李谌
- 作品数：26 被引量：60H指数：5
- 供职机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家自然科学基金辽宁省高等学校优秀人才支持计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丹参粉针剂对四氯化碳致大鼠慢性肝纤维化的保护作用被引量：11
- 2006年
- 目的:探讨丹参粉针剂对四氯化碳(CCl_4)致大鼠慢性肝纤维化的保护作用。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(葡醛内酯注射液26．5 mg·kg^(-1))和丹参粉针剂低、中、高剂量组(100,250, 500 mg·kg^(-1)),除正常组外的其余各组动物先在饮水中加入350 mg·L^(-1)的苯巴比妥诱导2周,然后腹腔注射CCl_4 0．04 mL·kg^(-1)建立慢性肝纤维化模型,每周1次,共注射8周。于注射CCl_4第5周时,各组分别腹腔注射生理氯化钠溶液或相应剂量的药物,在给药2,4,6周后测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和前胶原肽(PIIIP)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)的含量。结果:丹参粉针剂低、中、高剂量组和阳性对照组大鼠血清中ALT,AST活性和PIIIP,LN,HA含量均比模型组明显降低(P＜0．01～P＜0．05)。结论:丹参粉针剂对CCl_4致大鼠慢性肝纤维化具有保护作用。
- 李谌蒲小平
- 关键词：丹参粉针剂四氯化碳肝纤维化
- 血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：6
- 2011年
- 背景:人血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2在激素性股骨头坏死骨缺损中均具有成血管成骨作用,目前国内在以人血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2基因联合治疗激素性股骨头坏死方面少有报道。目的:构建人血管内皮生长因子121与人骨形态发生蛋白2双基因腺病毒穿梭质粒。方法:将质粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1经KpnⅠ/XbaⅠ酶切后,将BMP2片段定向连入pShuttle-CMV-VEGF121-IRES,构建可同时表达2个目的基因重组质粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-BMP2,注入H5a细胞扩增,铺板,筛选阳性菌落,提取质粒,进行酶切分析及序列测定。将已构建确认正确的腺病毒质粒,经BJ5183-AD-1电转感受态细胞进行电穿孔后,铺板,筛选阳性菌落,提取质粒,进行酶切分析,PCR检测和序列分析。结果与结论:酶切分析及核酸序列测定证实重组质粒构建正确,提示实验成功构建了血管内皮生长121及骨形态蛋白2双基因共表达重组腺病毒载体。
- 钟声刘丹平刘素伟李晓禹李谌李媛
- 关键词：共表达腺病毒载体基因治疗基因重组
- Adv-HIF-1α^(mu)转染内皮祖细胞对CXCL12表达影响的研究
- 2014年
- 目的研究转染低氧诱导因子1α突变型(hypoxia inducible factor 1αmu,HIF1αmu)后的外源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中CXCL12的表达情况及对EPCs的影响。方法密度梯度离心结合差速贴壁法分离、培养EPCs并进行鉴定;以Adv-HIF-1αmu的最佳转染指数转染EPCs,获得含有目的基因处理的EPCs细胞,设为A组。B组为单纯转染Adv的EPCs。设未转染Adv-HIF-1αmu的EPCs为C组。Western Blot检测转染后的EPCs中HIF-1的表达,检测转染后的EPCs培养液上清液中的CXCL12浓度及其对外源性EPCs迁移的影响。结果密度梯度离心结合差速贴壁法获得的EPCs能够结合UEA-1和摄取ac-LDL,并具有成血管作用;转染Adv-HIF-1αmu的EPCs表达的HIF-1及CXCL12高于单纯转染Adv的EPCs及未转染Adv-HIF-1αmu的EPCs(P<0.05),且能诱导外源性EPCs的迁移。结论密度梯度离心结合差速贴壁法能够分离、培养符合特征的EPCs,转染Adv-HIF-1αmu的EPCs能够在常氧条件下高表达HIF-1及CXCL12,并诱导外源性EPCs的迁移。
- 赵辉刘丹平齐鑫张解元李谌
- 关键词：内皮祖细胞趋化因子CXCL12
- RNA干扰NUP88基因对人乳腺癌MCF-7细胞生长及侵袭力的影响被引量：5
- 2014年
- 目的:构建重组慢病毒介导的NUP88-shRNA载体,通过RNAi技术分别观察沉默NUP88后对MCF-7增殖,粘附,侵袭和转移情况的影响,为乳腺癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法:构建NUP88重组慢病毒表达载体,包装后检测滴度,以最佳复感染指数转染乳腺癌MCF-7细胞,利用RT-PCR和Western blot检测各组MCF-7细胞中mRNA和蛋白的表达效率;MTT法和流式细胞仪检测法,检测NUP88基因被干扰后对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测NUP88基因被干扰后对MCF-7侵袭力的影响。结果四组病毒及一组阴性对照均构建成功,滴度均为4E+8TU/ml;RT-PCR和Western blot检测,结果表明:经NUP88-shRNA转染的MCF-7细胞组NUP88 mRNA和蛋白质的表达与经阴性转染组和空白MCF-7细胞组相比,差异明显具有统计学意义(P<0.01);测定NUP88-shRNA1组沉默效率最高,沉默率可达到86%;MTT法结果表明:实验组经NUP88-shRNA1慢病毒转染后细胞增殖程度显著减少,与空白组和对照组相比有显著性差异(P<0.05)。流式细胞仪检测三组MCF-7细胞凋亡结果表明:实验组经慢病毒转染后细胞凋亡率显著增加,与对照组和空白组相比有显著性差异(P<0.05);细胞侵袭实验表明:在肿瘤细胞常规培养24h后,实验组与空白组和阴性对照组比较,穿膜细胞数量明显减少,具有显著性差异(P<0.05)结论:NUP88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制MCF-7中NUP88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。
- 李玉强朱志图王巍李谌徐娜王钰李男孙宏治
- 关键词：NUP88人乳腺癌细胞MCF-7RNAI慢病毒载体
- 人BMP2-IRES-HIF1αmu腺病毒表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2011年
- 目的构建人BMP2-IRES-HIF1αmu腺病毒表达载体,并转染HEK293细胞,为下一步转染骨髓基质细胞和体内实验打下基础。方法 PCR扩增HIF1αmu片段,用BstXⅠ和XbaⅠ双酶切回收目的片段。pIRES2-EGFP用BstXⅠ和XbaⅠ进行双酶切后回收大片段。将上述回收的目的基因与载体片段连接,然后转化感受态大肠杆菌DH5α扩增;PCR扩增BMP2片段,用NheⅠ和BamHⅠ双酶切后回收目的片段。把目的基因与载体片段连接,转化感受态大肠杆菌DH5α扩增重组腺病毒表达载体,通过酶切分析、PCR和测序进行鉴定。将构建好的质粒转染HEK293细胞,检测病毒液滴度。结果构建了人BMP2-IRES-HIF1αmu腺病毒表达载体,转染HEK293细胞见绿色荧光表达。结论成功构建了人BMP2-IRES-HIF1αmu腺病毒表达载体,酶切分析及DNA测序证实质粒构建正确,质粒成功转染HEK293细胞,并见绿色荧光蛋白表达。
- 李全营李谌郭威吴秀成王巍刘丹平
- 关键词：骨形态发生蛋白类重组腺病毒载体
- 低氧诱导因子1在骨缺损修复过程中的应用被引量：5
- 2008年
- 骨缺损修复是一个复杂的受多种细胞因子调控的结缔组织修复过程。充足的血液供应是维系骨折区,特别是骨缺损、骨不连局部再生的必要条件。低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导生理功能完整的新血管生成,为各种细胞的成骨分化和成骨活动提供营养支持和代谢保证,促进骨愈合。基因治疗与直接应用低氧诱导因子1同样具有促进骨折区域新血管生成的能力,运用低氧诱导因子1基因于骨组织工程领域以治疗骨缺损是目前的研究热点。应用低氧诱导因子1转基因疗法能够成功构建骨缺损区域的有效血管网络,加快骨生长,为骨缺损的治疗开辟了新途径。低氧诱导因子1基因修复骨缺损目前还处于实验阶段,用于临床还需进一步深入的研究。
- 李谌刘丹平
- 关键词：低氧诱导因子1骨缺损基因治疗
- 大鼠ZnT1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的利用GatewayTM技术构建含大鼠锌转运体1(ZnT1)基因重组腺病毒载体,鉴定外源基因在真核细胞中的良好表达。方法采用化学合成的方法,合成ZnT1/RES/EGFP目的基因片段,通过PCR方法在基因片段两端加入attB重组位点,与含有attP重组位点的pDonr221供体载体BP反应形成入门载体pDown-ZnT1。将含有attL重组位点的入门载体与含有attR位点目的载体Ad/CMV/V5-DEST通过LR反应形成腺病毒表达载体pAd-ZnT1。酶切和测序鉴定后,由PacⅠ酶切线性化转染HEK293A细胞包装,提取病毒颗粒。采用终点稀释法测定重组腺病毒滴度;Western blotting技术分析目的蛋白表达情况。结果目的基因按正确的方向重组入克隆载体中,重组腺病毒表达载体在HEK293A细胞中包装成功,获得成熟的腺病毒颗粒,病毒滴度为1.6×108 pfu/L,在HEK293A细胞中高表达。结论该实验采用GatewayTM技术构建了含有大鼠ZnT1基因的重组腺病毒载体,为下一步研究该基因在脊髓神经细胞中的表达以及与BDNF/TrkB信号调节通路的关系奠定了基础。
- 胡英明梅晰凡宋长威李谌
- 突变型低氧诱导因子1α加速骨缺损部位新血管生成的实验观察被引量：4
- 2015年
- 目的通过突变低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1,HIF1α)基因的3个氨基酸位点研究该基因在常氧条件下骨缺损区域对血管新生效应的影响。方法定点突变HIF1α编码区(coding sequence,CDS)402、564和803位3个氨基酸后将基因重组入腺病毒pAdEasy-1系统并测定滴度,同理包装未突变组和空病毒组;以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验(A组:含突变HIF1α基因病毒液,B组:含未突变HIF1α基因病毒液,C组:空病毒液,D组:空白组);将病毒液转染入兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内,通过示踪因子人源化绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)观察病毒转染效率,检测各组转染细胞中HIF1α基因mRNA和蛋白表达情况;制作兔桡骨缺损动物模型,将含目的基因的病毒液按上述分组转染MSCs后作为种子细胞移植到多孔纳米磷灰石-硅灰石生物活性玻璃陶瓷(apatite-wollastonite magnetic bioactive glass-ceramic,A-W MGC)载体中搭建人工组织工程骨架载体并植入体内,于术后8周处死各组动物,取植入区域组织做新血管生成检测。结果 CDS区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸;3种腺病毒重组体构建成功并鉴定完毕;A、B两组HIF1αmRNA表达量明显高于C、D两组,差异具有统计学意义(P<0.05),而A、B两组之间及C、D两组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组HIF1α蛋白表达量明显高于其他3组,差异具有统计学意义(P<0.05),而B、C、D 3组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);A组转染到动物体内后可见明显成血管效果,其他3组未见缺损区域有血管新生。结论 13点突变后HIF1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达;23点突变后HIF1α基因能够在体内局部形成有效的血管网络。
- 王皓李谌郜玉忠
- 关键词：重组腺病毒载体血管生成骨缺损
- 构建携带VEGF_(121)-FLAG和hrGFP-1基因腺病毒表达载体在骨髓基质干细胞中的表达(英文)被引量：1
- 2010年
- 背景:血管内皮生长因子具有促进血管生成的作用,在骨缺损的治疗研究中运用较多,但其异构体VEGF121的研究较少。目的:构建携带VEGF121-FLAG和hrGFP-1基因的腺病毒表达载体并观测其在骨髓基质干细胞中的表达。方法:以pTG19T-VEGF121为模板利用PCR技术突变VEGF121基因以去除VEGF121基因中终止密码子,之后在基因序列前后分别加入NotⅠ和XhoⅠ酶切位点,并将得到的基因亚克隆至pMD19-T质粒上,双酶切pMD19-T-VEGF121和pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1质粒,凝胶回收小片段和大片段,后进行连接反应,完成穿梭质粒的构建。重组病毒物理滴度测定后感染骨髓基质干细胞,在荧光显微镜下观察荧光强度。结果与结论:经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的骨髓基质干细胞有明显的绿色荧光表达。可见构建的携带VEGF121-FLAG和hrGFP-1基因的腺病毒表达载体可在真核细胞表达,有可能用于缺血性疾患的基因治疗。
- 刘丹平李谌胡亮王国贤
- 关键词：骨缺损腺病毒载体绿色荧光蛋白
- 组织因子途径抑制物2在胃间质瘤组织中的表达及临床意义
- 2013年
- 目的探讨组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)在胃间质瘤组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化、RT-PCR、Western blot检测TFPI-2在72例胃间质瘤患者的肿瘤中心处组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达。结果 TFPI-2在正常组织中的表达水平明显高于肿瘤旁组织,在瘤旁组织中表达水平明显高于瘤中心处组织(P<0.01)。胃间质瘤中心组织TFPI-2的表达水平随着NIH分级升高而下调(P<0.01),TFPI-2的低表达与肿瘤侵袭转移关系密切(P<0.05)。结论正常胃组织中TFPI-2的表达水平明显高于间质瘤组织,TFPI-2的表达下降可能与间质瘤的侵袭与转移有关。
- 邓蓓蓓王贵军王玉彬李迪诺李谌
- 关键词：胃肠道间质瘤组织因子途径抑制物2
