李良仁
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
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- 重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响被引量：7
- 2004年
- 目的探讨重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(rHpCAT)对大鼠结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响。方法在分离培养正常大鼠结肠粘膜上皮细胞的基础上,利用FeSO4+H2O2反应产生羟自由基攻击制备结肠粘膜细胞氧化损伤模型,同时预先加入rHpCAT并观察损伤减轻程度。实验设正常对照组、模型对照组、5-氨基水杨酸给药组(0.1 mmol/L)、重组幽门螺杆菌过氧化氢酶给药组(1×105、1×106、1×107 U/kg·b.w.)。培养一定时间后,取上清测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA) 和髓过氧化物酶(MPO)的活性进行测定,并同时测定上述各组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果模型组大鼠结肠粘膜上皮细胞MDA、LDH和MPO水平增高,CAT、GSH-Px和SOD含量减少。不同单位rHpCAT呈剂量依赖性的减少LDH释放,抑制MDA和MPO的形成,而使CAT、GSH-Px及SOD恢复到正常水平。结论重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对大鼠结肠粘膜氧化损伤具有保护作用。
- 武金宝王继德王群英吕永慧徐俊叶方鹏南清振李良仁任玥欣张亚历
- 关键词：结肠炎氧化性应激氧自由基
- 幽门螺杆菌OMP25基因的克隆、测序及生物信息学分析
- 2005年
- 目的克隆幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)外膜蛋白25(OMP25)基因,并对其进行测序及生物信息学分析。方法利用PCR技术扩增OMP25基因,并将其定向插入pET-22b(+)载体中,以DNA自动分析仪进行序列测定,并以生物信息学软件分析其生物学特性。结果成功克隆了幽门螺杆菌OMP25基因,经测序表明其序列与Gene Bank公布的一致。DNAstar软件预测其蛋白质的相对分子量(Mr)约为72.4 kD,并显示出良好的抗原性。结论本研究获得了序列正确的OMP25基因,为其重组表达及其相关研究奠定了良好基础。
- 李良仁王继德白杨王群英
- 关键词：生物信息学分析幽门螺杆菌测序PCR技术自动分析仪外膜蛋白
- 人大肠癌线粒体DNA重组质粒的构建及对NIH3T3细胞的转染
- 2005年
- 目的: 构建pcDNA3 1( +) mtDNA真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞.方法: 提取大肠癌细胞株(SW480,Lovo,HT29)mtDNA,扩增D loop区,产物用DNA自动测序法进行序列分析.利用DNA重组技术将其定向插人真核表达质粒pcDNA3 1( +),并用脂质体法导入NIH3T3细胞.结果:大肠癌细胞株SW480,Lovo,HT29细胞mtDNAD loop分别有10, 9, 8个突变位点.成功克隆1119kb的mtDNAD loop区至表达质粒pcDNA3 1( +),并导入NIH3T3细胞中.结论: 成功构建了pcDNA3 1( +) mtDNA真核表达重组体,并成功导入NIH3T3细胞中.
- 宋卫兵肖冰阎丽李良仁彭丹丹吴倩倩叶方鹏马莉
- 关键词：线粒体DNAD-环区质粒
- 幽门螺杆菌外膜蛋白25基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2005年
- 目的克隆幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)外膜蛋白25(OMP25)基因,并对其进行序列分析。方法利用PCR技术扩增OMP25基因,并将其定向插入pET-22b(+)载体中,以DNA自动序列分析仪进行核苷酸分析。结果DNA序列分析表明,所克隆的OMP25基因序列与GeneBank公布的一致。结论该研究获得了序列正确的幽门螺杆菌OMP25基因,为其重组表达及其相关研究奠定了良好基础。
- 李良仁王继德白杨王群英
- 关键词：螺杆菌
- 重组幽门螺杆菌外膜蛋白HOP25的免疫保护作用评价
- 目的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H．pylori)住人群中的高感染率及其对新老抗生素的耐药使研制该菌的疫苗十分迫切。本研究目的在于构建 Hp 的外膜蛋白25(Helicobacter pylorio...
- 李良仁张宇声陈烨白杨张亚厉张万岱周殿元王继德
- 文献传递
- 重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对SW480细胞应激反应的影响
- 2005年
- 王群英王继德钟世顺武金宝赖卓胜李良仁张亚历
- 关键词：细胞应激反应SW480细胞结肠癌细胞株细胞成分牛肝
- 幽门螺杆菌过氧化氢酶对SW480细胞中NF-κB和ERK通路的影响被引量：3
- 2007年
- 目的观察重组幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)过氧化氢酶(catalase,CAT)对SW480细胞内核转录因子(nuclear factor,NF)κB和细胞外信号调节激酶(extrocellular-signal regulated pro- tein kinase,ERK)通路的影响。方法用脂多糖(LPS)刺激SW480细胞,再用CAT预孵育和处理;采用免疫组织化学方法检测细胞内NF-κB的表达水平,应用Western blot方法检测细胞质内IκB的蛋白表达量,电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)观察NF-κB的激活;应用激光共聚焦显微镜和Western blot方法观察ERK的核内外易位及磷酸化。结果重组Hp CAT与商品化CAT的作用相同,预孵后,NF-κB的表达和激活较LPS组和处理组明显减少,ERK核内易位和磷酸化亦明显减少,但较正常对照组仍明显增加。结论Hp CAT能够抑制NF-κB和ERK通路。
- 王群英林焕建钟慧闽李良仁张振书张亚历程天明王继德
- 关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶SW480细胞NF-ΚB细胞外信号调节激酶
- 过氧化氢酶对SW480细胞应激反应的影响被引量：1
- 2005年
- 目的: 观察过氧化氢酶(catalase,CAT),对脂多糖(liposaccharide,LPS)诱导肠上皮SW480细胞凋亡,细胞内TNF α、IL 1β、IL 8的表达和NF κB激活的影响.方法: LPS刺激SW 480细胞后,应用流式细胞术观察细胞凋亡;采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术,检测细胞内TNF α、IL 1β、IL 8mRNA的表达水平;应用免疫电泳迁移率改变分析(elec trophoreticmobilityshiftassay,EMSA)法检测细胞内NF κB的激活.结果: CAT预孵后细胞凋亡(24 97±2 35)%较正常对照组(1 23±0 25 )%明显减少(P< 0 05 ). TNF α( 0 65±0 59)、IL 1β(0 32±0 06)、IL 8 (0 62±0 25)的表达较LPS组[ (1 33±0 94), (0 83±0 05), (1 03±0 20) ]和CAT治疗组[ (1 31±0 07 ), ( 0 82±0 04 ), ( 0 98±0 23 ) ]明显降低(P<0 05).NF κB的核结合活性也减弱,但较正常对照组仍明显增强.结论: CAT能抑制NF κB的核结合活性,降低SW480细胞对应激的反应,减少细胞凋亡.
- 王群英王继德钟世顺李良仁赖卓胜张振书张亚历
- 关键词：过氧化氢酶SW480细胞细胞因子类
- 过氧化氢酶对SW480细胞内细胞因子和NF-κB激活的影响
- 2004年
- 目的观察过氧化氢酶(catalase,CAT)对脂多糖(Liposaccharide,LPS)诱导肠癌细胞株SW4430细胞内TNF-α、IL-1β、IL-8的表达和NF-κB激活的影响。方法LPS刺激SW480细胞后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测细胞内TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的表达水平;应用免疫电泳迁移率变动分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)法检测细胞内NF-κB的激活。结果CAT 预孵后,TNF-α(正常对照组0.00±0.01,LPS组1.33±0.94,CAT预孵组0.65±0.59,CAT处理组1.31±0.07)、IL-1β(正常对照组0.00±0.05,LPS组0.83±0.05,CAT预孵组0.32±0.06,CAT处理组0.82±0.04)、IL-8(正常对照组0.00±0.01,LPS组1.03±0.20,CAT预孵组0.62±0.25,CAT处理组0.98±0.23)的表达较LPS组和CAT处理组明显降低(P<0.05)。NF-κB的核结合活性也减弱,但较正常对照组仍明显增强。结论CAT能降低SW480细胞对应激的反应,这一作用可能是通过抑制NF-κB的核结合活性,进而降低致炎细胞因子的表达完成的。
- 王群英王继德钟世顺李良仁赖卓胜张振书张亚历
- 关键词：SW480
- 过氧化氢酶对SW480细胞线粒体和凋亡的影响被引量：2
- 2004年
- 目的观察过氧化氢酶(CAT)对SW480细胞线粒体形态、细胞凋亡的影响及细胞内核转录因子(NF)κB表达的变化。方法用脂多糖(LPS)刺激SW-480细胞,再用过氧化氢酶预孵育和治疗;应用透射电镜观察各组细胞内线粒体形态和细胞凋亡的变化;采用免疫组织化学方法检测细胞内NF-κB的表达水平。结果经过过氧化氢酶预孵后,细胞凋亡明显减少,线粒体损伤减轻,同时NF-κB的表达较LPS组和治疗组明显降低(P<0.01),但较正常对照组仍明显增加。结论CAT对SW480细胞的致炎因子刺激后的应激反应有保护作用,能减少细胞的凋亡和线粒体的损伤,这一作用可能与NF-κB的激活有关。
- 王群英王继德钟世顺王亚东孙勇李良仁张亚历
- 关键词：过氧化氢酶脂多糖线粒体凋亡核转录因子-ΚB
