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李雯: 作品数：18 被引量：53H指数：5; 供职机构：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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注射用水及腺病毒中阶输注对豚鼠听力的影响被引量：4: 2008年; 目的观察注射用水和腺病毒中阶输注后对豚鼠听力的影响是否存在差别。方法将健康花色豚鼠16只分为A组7只和B组9只,通过耳蜗侧壁打孔中阶入路将注射用水(A组)和腺病毒(B组)分别注入内淋巴间隙。术后2周,通过基底膜铺片观察毛细胞损害情况,通过听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测其阈值变化情况。结果注射用水组ABR阈移为(35.00±12.91)dB SPL,而腺病毒组ABR阈移为(33.33±11.69)dB SPL,两者间差异无统计学意义(t=-0.21,P=0.837)。基底膜铺片鬼笔环肽染色显示注射用水和腺病毒对毛细胞损害的范围和程度没有明显差别,都表现为朝向灌注的方向毛细胞损失严重,而在灌注的反方向上损失轻微。结论向豚鼠耳蜗内淋巴间隙中输注的药物成分对其听力造成的影响在2周时没有差别,损害只与灌注的机械性损伤有关。; 韩朝迟放鲁黄一波李雯沈云珍高文元; 关键词：耳蜗注射用水腺病毒

不同基因转染方法对小鼠内耳毛细胞转染效率的比较被引量：3: 2015年; 目的对比不同的基因转染方法对小鼠内耳毛细胞的转染效率,以探寻简便、高效转染耳蜗毛细胞的方法。方法分离111只新生昆明小鼠(P2)耳蜗螺旋韧带及感染上皮,分别采用电穿孔法介导质粒载体(pGPHI/GFP/Neo)、腺病毒载体(Ad5/CMV/GFP)和慢病毒载体(LV/CMV/GFP)3种方法转染小鼠内耳毛细胞,于转染48小时后在荧光显微镜下观察并比较三种方法基因转染后小鼠内耳毛细胞绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的表达。结果电穿孔法介导质粒载体转染组和慢病毒载体转染组GFP阳性细胞极少;腺病毒载体转染组效率最高,耳蜗中回外毛细胞GFP阳性率为90.0%±4.1%,内毛细胞GFP阳性率为5%±0.4%。结论腺病毒载体能更有效地将外源基因导入耳蜗毛细胞内表达,是基因转染耳蜗毛细胞的理想载体。; 陈岩赖垂金李雯李华伟; 关键词：腺病毒载体慢病毒载体电穿孔法基因转染内耳毛细胞

鸡内耳毛细胞标志物的比较研究被引量：1: 2006年; 目的:为研究内耳毛细胞发育和再生提供有价值的标志物。方法:新生鸡内耳冷冻切片,间接免疫荧光细胞化学技术染色毛细胞抗原(HCA)、Espin和肌浆球蛋白7a基因,观察上述基因在毛细胞中的表达部位和强度。结果:HCA、Espin和肌浆球蛋白7a在听毛细胞和前庭毛细胞均表达;HCA染色毛细胞顶部和纤毛,Espin染色毛细胞纤毛和皮板,肌浆球蛋白7a为典型的细胞质染色。结论:HCA、Espin和肌浆球蛋白7a基因是研究毛细胞发育和再生的理想标志物,结合肌动蛋白-F染色毛细胞纤毛可以更好地定性和定量研究内耳毛细胞发育和再生。; 王宇澄王正敏沈云珍李雯李华伟; 关键词：内耳毛细胞生物学标记免疫细胞化学

离体培养嗅鞘细胞促进新生大鼠螺旋神经节细胞的存活被引量：1: 2010年; 本文旨在探索离体实验中的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)有无促进耳蜗听觉传入神经元——螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)存活作用及其可能机制。取成年大鼠嗅球和新生大鼠蜗轴组织块进行OECs与SGCs的培养,采用差速贴壁法纯化培养OECs。实验分OECs与SGCs共培养组和SGCs单独培养组。倒置相差显微镜下观察OECs和SGCs生长状态,神经营养因子受体p75免疫组织化学法鉴定OECs,神经元特异性标志物βIII-tubulin标记SGCs。为了研究OECs与SGCs共培养体系中,前者促进后者存活的可能机制,共培养组中分别加入脑源性神经生长因子(BDNF,500pg/mL)和BDNF抗体(IgY型,50μg/mL),对照组为未加任何处理的共培养组,然后检查各培养组中SGCs存活数量和存活时间。结果显示,OECs贴壁培养7d后形成一细胞单层,在OECs与SGCs共培养体系中,SGCs在OECs形成的细胞单层的表面生长,并伸出长突起,呈现典型的双极神经元形态;在培养的前6天内,随着培养时间的增加,两组中的SGCs都较接种前减少,但共培养组中SGCs存活数量明显高于SGCs单独培养组(P<0.01);单独培养组的SGCs数量在培养的第6天出现大幅度减少,在培养的第9天几乎没有生长;共培养组的SGCs数量未见明显变化(P>0.05);共培养中加入BDNF对OECs促进SGCs存活无明显影响,而加入BDNF抗体(IgY)后存活的SGCs减少(P<0.01)。本研究结果提示,OECs与SGCs共培养能够促进新生大鼠SGCs存活和突起生长,延长存活时间,OECs分泌BDNF可能是促进SGCs存活的机制之一。; 刘全余洪猛戴春富李雯朱雅颖顾瑜蓉李华伟; 关键词：嗅鞘细胞螺旋神经节细胞脑源性神经营养因子存活

Ad5-atoh1/EGFP在体诱导近成年豚鼠耳蜗产生毛细胞样细胞: 2012年; 目的:在近成年豚鼠耳蜗内携带atoh1/EGFP基因的腺病毒是否能够将基膜上残留的支持细胞转分化为新的毛细胞。方法:选用体重在200～250g的健康花豚鼠12只,将构建同时表达atoh1和EGFP基因的E1/E3区缺失的人类免疫5型腺病毒5μl,通过耳蜗侧壁打孔灌注导入中阶内淋巴系统。其中6只于灌注2周后处死,6只灌注4周后处死,基膜铺片观察EGFP、毛细胞标记物myosinⅦa和Dapi核染色情况。结果:灌注2周处死的6只豚鼠中有2只在基膜外毛细胞外区域发现有散在的细胞核大、细胞体梭形的、表达EGFP的新生细胞。灌注4周的动物中有3只在基膜原外毛细胞位置和外毛细胞外区域发现有相似的同时表达EGFP和Myo-sinⅦa的新生细胞。结论:atoh1基因可以在近成年豚鼠体内将部分支持细胞转分化为毛细胞样细胞。这部分支持细胞位于外毛细胞位置和外毛细胞外区域的基膜上。; 韩朝丛宁杨娟梅黄一波靳楷李雯; 关键词：毛细胞转分化

糖尿病大鼠耳蜗病变的形态学观察被引量：10: 2008年; 目的观察糖尿病大鼠耳蜗超微结构变化，了解病变的范围和程度。方法大鼠皮下注射链脲霉素诱发糖尿病，分别于造模后3个月及5个月进行耳蜗基底膜铺片、扫描电镜及透射电镜观察。结果造模3个月后外毛细胞纤毛排列紊乱、倒伏，有融合，外毛细胞和螺旋神经节细胞内细胞器肿胀，线粒体空泡化、嵴断裂，血管纹毛细血管基底膜增厚；5个月后病变进一步加重。内毛细胞在各个时期无明显病变。结论糖尿病可引起大鼠耳蜗外毛细胞、螺旋神经节细胞及神经纤维等的器质性病变，病变以线粒体的损伤最为明显。; 张永胜张玉海肖大江沈云珍李雯; 关键词：糖尿病耳蜗线粒体显微镜检查

钙结合蛋白在C57BL/6小鼠内耳细胞发育过程中的表达特点: 2013年; 目的探讨在小鼠内耳发育过程中,钙结合蛋白(CB)在内耳耳蜗内的表达是否存在时限性。方法获取C57BL/6小鼠E8开始至出生后一直到成年的内耳标本:E8,E9,E10,E12,E14,E15-E21,D1-D21,成年,进行冷冻切片,进行CB的荧光免疫组织化学染色并观察其在内耳表达的变化情况。结果在C57BL/6小鼠,除了在E16可辨认出螺旋神经元有CB部分表达外,以后直到成年都没有CB的染色表达,而在Scarpa神经元则从E8开始就有表达,其从E19开始先在内毛细胞开始有表达,逐渐在内外毛细胞都有表达,直到成年时表达消失。结论 CB在C57BL/6小鼠内耳耳蜗的表达具有时限性,因而可推测出对CB行免疫组织化学染色观察能有效鉴别C57BL/6小鼠及其他动物的再生毛细胞和原有毛细胞,但目前尚无法解释CB一些表达特点的相应机制。; 田亮马锐罗文伟韩朝李雯; 关键词：钙结合蛋白 C57BL 内耳胚胎发育

两种内淋巴给药方式对豚鼠耳蜗功能和形态的影响被引量：3: 2009年; 目的观察经耳蜗侧壁打孔（侧壁径路）和经圆窗膜、基底膜穿刺（双膜径路）两种内淋巴系统给药方式对豚鼠耳蜗整体形态结构和功能的影响并比较两种方式的优劣。方法40只正常健康杂色豚鼠分为A、B两组（每组20只），所有动物左侧为给药耳，右侧为非给药耳。A组采用侧壁径路进入中阶灌注携带增强型绿色荧光蛋白基因的5型重组腺病毒（adenovims5-enhanced green fluorescence protein，AdS—EGFP）5μl；B组采用双膜径路进入中阶灌注AdS-EGFP5μ1。给药前后行听眭脑干反应（ABR）测试，观察听功能改变。耳蜗冰冻切片直接荧光观察腺病毒分布，HE染色观察手术径路的愈合情况。基底膜铺片鬼笔环肽染色观察毛细胞受损情况，扫描电镜观察局部损害情况。结果所有动物术后均存活。穿刺部位修复良好，耳蜗的完整性得以保持。EGFP在Corti器和血管纹内壁细胞内标记明显，表明两种给药径路都可以将药物成功注入内淋巴系统。A组证实成功14只（70％），手术前后ABR反应阈（声压级）变化[（33．1±10．3）dB]与对侧非给药耳[（9．4±3．9）dB]比较差异具有统计学意义（F=46．34，P=0．0005）；B组证实成功8只（40％）手术前后阈值改变[（2．5±3．8）dB]与对侧耳[（2．5±3．8）dB]比较差异无统计学意义（F=0．00，P=1．000）。两种方法在部分动物中都有药物渗漏入外淋巴的现象，给药局部产生炎性反应，侧壁径路对毛细胞的损害范围大于双膜径路。结论两种手术径路都可将药物成功注入豚鼠耳蜗的内淋巴系统中，局部有炎性反应，术后耳蜗的完整性可以获得完全恢复。侧壁径路对豚鼠耳蜗毛细胞缺失和ABR反应阈的影响大于双膜径路，但是经侧壁径路进入中阶的手术成功率高于双膜径路，选择何种灌注径路需要根据实验要求来定。; 韩朝迟放鲁黄一波李雯沈云珍高文元; 关键词：耳蜗内淋巴投药途径诱发电位脑干

一种丝素软骨复合体义耳及其制备方法: 本发明属组织工程和医用材料领域，具体涉及一种丝素软骨复合体义耳及其制备方法和在耳廓再造中应用。本发明采用丝素软骨复合体作为支撑材料，以丝素蛋白为涂层，制成丝素软骨复合体义耳。本发明的丝素软骨复合体义耳可进一步用于在小耳畸...; 倪玉苏江毅文建川陈新邵正中于慧前孙珊李雯李华伟; 文献传递

新生大鼠耳蜗增殖细胞的培养鉴定及超微结构观察被引量：9: 2007年; 目的研究新生大鼠耳蜗内是否存在增殖细胞,以及该增殖细胞能分化为何种细胞。方法分离新生 SD 大鼠耳蜗细胞并进行培养,加入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-demoxyuridine,BrdU)检测细胞的增殖状态,通过免疫荧光鉴定细胞球及分化细胞的性质。分离48个耳蜗 Corti 器,采用数字表格法随机分成4组进行细胞培养:对照组、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)组、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)组和 EGF+bFGF 组,每组12个,定量计数单个耳蜗培养细胞球的数量,结果进行方差分析。采用透射和扫描电镜观察细胞球的超微结构。结果耳蜗 Corti 器细胞培养可见细胞球形成,90.1%球内细胞 BrdU 表达阳性,且大部分细胞巢蛋白表达阳性。分化细胞表达毛细胞标志物肌球蛋白7A、espin 及鬼笔环肽阳性,神经元标志物神经丝蛋白(neurofilament M,NF-M)表达阳性,并且可见肌球蛋白7A 和 BrdU,espin 和 BrdU,以及 NF-M和 BedU 双标阳性的分化细胞。对照绀平均(±s,以下同)每个耳蜗 Corti 器的增殖细胞数量为(45.3±23.0)个,EGF 组(86.2±34.1)个,bFGF 组(96.5±33.6)个,EGF+bFGF 组(131.2±47.0)个。除EGF 组和 bFGF 组之间 P>0.05外,其余各组之间 P 值均<0.05,差异具有统计学意义。扫描和透射电镜下细胞球内细胞呈网球形,大小均匀一致,表面具有众多微绒毛。胞质内有丰富的内质网、微管、微丝和线粒体等细胞骨架结构和细胞器,相邻细胞之间可见紧密连接、桥粒与缝隙连接。结论大鼠耳蜗内存在增殖细胞,可分化为具有纤毛样结构的毛细胞及神经元。EGF 和 bFGF 均可诱导增殖细胞分裂增殖。该增殖细胞的超微结构显示其具有早期幼稚细胞发育的特征。; 江红群王正敏沈云珍李雯; 关键词：毛细胞耳蜗成纤维细胞生长因子表皮生长因子

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