妮雷珊吕海侠陈新林刘勇
- 关键词：神经干细胞胚胎细胞培养小鼠
- 抑制小鼠低氧诱导因子-1α基因的小干扰RNA腺病毒载体的构建和功能鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建针对小鼠低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible transcription factor-1α，HIF-1α）基因的小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）腺病毒载体AdHIF-1α-shRNA也GFP，鉴定AdHIF-1α-shRNA-FGFP在培养的小鼠胚胎神经干细胞中对HIF-1α表达的影响，为研究HIF-1α信号途径在神经干细胞生物学中的作用提供基础。方法采用生物信息学方法设计合成针对HIF-1α的siRNA靶DNA序列，通过DNA重组技术构建小鼠HIF-1α-shRNA-EGFP腺病毒载体，PCR和测序鉴定。体外转染培养的小鼠前脑皮质神经干细胞，流式细胞仪检测转染效率，对AdHIF-1α-shRNA-EGFP转染的细胞进行低氧处理，双重免疫荧光检测小鼠胚胎神经干细胞中HIF-1α表达，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot定量HIF-1α基因和蛋白水平。结果所克隆的序列和已知序列一致；AdHIF-1α-shRNA-EGFP可高效转染小鼠前脑皮质神经干细胞；RT-PCR和Westernblot结果显示，AdHIF-1α-shRNA-EGFP转染小鼠前脑皮质神经干细胞后，低氧条件下小鼠前脑皮质神经千细胞中HIF-1α的基因和蛋白表达分别降低52．05％和67．27％。结论构建的AdHIF-1α-shRNA也GFP能够成功抑制低氧条件下小鼠前脑皮质神经干细胞中HIF-1α的表达。
- 张蓬勃李卫松李旭郑娟李玲王妮雷珊陈新林吕海侠刘勇
- 关键词：神经干细胞小鼠低氧诱导因子-1Α小干扰RNA腺病毒载体
- 小容量高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液对小鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤的影响
- 2011年
- 目的 研究高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液（hypertomic sodiam chloride hydroxyethyl starch 40 injection，HSH）对小鼠局灶性脑缺血，再灌注损伤（ischemia／reperfusion injury，I/RI）的影响。方法30只昆明种小鼠，应用随机排列表进行随机分组，分成3组，每组10只：高渗氯化钠羟乙基淀粉40组（HSH组）、羟乙基淀粉（hydroxyetylstarch，HES）130／0．4组（HES组）、对照组（Control组）。于缺血后即刻经尾静脉注射不同药物：HSH组给予4ml／kHSH；HES组给予4ml／kg羟乙基淀粉130／0．4氯化钠注射液；Control组给予4ml／kg的生理盐水。缺血后12、24、72h行神经行为学评分；24h进行TYC染色，计算脑梗塞面积百分率；72h甲苯胺蓝染色，检测半暗带内存活神经元密度。结果缺血后12、24、72h的神经行为学评分，HSH组为10．0±2．0，11．4±1．8，10．4±1．8；HES组为12．8±1．8，10．2±1．9，10．6±2．7；Control组为12．0±2．1，10．2±2．4，10．0±2．5。缺血后24h的梗塞面积，HSH组为（34．0±7．8）％，HES组为（38．8±2．9）％，Control组为（35．6±6．5）％。缺血后72h的半暗带内存活神经元密度，HSH组为（264±57）个／mm2，HES组为（302±49）个／mm2，Control组为（288±69）个／mm2。3组小鼠的神经行为学评分、梗塞面积百分率以及半暗带内存活神经原元密度组间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论HSH对小鼠局灶性脑I／RI无改善作用。
- 张蓬勃王妮高明李玲李卫松雷珊李旭郑娟刘鹏斌
- 关键词：羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液半暗带
- 右美托咪定对咪达唑仑所致神经干细胞增殖、分化和凋亡改变的影响
- 2016年
- 目的研究咪达唑仑对神经干细胞（neuralstemcells，NSCs）增殖、分化及凋亡的毒性作用及右美托咪定（dexmedetomidine，Dex）能否缓解咪达唑仑的神经毒性作用。方法分离培养孕14～15d大鼠胚胎大脑皮质NSCs，将NSCs接种于培养板中，培养24h后，将其按照完全随机分组法分为3组：对照组（C组）、咪达唑仑组（M组）、Dex联合咪达唑仑组（M＋D组）。分别采用咪达唑仑、Dex联合咪达唑仑处理培养的第一、二代NSCs24h，采用噻唑蓝[3-（4，5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTF）]比色法检测细胞活力，溴脱氧尿苷（5-bmmo-2-deoxyuridine，BrdU）掺入法检测细胞增殖，免疫细胞化学法观察NSCs分化情况，原位末端标记法（terminal dUTP nick-endlabeling，TUNEL）检测细胞凋亡。结果与对照组比较，咪达唑仑干预NSCs24h可降低细胞活力（对照组0．214±0．006，咪达唑仑组0．187±0．002）、减少细胞增殖[（对照组（35．±1．0）％，咪达唑仑组（27．6±1．O）％]、增加细胞凋亡[对照组（5．7±0．8）％，咪达唑仑组（7．8±1．1）％]（P〈0．01），但对NSCs分化没有显著影响（P〉0．05）；与咪达唑仑处理比较，Dex联合咪达唑仑干预NSCs24h，可增加细胞活力[M＋D组0．233±0．007]和细胞增殖[M＋D组（35．7±1．1）％]、减少细胞凋亡[M＋D组（5．3±1．0）％]（P〈0．01），但对NSCs向神经元和星形胶质细胞分化无明显影响（P〉0．05）。结论Dex可缓解咪达唑仑抑制NSCs增殖、促进细胞凋亡的作用，但不影响其向神经元和星形胶质细胞方向分化。
- 雷珊张蓬勃李慧娴张红李蓉李卫松郑娟吕海侠陈新林刘勇
- 关键词：咪达唑仑神经干细胞增殖分化凋亡
