李翠玲
- 作品数：52 被引量：271H指数：9
- 供职机构：山东省千佛山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省中医药科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 鼠伤寒沙门菌AvrA蛋白的原核表达及纯化被引量：3
- 2018年
- 目的克隆,表达和纯化沙门菌AvrA蛋白,为AvrA蛋白的结构和功能研究奠定基础。方法采用生物信息学方法对AvrA蛋白的性质进行预测。使用PCR的方法从沙门菌基因组上获得AvrA36-277基因,并克隆到原核表达载体pGl01上;使用大肠埃希菌BL21(DE3)菌株进行目的蛋白的表达,表达产物分别经镍离子亲和柱、阴离子交换柱以及凝胶层析柱层析纯化。结果成功获得重组质粒AvrA36-277/pGl01,转化BL21后经IPTG诱导获得分子质量单位约为27ku的重组AvrA36-277蛋白。该蛋白以可溶形式表达,层析纯化后蛋白浓度达5mg/ml,蛋白纯度95%。结论使用大肠原核表达系统可稳定表达沙门菌的AvrA36-277蛋白,该蛋白可溶性良好,获得蛋白纯度较高,可用于蛋白底物的筛选、晶体生长及三维结构解析。
- 杨银龙岳盈盈宋楠楠王玮玮马胡李翠玲李冰清
- 关键词：鼠伤寒沙门菌生物信息学原核表达
- 中药淫羊藿苷抑制肝癌HepG2.2.15细胞增殖和免疫逃逸作用研究被引量：38
- 2007年
- 目的:观察中药淫羊藿苷(ICA)对HepG2.2.15细胞增殖及对CD3AK细胞杀伤活性的影响,探讨ICA对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用,为ICA的开发应用提供新的理论和实验依据。方法:MTT法检测细胞增殖和细胞杀伤活性;流式细胞术检测细胞表面分子表达水平和细胞凋亡率。结果:50μg/mlICA作用HepG2.2.15细胞48、72小时的增殖抑制作用明显,抑制率分别为22.04%、29.68%(P<0.05),呈时间依赖效应。HepG2.2.15细胞经ICA处理后,FasL的表达率由16.22%显著下降至8.29%,Fas表达率由0.79%提高到1.70%(P>0.05)。ICA可明显抑制HepG2.2.15细胞诱导Jurkat细胞凋亡,凋亡率从46.66%下降为18.20%。ICA处理HepG2.2.15细胞后,不同效靶比的CD3AK细胞的杀伤活性,可分别由对照组的15.81%、35.04%、42.85%显著提高至42.58%、67.55%、88.93%(P<0.05,P<0.01),呈效靶比依赖效应。结论:ICA能有效地抑制HepG2.2.15细胞增殖,并有一定时间依赖效应;ICA可下调FasL的表达,上调细胞表面Fas的表达,对HepG2.2.15细胞诱导的T淋巴细胞凋亡作用有一定阻断,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸作用;ICA显著增强HepG2.2.15细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性。
- 王谦张玲毛海婷顾洪涛夏武青温培娥李翠玲杨尚军
- 关键词：HEPG2.2.15JURKAT细胞FAS/FASLCD3AK免疫逃逸
- 中药抗肿瘤的生物增敏关键技术与应用研究
- 姜国胜任霞丁慧芳宋冠华李翠玲阴海鹏王郡甫范华
- 该研究属于医药卫生科学领域。是在国家基金(编号：30771103，81172792)、山东省科技发展计划项目(编号：2008GG2NS02023)等资助下完成的系列性研究成果。研究背景：由于化疗药物的耐药性和毒副作用，国...
- 关键词：
- 关键词：天然药物生物治疗
- MTT比色分析法的改良及初步应用被引量：71
- 1996年
- ＭＴＴ比色分析法已广泛应用于生物学和医学的许多研究中。本文选用二甲基亚砜代替传统的醇性缓冲液，不但较好地解决了蛋白沉淀问题．而且溶解迅速，溶液澄清，并大大提高了该法的敏感性。用该改良法测ＬＡＫ细胞增殖活性，与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法结果一致。
- 李翠玲崔正言李淑贞
- 关键词：MTTLAK细胞
- 鼠伤寒沙门菌修饰酶YdiU的表达、纯化及晶体培养被引量：2
- 2019年
- 目的采用大肠埃希菌原核表达体系表达并纯化YdiU蛋白,筛选蛋白质晶体,为其结构和酶活测定等研究奠定基础。方法以生物信息学预测为基础,使用PCR方法从沙门菌基因组中调取ydiU基因,构建ydiU-pGl01重组质粒,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,诱导蛋白表达。并使用镍离子亲和层析柱和阴离子交换柱对YdiU蛋白进行纯化。纯化后YdiU蛋白利用16种晶体筛选试剂盒在悬滴条件下进行晶体培养。结果成功构建重组表达质粒ydiU-pGl01。IPTG诱导后,YdiU蛋白在大肠埃希菌BL21(DE3)菌株中大量表达,并多以可溶形式存在。经镍离子亲和层析和阴离子交换法纯化后得到纯度较高的蛋白溶液,浓度为3.6 mg/ml,相对分子质量约51×10^3。纯化的YdiU蛋白在0.5 mol/L Potassium thiocyanate条件下长出蛋白晶体。结论采用大肠埃希菌表达系统可表达可溶性YdiU蛋白,YdiU蛋白在阴离子交换柱上表现为峰型对称的单峰,纯度较高,可用于蛋白质晶体的筛选,为进一步解析YdiU的结构和功能研究奠定了基础。
- 马玥杨银龙岳盈盈宋楠楠王玮玮贾海红李翠玲李冰清
- 关键词：鼠伤寒沙门菌表达纯化
- UBTD1在白血病细胞定向分化为巨噬细胞中的作用研究
- 目的:诱导白血病细胞分化是治疗白血病的有效途径,而治疗靶点或信号通路的选择是诱导分化疗法的关键。有研究表明泛素包含结构域1(ubiquitin domain-containing 1,UBTD1)在肿瘤组织中表达较低,与...
- 郭强阴海鹏李翠玲张振李霞姜国胜
- 关键词：白血病巨噬细胞PADI4
- 文献传递
- 肺癌细胞自分泌VEGF对mCRPs的调控及其机制被引量：3
- 2010年
- 目的:研究人非小细胞肺癌A549细胞自分泌VEGF对膜结合补体调节蛋白(membrane-bounal complement regulatory proteins,mCRPs)的调控及其机制。方法:RT-PCR法检测CD46、CD55、CD59、VEGF及其受体(KDR和FLT-1)和IL-8及其受体(CXCR1 CXCR2)mRNA在人非小细胞肺癌A549细胞的表达。MTT法检测抗VEGF抗体和抗IL-8抗体对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测抗VEGF抗体和抗IL-8抗体对A549细胞mCRPs表达水平的影响,Western blotting检测抗VEGF抗体对转录因子KLF2和磷酸化NF-κB p65蛋白表达的影响。结果:A549细胞表达膜结合型CD46、CD55和CD59 mRNA,亦表达VEGF及其受体(KDR和FLT-1)和IL-8及其受体(CXCR1和CXCR2)mRNA。抗VEGF抗体明显抑制A549细胞的增殖(P<0.05)。终质量浓度0.1μg/ml抗VEGF抗体封闭72 h,CD55和CD59 mRNA表达下降,膜结合的CD55和CD59蛋白分子表达降低(均P<0.05);胞质和核KLF2蛋白相对定量值分别从0.63和0.88下降至0.42和0.66,胞质和胞核磷酸化NF-κB p65蛋白相对定量值分别从0.44和0.28下降至0.37和0.19。结论:A549细胞可能通过自分泌VEGF增加NF-κB p65和KLF2转录因子水平,从而上调CD55和CD59的表达。
- 赵勇张玲李翠玲阴海鹏顾洪涛温培娥
- 关键词：血管内皮细胞生长因子白细胞介素8NF-ΚB
- 海洋生物、中药提取成分对人肿瘤细胞增殖的影响
- 目的:本研究以人白血病细胞株HL-60;人肝癌细胞株BEL-7402、HepG2.2.15、HepG2人肺癌细胞株PG和15例难治性白血病患者骨髓细胞为研究模型,将多种海洋生物、中药提取成分作用于上述肿瘤细胞,采用细胞增...
- 张玲李翠玲顾洪涛阴海鹏温培娥
- 文献传递
- 快速诱导人胎脾LAK细胞的实验研究
- 1994年
- 本文研究了大剂量IL-2短期冲击人胎脾单个核细胞(FSMC)后，其杀伤活性、增殖活性、表面抗原表达的时间动力学变化。结果表明：快速诱导人胎脾LAK细胞时，IL-2的最适剂量是5000U IL-2／10×10^7cell／ml。在第2、3d，快速诱导的人胎脾LAK细胞的杀伤活性及增殖活性均显著高于常规LAK(P<0．05，P<0．05)。且两者表型基本相同。快速诱导后不洗去IL-2的LAK细胞的杀伤、增殖活性显著、极显著地高于常规LAK(P<0.05，P<0.01)，在后期，也不低于甚至高于常规LAK细胞。这些结果提示，快速诱导的人胎脾LAK细胞有可能用于临床，从而大大简化操作，减少污染机会；先用5000U IL-2/1.0×10^7cell/ml冲击1h，再按常规方法培养是一种独立且更优的方法。
- 李翠玲崔正言李淑贞张玲
- 关键词：IL-2增殖活性杀伤活性表型分析生物制品
- 全文增补中
- 抗人P185^(erbB2) scFv-Fc-IL-2调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞被引量：2
- 2006年
- 目的将抗人P185erbB2scFv-Fc-IL-2融合蛋白(HFI)作用于人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人外周血单个核细胞(PBMC),通过体外实验阐明HFI调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞的抗肿瘤机制,为HFI临床应用提供实验依据。方法MTT法检测细胞增殖、杀伤活性;流式细胞术观察细胞表面分子的表达水平;生物活性法检测细胞膜相关TNF杀伤活性;RT-PCR检测细胞穿孔素表达水平。结果HFI处理后,未观察到对SKOV3细胞增殖活性的直接抑制作用;SKOV3细胞表面杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达率分别由24.85%、0.53%增高到85.36%、59.19%(P<0.01);人PBMC的增殖活性增强,CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+CD56+NK细胞分别由24.37%、6.90%提高到38.80%、13.45%(P<0.01);CD25、LFA-1、FasL表达水平分别由3·99%、86.52%、5.02%提高到12.96%、99.06%16.19%(P<0.01);穿孔素基因、膜相关TNF均表达增强,LAK样、NK样杀伤活性在各效靶比时均明显增高(P<0.01)。结论HFI提高SKOV3细胞杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达水平,并且对人PBMC有明显的增殖活化作用,通过激活LFA-1/ICAM-1、Fas/FasL途径提高杀伤介质穿孔素和膜相关TNF的释放,增强LAK样、NK样杀伤活性。
- 王军张玲顾洪涛郭宁施明沈倍奋毛海婷李翠玲温培娥
- 关键词：ERBB2免疫细胞因子
