林万松
- 作品数：35 被引量：53H指数：4
- 供职机构：福建医科大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金福建省重大科技项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- AFP基因修饰DC细胞分泌exosome的抗肿瘤作用
- 背景:细胞免疫疗法在肝癌的治疗中起着越来越重要作用,其中,树突状细胞(Dendritic cell,DC)疫苗的研究与应用已取得很大的进展,然而在实际应用中DC疫苗的治疗仍存在很多不足,主要是抗原有效递呈和激活T细胞的能...
- 黄胜兰林万松黄传钟陈淑萍李洁羽叶韵斌
- 关键词：树突状细胞EXOSOMEAFP
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒X蛋白通过DNMT3A诱导肝癌细胞RUNX3基因高甲基化
- 目的研究肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)表达的影响及相关作用机制,探讨乙肝病毒促肝癌发生的表观遗传调控。方法构建HBx重组表达载体转染5-aza-CdR处理或未处理的H...
- 林万松周智锋李洁羽叶韵斌
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白RUNT相关转录因子3甲基化
- MICA第5外显子微卫星多态性与食管癌相关性研究被引量：2
- 2017年
- 目的:研究MICA第5外显子微卫星多态性与食管癌相关性。方法:采用PCR-STR微卫星基因分型技术检测103例食管癌患者和84例正常对照MICA基因5外显子多态性。构建食管癌标本中高频率出现的MICA等位基因的真核表达载体,转染293T细胞株,LDH法检测NK细胞对不同MICA等位基因转染的293T细胞的杀伤作用,效靶比20∶1。ELISA法检测转染的293T细胞上清中s MICA含量。结果:食管癌患者第5外显子检测到5种等位基因,频率分别为:MICA-A4(9.71%),MICA-A5(22.3%),MICA-A5.1(40.8%),MICA-A6(15.5%),MICA-A9(11.7%),其中MICA-A5.1与对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。MICA等位基因转染293T细胞株后,相对于其他第5外显子A5.1组对NK杀伤的敏感性较低[(30.4±6.3)%,P<0.05],上清可溶性MICA分泌增加(135.7±6.2)pg/ml。结论:食管癌与MICA第5外显子多态性A5.1显著性相关,其危险性高于其他等位基因。
- 郑庆丰周智锋柳硕岩林万松陈赛云叶韵斌
- 关键词：MICA基因微卫星多态性食管癌NK细胞
- 小分子乙型肝炎病毒基因组缺失突变体结构分析被引量：1
- 2008年
- 目的 了解小分子HBV基因组缺失突变体的基因结构及特点。方法 采用一步法PCR从慢性乙型肝炎患者血清中扩增全基因组HBVDNA，回收并克隆〈1kb的小分子HBVDNA，测序并以BioEdit及VectorNTI6．0软件分析基因结构特点。结果获得基因长度介于174～986bp之间的64种、共124个小分子HBV缺失突变体DNA，按基因结构特点分为3类，即3种GT-AG剪接变异体、29种“常规”缺失突变体及32种基因组内部含polyA的缺失突变体。所有小分子基因组缺失突变体在HBV各编码区及基因调控区均存在不同程度缺失，其中66％（42／64种）保留与HBV复制（包装）相关的所有顺式调控序列，48％（31／64种）保留X编码区。结论 乙型肝炎患者血清中普遍存在小分子HBV基因组缺失突变体，深入了解这些变异体的结构和功能，有助于进一步探索HBV的致病机制。
- 郭丹华王林黄清玲林万松陈婉南林旭
- 关键词：肝炎病毒乙型基因缺失聚合酶链反应
- 乙型肝炎病毒X蛋白与翻译延长因子lal（eEFlal）的相互作用及对其功能的影响
- 持续的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染可引起急慢性乙型肝炎,肝硬化,并与原发性肝细胞癌(HCC)的发生发展关系密切。全球有超过3亿的慢性感染人口,HBV致病的确切分子病理机制仍不清楚。 H...
- 林万松
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒X蛋白F-肌动蛋白
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对病毒自身调控序列的影响被引量：2
- 2008年
- 目的研究双剪接型2，2kb乙型肝炎病毒（HBV）剪接变异体特异性蛋白TPds对病毒自身调控序列的影响。方法PCR扩增6种HBV启动子／增强子序列，以Kpn I及Xho I位点克隆于pGL3-basic，分别构建萤火虫荧光素酶重组报告载体pGL3-BCP（含HBV基本核心启动子）、pGL3-CP1601（含增强子Ⅱ的核心启动子）、pGL3-XP（X基因最小启动子）、pGL3-XP1071（含增强子I的X基因启动子）、pGL3-SP1（表面抗原大蛋白基因启动子）、pGL3-SP2（表面抗原中蛋白基因启动子）。以FuGENE6将TPds表达载体pcDNA3.1／HisC-TPds或空白载体pcDNA3.1／HisC分别与6种HBV启动子／增强子报告载体共转染Huh7细胞，转染后48h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性，实验重复5次，数据以SPSS11.5软件分析。结果在一定的质量比值范围内，与pcDNA3.1／HisC空白载体对照相比，pcDNA3.1／HisC-TPds分别与pGL3，CP1601、pGL3-XP1071、pGL3-SP1、pGL3-SP2共转染后，Huh7细胞内萤火虫荧光素酶活性增高，而pcDNA3.1／HisC-TPds分别与pGL3-BCP或pGL3-XP共转染后，胞内荧光素酶活性无变化。结论TPds蛋白可反式激活HBV启动子SP1、SP2和增强子I、Ⅱ，对基本核心启动子和X基因最小启动子无影响。
- 陈婉南陈金烟王林林万松林建银林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒RNA剪接反式激活增强子
- B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇细胞中的表达与纯化
- 2009年
- 目的获得高纯度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(HBx蛋白)。方法PCR扩增获得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因,以AgeⅠ及BglⅡ位点将其克隆入果蝇表达载体pMT/BiP/V5/HisC。重组载体与筛选质粒pCoBlast以脂质体Cellfectine共转染果蝇S2细胞,25μg/ml Blasticidin筛选多克隆抗性细胞株。扩增细胞以CuSO4诱导HBx蛋白表达,Western blot鉴定表达产物并确定最佳蛋白表达时间和诱导浓度。200 ml大规模培养细胞并诱导表达,一步法及两步法分别纯化B、C基因型HBx蛋白。结果成功构建重组表达载体pMT/BiP-HBxb(含B基因型HBx基因)和pMT/BiP-HBxc(含C基因型HBx基因)。在果蝇S2细胞中,B、C基因型HBx蛋白与6×His融合表达(分别为HBxb-His及HBxc-His),在CuSO4诱导后72 h以及诱导浓度为500μmol/L^1 mmol/L时蛋白表达量最高。在200 ml培养液中,一步法纯化所得HBxb-His及HBxc-His蛋白总量分别为1.52和1.37 mg,纯度为85.23%和84.59%;二步法所得的HBxb-His及HBxc-His蛋白总量分别为5.38和6.42 mg,纯度分别为95.36%和94.62%。结论在果蝇表达系统中表达并获得高纯度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白,为进一步探讨结构和功能的关系奠定了基础。
- 郑瑾林万松林建银林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型纯化果蝇
- 探讨地西他滨短时刺激对RAK细胞免疫表型及抗癌活性的影响
- 2022年
- 目的:探讨地西他滨(DAC)对重组人纤维连接蛋白活化杀伤细胞(RAK)增殖、免疫表型及抗肝癌效应的影响。方法:采用RetroNectin、CD3单抗及rhIL-2诱导外周血单个核细胞以培养RAK细胞,培养第1天加入不同浓度的DAC(0、50、500、1 000、2 000、3 000 nmol/L)刺激24 h后,全量换液。培养第4、7、10、12天,采用血球计数仪进行细胞计数,CFSE检测细胞增殖水平;流式细胞术检测不同培养时间各浓度DAC刺激的RAK细胞的免疫表型;Annexin-Ⅴ/PI检测细胞凋亡水平;以CD107a、IFN-γ、穿孔素、颗粒酶-B表达水平评估各组RAK细胞的抗肝癌效应。结果:随着培养时间延长,DAC浓度越高,细胞增殖抑制越明显(P<0.05)。与对照组相比,DAC短时刺激的RAK细胞在培养10 d后,高浓度DAC组(≥1 000 nmol/L)RAK细胞CD4比例显著增加,CD8比例及CD4+和CD8+的中央记忆细胞(TCM)比例呈下降趋势(P<0.05)。培养第12天NKT水平显著升高(P<0.05),随着DAC浓度增高细胞凋亡水平显著升高(P<0.05)。与其他DAC浓度组相比,1 000 nmol/L DAC刺激组CD107a、IFN-γ、穿孔素表达显著升高(P<0.05)。结论:RAK细胞经1 000 nmol/L DAC短时刺激后,可提高CD4、CD4+TCM及NKT比例,增强对肝癌细胞的细胞毒效应。
- 李洁羽周智锋林万松陈淑萍叶韵斌
- 关键词：地西他滨免疫表型肿瘤免疫
- B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白对MDR1基因反式激活能力的比较被引量：3
- 2007年
- 目的研究B、C基因型乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对多药耐药基因1(MDR1)反式激活能力的差别。方法PCR扩增B、C基因型HBVX基因并克隆于pcDNA3.1/HisC载体(重组载体分别为pcDNA3.1/HisC-XB及pcDNA3.1/HisC-XC)。以FuGENE6将重组表达载体转染HepG2细胞,采用融合表达的X-press多肽表位抗体,通过Westernblot检测目的蛋白在不同时间段的表达。PCR扩增MDR1基因启动子并克隆于萤火虫荧光素酶报告载体pGL3-Basic(重组载体为pGL-MDR)。pGL-MDR分别与pcDNA3.1/HisC-XB或pcDNA3.1/HisC-XC共转染HepG2细胞,转染后48h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性。实验数据以SPSS11.5软件分析。结果成功克隆X蛋白表达载体及MDR1报告载体。Westernblot显示pcDNA3.1/HisC-XB或pcDNA3.1/HisC-XC在HepG2细胞中均能表达HBVX蛋白,以转染后48h为最高。当pGL-MDR报告质粒与X基因重组载体或空载体质量比在1:2～1:4范围内,萤火虫荧光素酶在各转染细胞内的活性依次为pcDNA3.1/HisC-XB+pGL-MDR组>pcDNA3.1/HisC-XC+pGL-MDR组>pcDNA3.1/HisC+pGL-MDR组(对照组),且存在剂量-效应关系。结论B、C基因型HBVX蛋白对多药耐药基因均有反式激活能力,且B基因型强于C基因型。
- 林万松徐晓陈金烟林旭
- 关键词：病毒蛋白质类
- MICA基因多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨MHC-Ⅰ类链相关分子A(MHC class I chain-related molecule A,MICA)多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤敏感性的关系。方法:测序分析乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S和SK-BR-3的MICA等位基因,用Western blotting和流式细胞术检测MICA重组表达载体转染293T细胞(分别命名为p MCFA5.1、p MCFA4、p231A5R、p231A9和p435A5P)MICA蛋白的表达水平,用LDH法检测NK细胞对转染MICA的293T细胞的杀伤活性,酶联免疫斑点法检测NK细胞穿孔素、颗粒酶B分泌水平。结果:MCF-7细胞表达MICA*008/A5.1和MICA*001/A4,MDA-MB-231和SK-BR-3细胞均表达MICA*019/A5和MICA*002/A9,MDA-MB-435S细胞表达MICA*010/A5。转染MICA后,p MCFA5.1组293T细胞MICA蛋白的表达水平最低(P<0.05),p435A5P组次之(P<0.05),p MCFA4组、p231A5R组和p231A9组表达水平较高(均P<0.05)。NK细胞对转染MICA的293T细胞杀伤活性及穿孔素、颗粒酶B分泌:p435A5P组对NK细胞杀伤的敏感性最低(P<0.05),穿孔素、颗粒酶B分泌水平最低(均P<0.05);p MCFA5.1、p MCFA4、p231A5R和p231A9各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MICA基因多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性密切相关。
- 陈淑萍周智锋林万松李洁羽刘枋叶韵斌
- 关键词：乳腺癌细胞MICA基因自然杀伤细胞
