李斌元
- 作品数：42 被引量：98H指数：5
- 供职机构：南华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学化学工程更多>>
- 耐辐射奇球菌基因组DNA表达文库的构建与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建耐辐射奇球菌(Deinococcus radioduransR1)基因组DNA表达文库,为进一步研究耐辐射奇球菌高抗辐射的调控网络奠定基础。方法:提取耐辐射奇球菌基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组DNA部分酶切成0.5-5kb大小的片段,用T4DNA连接酶将部分酶切片段与经BamHⅠ和碱性磷酸酶(CIAP)处理的pGADT7载体进行连接后电击转化大肠杆菌DH5α。结果:得到重组子数为2.2×104,扩增后的文库滴度为108cfu/mL。结论:构建了耐辐射奇球菌基因组pGADT7表达文库,为进一步筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础。
- 徐向红李斌元马云廖永强何淑雅
- 关键词：耐辐射奇球菌酵母双杂交系统
- 生物技术省级特色专业建设的探索与实践被引量：3
- 2011年
- 结合南华大学的实际,生物技术专业经过积极的探索与实践,提出了培养具有"医药"特色的应用型生物技术创新人才的目标与思路,围绕培养方案、课程建设、教学改革、实践教学等环节阐述了生物技术省级特色专业建设的实践过程。
- 龙石银曹朝晖田英乔新惠虞佳林国平李斌元
- 关键词：生物技术教学改革
- FXR1真核表达载体的构建与表达及其对神经节苷脂浓度的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:构建脆性X相关基因1(FXR1)的真核表达载体并检测其对神经节苷脂(GM1)浓度的影响。方法:以pYESTrp3-FXR1为模板,利用PCR扩增FXR1基因,PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切后插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得的阳性克隆进一步酶切及测序鉴定;将构建成功的pcDNA3.1(-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,采用Western blot检测FXR1的表达情况,同时采用ELISA试剂盒检测细胞内GM1的浓度。结果:PCR扩增产物为1.9 Kb的片段,与FXR1基因大小相符,阳性克隆经双酶切后获得两条分别为5.4 Kb和1.9 Kb的片段,测序结果与GeneBank中序列相同。构建成功的重组质粒pcDNA3.1(-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,细胞中FXR1的表达增加,同时有效提高了细胞内GM1的浓度(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-FXR1,FXR1的表达增加可以提高SH-SY5Y细胞中的GM1浓度,这些为后续深入研究FXR1基因在神经组织发育中的调控功能及其在脆性X综合征(FXS)中的作用机制奠定了基础。
- 马云王昌博李斌元秦凌雪付亮董晓何淑雅
- 关键词：真核表达神经节苷脂
- 壮族人群脆性X综合征中不稳定遗传序列的研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究湖南省壮族人群FraX中不稳定DNA序列的多态性,建立一种快速筛查FraX中FMR-1动态突变的方法,为提高遗传咨询和诊断水平奠定基础。方法采用经典的PCR-Southernblot法对156例X染色体FRAXA位点(CGG)n重复序列拷贝数进行测定并与PCR-序列分析胶银染法进行比较。结果(CGG)n重复序列范围为6～57,高峰为29;发现一男性携带者,CGG重复数为57;PCR-序列分析银染法结果与PCR-Southernblot法结果完全一致,从PCR扩增到产物检测只需4,5h即可完成。结论壮族人群(CGG)n频率分布高峰为29,其次为27,30;PCR-序列分析胶银染法快速、直接、简便、实用,适合脆性X综合征的大规模群体筛查。
- 马云何淑雅李斌元刘四春王桂良闵凌峰
- 关键词：脆性X综合征三核苷酸重复基因诊断
- 智力低下相关蛋白(FXR1P)与CMAS相互作用的生物学效应研究(英文)被引量：2
- 2013年
- 脆性X综合征(FXS)是一种遗传性智力低下疾病,其发病率仅次于21三体综合征.脆性X智力低下蛋白(FMRP)是FXS的关键性致病因子,该蛋白由脆性X智力低下基因1(FMR1)编码所得.FMR1在神经肌肉和睾丸组织中广泛表达.脆性X相关蛋白1(FXR1P)则是由FMR1的同源基因脆性X相关基因1(FXR1)编码所得,并且与蛋白质和RNAs之间存在着相互作用.许多疾病都涉及到FXR1表达的改变.为了了解FXR1P与CMAS(胞嘧啶单核苷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶)相互作用所产生的的生物学效应,我们构建了FXR1的过表达载体,并观察其在PC12细胞(大鼠鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)和VSMC(血管平滑肌细胞)中的表达以及继而对于细胞形态和CMAS活性相关的许多细胞指标的效应.我们证实,FXR1基因的过表达可以提高PC12细胞中CMAS的活性,并对于该类细胞的生长提供一定程度的保护作用.PC12细胞是一种较为常见的用于研究神经系统疾病的细胞系.结论:我们推测FXR1P是一个组织特异调节因子,可以改变PC12细胞而非VSMC细胞中神经节苷酯(GM1)的浓度.
- 马云秦凌雪董晓李斌元王昌博许璨王三虎何淑雅
- 关键词：GM1生物学效应PC12细胞VSMC
- 甲醇提取柑橘皮总黄酮及其体外抗氧化活性研究被引量：4
- 2012年
- 目的:以柑橘皮为原料,利用甲醇为溶剂,采用浸提法从柑橘皮提取生物活性物质总黄酮,通过体外实验评价柑橘皮总黄酮的抗氧化活性,以提高柑橘资源的开发利用效率。方法:通过单因素实验和正交实验确定柑橘皮总黄酮的最佳提取工艺条件。以芦丁为对照,体外测定柑橘皮总黄酮提取物对超氧阴离子自由基(O-2.)、羟自由基(.OH)及二苯代苦味酰基苯肼(DPPH.)自由基的清除率。结果:以甲醇为溶剂提取柑橘皮总黄酮的最佳提取工艺条件为:料液比1:30、溶剂浓度70%、温度60℃、浸提时间4 h的提取条件下,总黄酮产量为4.96%。体外抗氧化活性研究结果表明,柑橘皮总黄酮具有较高的自由基清除能力,其清除效果随提取物浓度的增加而增强。柑橘皮总黄酮对O-2.和DPPH.自由基的清除率高于芦丁,而对于.OH自由基的清除率比芦丁稍低。结论:柑橘皮总黄酮具有明显的抗氧化能力,为综合开发利用柑橘资源提供了科学依据。
- 文红波吴玉兰李斌元冷超群曹运长
- 关键词：柑橘甲醇总黄酮抗氧化
- CLN8P相互作用蛋白靶基因的获取与初步鉴定
- 2005年
- 为了获得CLN8P相互作用蛋白靶基因并对其进行初步鉴定,实验经抽提酵母质粒DNA,电转化大肠杆菌,选择性培养基分离质粒,酶切鉴定、测序、生物信息学分析,结果获得了CLN8P相互作用蛋白阳性克隆的一个靶基因BAG5;利用酵母双杂交共转化法初步验证,表明BAG5蛋白与CLN8P具有相互作用,并可能因此影响到神经细胞的正常生长.这将有利于进一步深入研究CLN8的功能及阐明NCLs发病机制.
- 黄保英何淑雅李斌元
- 关键词：酵母双杂交相互作用蛋白
- BTF红色荧光蛋白表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达和定位研究
- 2014年
- 目的构建Bcl-2相关转录因子1（BTF）与红色荧光蛋白（RFP）融合表达载体并在大鼠血管平滑肌VSMC细胞中表达，为进一步研究BTF的相互作用蛋白及作用机制奠定实验基础。方法以人体外周血白细胞cDNA为模板，PCR扩增Btf基因，插入红色荧光蛋白表达载体pDsRed-N1中．构建重组表达载体pDsRed-N1-Btf，转染大鼠血管平滑肌VSMC细胞，通过激光共聚胶显微镜观察其在转染细胞中的表达及定位。结果DNA测序、酶切鉴定的结果显示，红色荧光蛋白表达载体pDsRed-N1-Btf构建成功，且序列正确。转染后经激光共聚胶显微镜观察到VSMC细胞中有红色荧光。且BTF主要定位于细胞质中。结论成功构建了pDsRed-N1-Btf表达载体，并主要定位于VSMC的胞质中，为后期研究BTF的相互作用蛋白及其与相互作用蛋白之间的作用机制奠定了良好的基础。
- 马云王昌博杨满君秦凌雪李斌元何淑雅
- 关键词：红色荧光蛋白融合蛋白
- 生物化学双语教学的实践与探讨被引量：5
- 2007年
- 马云何淑雅李斌元张秋菊虞佳
- 关键词：教育教学生物化学双语
- 耐辐射球菌基因组DNA酶切条件的优化被引量：2
- 2009年
- 目的研究耐辐射奇球菌Deinococcus radiodurans R1基因组DNA酶切的优化条件,从而获得构建基因文库所需的DNA片段,旨在构建DR菌基因组DNA表达文库,进一步筛选文库中与其有相互作用的蛋白。方法培养耐辐射奇球菌,提取基因组DNA,用Sau3AI酶切DR菌基因组DNA,分别从酶浓度、酶切时间等选择酶切产生的DNA片段集中在0.5-5.0 kb的最佳条件,最后通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果Sau3AI酶切DR菌基因组DNA的最佳酶浓度为0.125 u/10μL,最佳作用时间为3 h,此条件下DR菌基因组DNA片段主要集中于0.5-5.0 kb。结论优化了DR菌基因组DNA的酶切条件,为进一步构建DR菌基因组DNA表达文库,筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础。
- 马云徐向红李斌元何淑雅
- 关键词：耐辐射奇球菌
