李呈军
- 作品数：51 被引量：175H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 一株禽流感病毒全基因的序列分析被引量：3
- 2005年
- 通过反转录_聚合酶链式反应(RT_PCR)技术对禽流感病毒A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)的8个基因片段即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA分别进行扩增,然后将其克隆到PMD18_T载体后进行序列测定和拼接;并将克隆到的8个基因片段与以下毒株各个基因的相应序列进行比较分析:Duck/HongKong/Y280/97(DHKY280/97)、Duck/HongKong/YT439/97(DHKY439/97)、Quail/HongKong/G1/97(QHKG1/97)、A/Chicken/Beijing/1/94(CBJ1/94)、Chicken/HongKong/G9/97(CHKG9/97)、A/Turkey/California/1/66(TC/1/66)。结果表明:我们克隆到的TW1/66株的8个基因片段均含有相应病毒基因的完整开放阅读框架:TW1/66的各基因与TC/1/66株相应各基因同源性最高(NS基因除外,同源性只有67.4%)。与其它各毒株各基因同源性均较低,但与DHKY439/97各基因同源性高于与DHKY280/97、QHKG1/97、CBJ1/94、CHKG9/97各基因同源性。
- 刘丽玲王秀荣陈化兰邓国华乔传玲李呈军
- 关键词：禽流感病毒基因克隆
- 应用酵母双杂交系统筛选与流感病毒NS2蛋白相互作用的宿主蛋白被引量：2
- 2015年
- 流感病毒的NS2蛋白能够介导病毒核糖核蛋白复合体(v RNP)的核输出过程,而且可以调控病毒聚合酶的活性,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程。为鉴定与NS2相互作用的宿主蛋白,本研究利用流感病毒NS2蛋白作为"诱饵"蛋白,通过经典酵母双杂交系统筛选与其相互作用的宿主蛋白,并利用免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull-down方法进一步验证其相互作用关系。结果表明,通过酵母双杂交系统筛选含有Calu-3、A549、THP-1和U251 4种细胞的c DNA文库,共筛选到7种蛋白,分别为HGS、EXOSC4、ZWINT、PRDX3、IRF3、NDUFB9和RMND5B,根据Gene Ontology分析结果表明,这些蛋白分别参与细胞生长发育、细胞代谢和细胞定位等过程。其中对过氧化物氧还酶3(PRDX3)进行了Co-IP和GST pull-down试验证实重组表达的NS2蛋白和PRDX3蛋白在293T细胞中存在特异性的相互作用。本研究为进一步研究两者之间相互作用如何影响NS2蛋白功能以及病毒的复制周期奠定了基础。
- 邵信媛朱鹏阳罗维玉赵玉辉梁立滨姜丽陈化兰胡永浩李克生李呈军
- 关键词：禽流感病毒酵母双杂交免疫共沉淀宿主蛋白
- A/African Startling/England-Q/983/79(H7N1)与我国H7N2亚型禽流感病毒分离株的比较
- 2006年
- 本研究通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增了禽流感病毒A/AfricanStartling/Eng-land-Q/983/79(A.S/E.Q)(H7N1)的8个基因片段即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA基因,将其分别克隆到PMD18-T载体后进行序列测定;并将克隆到的8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较分析。结果表明所克窿到的8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架;HA、NA基因的序列分析表明A.S/E.Q符合低致病力禽流感病毒的特征;与我国H7N2亚型AIV分离株A/chicken/Hebei/1/02的序列比较发现,A/chicken/Hebei/1/02的HA、M、NP、PB1、PA基因与A.S/E.Q同源性最高,说明我国北部分离的AIV起源于A.S/E.Q。
- 刘丽玲陈化兰李雁冰李呈军魏萍王秀荣
- 关键词：H7N1H7N2分离株
- 鸭源H7N9亚型流感病毒HA蛋白的真核表达及其免疫保护效力分析被引量：1
- 2019年
- 为进行鸭源H7N9亚型流感病毒HA蛋白表达纯化及其免疫保护效力分析,本研究以鸭源流感病毒A/Duck/Fujian/S4170/2014 (H7N9)HA基因为模板,PCR扩增后将HA片段克隆至昆虫细胞表达载体p Fast Bac1中。将构建的重组质粒p FBacH7HA转化DH10Bac感受态细胞,提取PCR鉴定为阳性的重组杆粒Bacmid-H7HA,转染SF9昆虫细胞。结果显示重组Bacmid-H7HA表达HA蛋白,并装配成重组杆状病毒,将该病毒感染High Five细胞,大量表达H7-HA蛋白。免疫荧光试验、SDS-PAGE及western blot分析结果表明H7-HA蛋白正确表达且纯度达90%以上,血凝试验表明表达蛋白具有良好的生物活性。利用纯化的H7-HA蛋白免疫SPF鸡后进行攻毒保护试验,评价该蛋白作为免疫原对SPF鸡的免疫保护效力,结果显示HA蛋白免疫组鸡只得到100%保护。以上结果表明本研究表达纯化的H7-HA蛋白可以作为防控H7亚型禽流感的候选亚单位疫苗。
- 周陈陈梁立滨赵青青黄山雨李奇兵王广文李俊平赵玉辉曾显营施建忠李呈军陈化兰姜丽
- 关键词：HA蛋白杆状病毒表达免疫保护
- 禽流感重组禽痘病毒rFPV-HA-NA活载体疫苗的研究被引量：41
- 2003年
- 目的 确定重组禽痘病毒rFPV HA NA疫苗株的最佳免疫剂量、免疫日龄、免疫产生时间及免疫持续期。方法 用重组禽痘病毒rFPV HA NA疫苗免疫SPF鸡 ,免疫后用HPAIVH5N1和H7N1AIV进行致死性攻击 ,观察疫苗免疫后的保护效果。结果 大约含 10 0个PFU的重组病毒即能使机体获得对强毒攻击的 10 0 %保护 ;对 1日龄SPF鸡进行免疫接种 ,4周后能 10 0 %抵抗HPAIV的致死性攻击 ;2周和 3周龄的免疫鸡对免疫周 1后的强毒攻击具有 10 0 %的保护力 ;重组病毒在免疫后10个月时 ,其诱导产生的血凝抑制 (Haemagglutinininhibition ,HI)抗体仍保持在 2～ 3log2水平 ,并可以提供 10 0 %抵抗病毒的致死性感染。结论 重组禽痘病毒rFPV HA NA疫苗是一种安全、高效的基因工程疫苗 。
- 乔传玲姜永萍李呈军田国斌孟庆文邓国华王秀荣于康震唐秀英
- 关键词：禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫学
- 鸡痘疫苗对禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力的影响
- 禽流感病毒(AIV)HA和NA双基因重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA能够诱导鸡本产生100％抵抗H5N1高致病力禽流感病毒(HPAIV)的攻击.而当鸡群已进行鸡痘疫苗免疫或者感染了鸡痘病毒的情况下,此重组疫苗的免疫效力如...
- 乔传玲李呈军李泽君田国彬陈化兰于康震
- 关键词：鸡痘疫苗禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力DNA重组
- 文献传递
- 中国大陆H9N2亚型禽流感病毒遗传演化研究
- H9N2亚型禽流感病毒在全世界范围内广泛流行.我国是在1994年从广东省的一个鸡场中分离到第一株H9N2亚型禽流感病毒,尽管此后采取了一系列的根除措施,但是由该亚型禽流感病毒引起的疾病并未得到有效的控制,特别是在1998...
- 李呈军井波余丹丹邓国华田国彬李雁冰陈化兰于康震
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型动物病毒学
- 文献传递网络资源链接
- 不同免疫途径及剂量接种禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力的研究
- 表达禽流感病毒(AIV)H5 HA和N1 NA基因的重组禽痘病毒rFPV-HA-NA能够诱导鸡体产生对H5N1和H7N1高致病力禽流感病毒(HPAIV)攻击的100％保护力.本实验将不同剂量的重组疫苗分别经翅下刺种、肌肉...
- 乔传玲李呈军刘志军李雁冰于康震陈化兰
- 关键词：禽流感接种途径免疫效力
- 文献传递
- 一株H9N2禽流感病毒HA、NA感染性克隆的构建
- 2010年
- 为了构建重组禽流感病毒,试验选取具有代表性的禽流感毒株A/chicken/Shanghai/10/01(H9N2),通过RNA提取和RT-PCR获取HA、NA完整基因,并将其克隆至经SapⅠ酶切、Klenow(大片段)处理、小牛碱性磷酸酶(CIAP)处理后的载体质粒pBD中,构建pBD-HA和pBD-NA质粒;将克隆产物分别进行EcoRⅠ+BamHⅠ(pBD-HA)和EcoRⅠ+NotⅠ(pBD-NA)双酶切鉴定及序列测定。结果表明:所克隆的基因大小和序列均与理论值相符,说明感染性克隆构建成功。
- 井波李呈军陈化兰
- 关键词：H9N2亚型感染性克隆
- 宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白相互作用的研究被引量：4
- 2021年
- 核蛋白(NP)是流感病毒的主要结构蛋白,其与RNA依赖性的聚合酶蛋白(PB2、PB1和PA)及vRNA构成核糖核蛋白复合体,参与流感病毒复制过程中的多个阶段。宿主因子着丝粒蛋白V(CENPV)在细胞生命周期中发挥重要作用,但是目前尚未见关于CENPV蛋白与流感病毒NP蛋白相互作用的报道。为研究宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白相互作用机制,本实验利用酵母双杂交技术筛选与NP蛋白相互作用的CENPV,利用酵母回交验证,结果显示CENPV与NP诱饵质粒共同转化Y2H酵母感受态细胞,在DDO、QDO和QDO/X/A 3种营养缺陷型的培养基上均能生长,并使菌落呈现蓝色,与阳性对照结果一致,而阴性对照组在QDO和QDO/X/A培养基上均未观察到菌落,表明在酵母系统中宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白存在相互作用。将pCAGGS-CENPV-Myc(1μg)表达质粒与pCAGGS-NP(1μg)质粒共转染293T细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)检测,结果显示鼠抗NP MAb仅可结合CENPV与NP共转染组中的CENPV,表明宿主蛋白因子CENPV与流感病毒的NP蛋白存在相互作用;进一步利用激光共聚焦试验检测,结果显示在A549细胞中宿主因子CENPV与流感病毒的NP蛋白存在共定位。根据人CENPV序列设计合成CENPV的特异性siRNA,利用RNAiMAX将CENPV siRNA转染A549细胞,48 h后进行细胞活力测定和病毒感染试验,结果显示利用siRNA干扰技术下调CENPV表达后对细胞活力无影响,但可促进流感病毒在A549细胞中的复制。以上研究结果首次证实宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白存在相互作用,并且调控流感病毒的复制。本研究进一步完善了流感病毒NP蛋白与宿主因子的相互作用网络,为宿主因子调控流感病毒复制研究提供参考。
- 温霞赵玉辉李奇兵王倩孔凡迪梁立滨王广文李俊平姜丽陈化兰李呈军
- 关键词：酵母双杂交流感病毒核蛋白相互作用
