杨志刚
- 作品数：10 被引量：28H指数：3
- 供职机构：江西省人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人骨髓间质干细胞的分离培养和诱导分化为神经元样细胞的研究被引量：9
- 2007年
- 目的:探索成人骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离培养及诱导分化为神经元样细胞的体外条件。方法:采用Ficoll淋巴细胞分离液(1.077g·mL-1)密度梯度离心法从人的骨髓中分离出MSCs进行体外扩增。收集第2代细胞流式细胞仪检测MSCs表面标志。逐渐加入表皮生长因子(EGF)、β-巯基乙醇(BME)和全反式维甲酸(ATRA)诱导MSCs向神经元细胞分化,通过免疫细胞化学法鉴定诱导后细胞神经元烯醇化酶(NSE)、神经巢蛋白(nsetin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果:流式细胞仪检测结果显示培养后的MSCs强表达CD29;较强表达CD44、CD166和CD105;不表达CD45、CD34和HLA-DR。诱导剂诱导后,MSCs分化为具有典型的神经元形态的细胞,免疫细胞化学显示78%的细胞NSE表达阳性;大约51%细胞nsetin表达阳性;所有细胞GFAP均阴性表达。结论:成人MSCs在体外可定向诱导分化为神经元样细胞,且具有较高的阳性分化率。
- 吴晓牧杨志刚丁伟荣杨海军柳喆张昆南
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化
- 人骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性的研究被引量：12
- 2005年
- 目的研究人骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和培养条件,并探讨其生物学特性.方法取无恶性血液病的32～65岁的成人骨髓7例,经密度梯度离心得到单个核细胞,加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液,将细胞的密度调整到1×106个/mL,接种到12孔培养板中(1 mL/孔)进行培养,48 h 后更换新鲜培养液,以后每3 d 换液1 次.当细胞铺满培养板底90%以上时,按常规方法进行细胞传代培养.用流式细胞术检测培养细胞的CD29、CD44、CD166、CD105、CD34、CD45、HLA-DR表达情况.并且使用脂肪细胞诱导培养液诱导培养MSCs,油红O染色检测其能否被诱导分化为脂肪细胞.结果成人骨髓接种后24 h内细胞开始聚集成细胞集落,并从集落中长出少许长梭形细胞,6～15 d细胞进入快速增殖期,一般培养20～25 d后细胞汇合成片铺满培养板底;而传代培养的细胞每代约需10～15 d即可铺满瓶底.流式细胞术检测结果显示,此次培养的骨髓来源细胞高表达CD29、CD44、CD166、CD105,不表达CD34、CD45、HLA-DR,符合骨髓MSCs细胞的特性.油红O染色显示MSCs可以被诱导分化为脂肪细胞.结论用密度为1.077 g/mL淋巴细胞分离液作为分离液,密度梯度离心法分离培养的人骨髓MSCs增殖力强,操作简单,是一种较好的分离和培养MSCs的方法.MSCs可以被诱导分化为脂肪细胞.
- 易敬林杨海军丁伟荣柳喆吴晓牧杨志刚陈波何丹
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养
- 音速波状蛋白促进骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元分化被引量：3
- 2007年
- 目的探讨音速波状蛋白(Shh)促进人骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向分化为多巴胺能神经元样细胞的作用。方法体外分离、扩增和鉴定人骨髓MSCs。采用不同诱导方案诱导MSCs向神经元和多巴胺能神经元样细胞定向转化后,进行抗神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)等免疫细胞化学染色,并计算阳性细胞百分率。结果实验组诱导后MSCs能分化为具有典型神经元形态的细胞,可见NSE、Nestin、GFAP、TH和DAT等神经细胞标志表达;对照组MSCs细胞形态无明显变化,上述特异性标志物表达均为阴性。实验2组(诱导方案含Shh)与1组(诱导方案不含Shh)的NSE、Nestin、GFAP阳性细胞百分率的差异无统计学意义,但实验2组TH和DAT阳性细胞百分率明显高于实验1组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Shh可促进MSCs分化为多巴胺能神经元样细胞。
- 丁伟荣吴晓牧陈元仲柳喆杨志刚易敬林
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化
- 人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化研究
- 吴晓牧王卫真谢旭芳熊英琼陈元仲丁伟荣何丹易敬林杨志刚柳吉吉胡国柱
- (1)任务来源 “人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化研究”是江西省科技厅科研项目，申请时间为2006年1月。批准时间为2007年11月，批准经费1.2万元。研究正式开始于2006年1月。全部实验工作于2008年2月完...
- 关键词：
- 关键词：间充质干细胞神经元分化
- 慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病脑脊液中T细胞内细胞因子的分析
- 2005年
- 目的探讨慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)患者的脑脊液(CSF)中CD4+T细胞内部分细胞因子的变化特点。方法对10位CIDP患者和12位非炎症性神经疾病(OND)患者用流式细胞仪测定其CSF中和周围血(PB)中CD4+T细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4。结果与OND相比较,在CIDP的CSF中CD4+IFN-γ+IL4﹣T细胞的百分比显著地提高,CD4+T细胞的细胞内IFN-γ/IL4比例也明显增加。同时CSF中T细胞内细胞因子的比率较PB中要高。结论CIDP是以I型辅助性T细胞的反应占优势,同时也说明利用流式细胞仪测定CIDP的CSF中CD4+T细胞的IFN-γ、IL-4标记是有意义的。
- 张昆南吴晓牧杨志刚
- 关键词：CIDPCSF细胞内细胞因子
- 间充质干细胞在神经系统中的应用
- 2005年
- 杨志刚吴晓牧
- 关键词：间充质干细胞骨髓神经系统
- 人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法的比较研究被引量：4
- 2007年
- 目的比较Ficoll密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)与全骨髓培养法之间的差异,以期建立一种简便、实用的基于临床移植需要的MSCs分离方法。方法分别应用上述两种方法分离MSCs,比较用两种方法的细胞形态、MSCs细胞得率及以及细胞表面标志的差异。结果两种方法均能有效培养出骨髓MSCs,且获得的第二代MSCs细胞形态无明显差异,细胞形态均一,为长梭形或三角形。5ml骨髓细胞分离培养后,Ficoll密度梯度离心法获得的MSCs细胞总数显著小于全骨髓培养法(t=2.639,P<0.01)。Ficoll密度梯度离心法与全骨髓培养法获得的第二代MSCsCD29、CD105、CD105、CD34阳性表达率的差异无统计学意义(t分别为0.809、0.659、0.277、0.191,P均>0.05),但前者的HLA-DR阳性表达率明显低于后者,差异具有统计学意义(t=2.347,P<0.05)。结论与Ficoll密度梯度离心法相比较,全骨髓培养法分离MSCs具有培养时间较短,细胞得率较多的优点,虽纯度相对较低,但仍是一种较好的MSCs分离方法。
- 丁伟荣吴晓牧饶燕飞杨志刚柳喆张水生
- 关键词：间充质干细胞骨髓细胞培养
- 人骨髓间充质干细胞的分离培养和诱导分化为神经元样细胞的研究
- 目的:探索成人骨髓间充质干细胞的分离培养及诱导分化为神经元样细胞的体外条件。由于MSCs容易获得, 并有多向分化特性,利用自体的骨髓MSCs在体外扩增后重新植入机体,能修复组织损伤及分泌机体所需物质治疗脑血管疾病、脊髓损...
- 吴晓牧杨志刚丁伟荣柳喆张昆南
- 文献传递
- 间充质干细胞在神经系统中的应用
- ＜正＞间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是指一群具有向成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞、骨髓基质、肝脏细胞和神经细胞等多种分化潜能的多能干细胞。 MSCs不仅能够向多种组织和细胞类型分...
- 吴晓牧杨志刚
- 文献传递
- 人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化研究
- 吴晓牧张昆南漆萍丁伟荣杨海军黄刚龚凌云杨志刚陈元仲
- “人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化研究”是江西省卫生厅科教处科研项目，课题批准编号200308。申请时间为2003年12月。批准时间为2004年4月，批准经费3.0万元。研究正式开始于2004年6月，全部实验工作于200...
- 关键词：
- 关键词：间充质干细胞神经细胞分化
