杨伦
- 作品数：13 被引量：23H指数：3
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山东省农业良种工程项目国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- RNA干扰沉默PID1基因在C2C12细胞中表达的研究被引量：3
- 2013年
- 构建和筛选对PID1(phosphotyrosine interaction domain containing 1,PID1)基因有RNA干扰作用的PID1-shRNA表达载体。据小鼠PID1 cDNA序列,优化设计了4条shRNA及1条阴性干扰序列,插入pGPU6/GFP/Neo载体中,得到pGPU6/GFP/Neo-PID1-1、pGPU6/GFP/Neo-PID1-2、pGPU6/GFP/Neo-PID1-3、pGPU6/GFP/Neo-PID1-4和pGPU6/GFP/Neo-PID1-NC。干扰载体转染C2C12细胞,以RT-PCR和Western blot技术检测shRNA对C2C12细胞中PID1 mRNA和蛋白表达的下调作用。结果表明:靶向PID1基因的4个shRNA重组质粒载体经测序分析,其shRNA编码序列与预期设计的完全一致,经酶切鉴定和测序分析证实,靶向PID1基因的shRNA重组质粒载体构建成功。进一步将构建的4个表达载体分别转染C2C12细胞,24 h后细胞中PID1基因mRNA表达水平依次下调(23.58±1.87)%、(75.44±0.77)%、(70.52±0.41)%和(56.60±3.13)%。48 h后细胞中PID1蛋白表达水平依次降低(30.15±5.05)%、(71.86±4.85)%、(67.93±2.28)%和(56.81±2.01)%。所筛选出的pGPU6/GFP/Neo-PID1-2、pGPU6/GFP/Neo-PID1-3和pGPU6/GFP/Neo-PID1-4三个表达载体均能高效地抑制转染细胞PID1 mRNA和蛋白的表达,为进一步研究PID1基因的功能奠定了基础。
- 杨伦徐正刚王慧陈其美陈伟胡艳霞石元祝洪磊曾勇庆
- 关键词：小鼠RNA干扰
- RNA干扰沉默PID1转基因肉兔模型的构建
- 徐正刚杨伦曾勇庆陈伟张哲杨云王守栋房国锋楚青惠
- 关键词：新西兰肉兔RNA干扰肌内脂肪
- 促甲状腺素释放激素对母猪泌乳等繁殖性能及仔猪生长性能影响的研究被引量：3
- 2009年
- 为了研究促甲状腺素释放激素(TRH)对母猪泌乳等繁殖性能及仔猪生长性能的影响,选用经产大白分娩母猪40头,随机分为试验组和对照组各20头,试验组分娩哺乳母猪产后1d、5d,每头各注射2mLTRH注射液。研究结果表明:①产后注射TRH的试验组分娩哺乳母猪比对照组母猪的泌乳力平均提高了3.01%(P<0.05),试验组哺乳仔猪的断乳个体重和断乳窝重分别比对照组提高了2.42%和3.01%(P<0.05)。②试验组母猪在哺乳期的采食量比对照组母猪提高了2.30%(P<0.05),产后注射TRH对母猪断乳体况以及母猪断乳后再繁殖性能等具有一定的改善作用,断乳后10d、20d内母猪的发情率均提高5个百分点。③试验组仔猪在哺乳期间的平均窝增重和日增重比对照组分别提高5.95%和6.49%(P<0.05),而两组的仔猪采食量无显著差异(P>0.05),说明增重速度的提高是由母猪泌乳性能的改善所致。④产后注射TRH使分娩哺乳母猪三联症的发病率降低5个百分点,并对降低仔猪腹泻(腹泻指数降低7.06%,P<0.05)、改善其健康状况具有明显的效果。
- 杨伦杨献鹏曾勇庆张伟韩苏任相全孟宪健张琦
- 关键词：促甲状腺素释放激素泌乳力繁殖性能
- 莱芜猪GPx4基因在不同组织中的表达规律研究被引量：3
- 2011年
- 为研究GPx4基因mRNA在莱芜猪不同组织中的差异表达规律,探讨该基因与地方猪种抗氧化性能的关系。本研究以5头莱芜猪为实验材料,提取10种组织的总RNA,应用实时荧光定量PCR技术,检测GPx4基因在莱芜猪不同组织的mRNA相对表达量。实时荧光定量PCR研究结果显示:GPx4基因在莱芜猪各组织中均有表达,组织之间的相对表达量存在显著差异(P<0.05);GPx4基因在莱芜猪脑、心、肝、脾等组织高丰度表达,并且极显著地高于其他组织中的表达量(P<0.01)。GPx4基因在不同组织中的表达水平由高到低依次为:肌肉>脊髓、大肠、背膘、小肠>肺,差异显著(P<0.05)。
- 陈伟杜金芳崔景香陈其美胡艳霞杨伦曾勇庆
- 关键词：莱芜猪荧光定量PCR组织表达谱
- RNA干扰沉默PID1基因肉兔模型的构建被引量：4
- 2014年
- 为进一步研究PID1基因的功能,本试验在前期构建并筛选得到的高效PID1RNA干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo-PID1-2的基础上,利用精子介导法制备RNA干扰PID1转基因肉兔模型。对繁殖的F1代肉兔个体进行活体荧光检测、PCR、RT-PCR和Western blot检测,并对不同组别(阳性组、阴性组和空白对照组)体重达3.0kg左右的F1代肉兔抽样屠宰进行肌内脂肪的测定。研究结果表明:外源基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)在转基因兔后代中可成功表达,试验组得到F1代个体106只,其中阳性兔7只,转基因阳性率为6.60%。PID1基因RNAi阳性兔与阴性兔、空白对照兔相比,RT-PCR检测PID1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05),Western blot测得PID1蛋白表达水平呈下降趋势,肌内脂肪的含量显著降低(P<0.05);综上表明,PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关。本研究从RNAi肉兔模型构建的角度进一步验证了PID1基因对肌内脂肪沉积影响的功能,也为下一步研究制备高肌内脂肪优质PID1转基因猪奠定了基础。
- 徐正刚杨伦曾勇庆张哲陈伟杨云房国锋王守栋
- 关键词：新西兰肉兔RNA干扰肌内脂肪
- 应用抑制性消减杂交技术筛选影响猪肌内脂肪沉积相关基因的研究
- 肌内脂肪(IMF)是影响猪肉品质的一个重要指标，已有的研究表明IMF含量与肉的风味、嫩度等优良肉质性状呈正相关。近年来，人们在猪IMF沉积方面进行了大量研究，但影响IMF沉积的主效基因至今尚未确定。因此，本研究以IMF含...
- 陈其美杨伦崔景香杜金芳陈伟胡艳霞祝洪磊石元曾勇庆
- 关键词：肌内脂肪抑制性消减杂交差异表达基因
- 猪GPx4基因mRNA的表达对肌肉抗氧化性能及肉质特性的影响
- 猪肉的感官性状、主要的物理和生化参数都与肉质特性紧密相关。猪肉中含有丰富且活跃的酶类，很容易在屠宰后，因为动物机体的氧化还原体系失衡、快速的糖酵解、微生物繁殖生长等因素导致蛋白质变性、脂肪酸败。猪肉对脂质氧化非常敏感。但...
- 陈伟杜金芳崔景香陈其美杨伦胡艳霞曾勇庆
- 关键词：抗氧化性肉质特性
- 猪CuZnSOD基因的克隆、表达及功能分析
- 为了进一步了解和认识CuZnSOD基因的结构和功能,揭示CuZnSOD对猪抗氧化机能的影响,寻找与肉质性状相关联的分子标记,文章采用RACE(rapidamplification ofcDNA end)方法,对莱芜猪Cu...
- 杜金芳曾勇庆陈伟崔景香陈其美杨伦胡艳霞
- 关键词：莱芜猪克隆表达亲缘关系抗氧化功能
- 猪CuZnSOD基因的克隆、表达及功能分析
- 为了进一步了解和认识CuZnSOD基因的结构和功能,揭示CuZnSOD对猪抗氧化机能的影响,寻找与肉质性状相关联的分子标记,文章采用RACE(rapid amplification of cDNA end)方法,对莱芜猪...
- 杜金芳曾勇庆陈伟崔景香陈其美杨伦胡艳霞
- 关键词：CUZNSOD基因克隆
- 猪CuZnSOD基因的克隆、表达及功能分析被引量：7
- 2010年
- 为了进一步了解和认识CuZnSOD基因的结构和功能,揭示CuZnSOD对猪抗氧化机能的影响,寻找与肉质性状相关联的分子标记,文章采用RACE(Rapid amplification of cDNA end)方法,对莱芜猪CuZnSOD基因cDNA进行克隆测序,分析其结构和功能,并用Real-time PCR检测CuZnSOD基因的表达。结果表明,CuZnSOD基因cDNA序列全长658bp(GenBank登录号:GU944822),包含76bp的5′UTR和120bp的3′UTR序列。全部CDS序列462bp,编码153个氨基酸,分子量为15.9kDa,等电点为6.03。CuZnSOD基因编码的氨基酸序列中,第3氨基酸残基处存在1个O-糖基化位点,第86氨基酸残基处存在1个N-糖基化位点。二级结构中α螺旋仅占1.31%。在进化过程中高度保守,与人、牛、小鼠和褐鼠的编码区同源性分别为87.74%、87.66%、83.44%和83.23%;氨基酸序列同源性分别为90.26%、94.12%、92.21%和91.50%。CuZnSOD存在典型的金属结合配体结构域(GFHVHQFGDNT)。基于蛋白序列所构建的分子进化树表明猪与牛的亲缘关系最近。在mRNA水平上,CuZnSOD是一个广谱表达基因,在大脑、心脏、脾脏、肝脏、肾脏、肺、大肠、小肠、脊髓、肌肉、背膘和胃中都能检测到,其在肾脏、小肠和肺中表达量较高,在心脏和肌肉组织中表达量较低。
- 杜金芳曾勇庆陈伟崔景香陈其美杨伦胡艳霞
- 关键词：CUZNSOD基因克隆
