[目的]运用多种表面增强激光解吸-离子化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片及多元分析方法寻找由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的肝纤维化病程相关的血浆生物标志物。[方法]选用多种SELDI化学表面芯片,比较分析肝纤维化病人和正常血浆样本,筛选和确定3种最佳芯片类型。用这3种芯片分析无肝纤维化、轻度肝纤维化、重度肝纤维化和肝硬化4组共110例患者的血浆样本。运用主成分分析(PCA)、偏最小二乘回归(PLSR)、软独立建模分类法(SIMCA)等数据分析技术寻找差异蛋白。用聚类分析法研究差异蛋白的表达相似性。[结果]3种最适芯片类型分别是弱阳离子交换芯片(WCX2)、强阴离子交换芯片(SAX2)、固定化镍金属螯合亲和层析芯片(IMAC-Ni)。这3种芯片吸附的蛋白质种类互不相同,所发现的差异蛋白质峰也不同。经t检验分析,3种芯片共发现了20个差异蛋白峰。运用PCA、PLSR、SIMCA等数据分析技术,分别发现了105、98、62个差异峰,并对差异峰的重要性的可信度进行衡量。运用聚类分析技术,将差异蛋白的表达模式分组。[结论]联用多种SELDI芯片检测,结合多元分析方法,使SELDI技术成为筛选疾病相关的生物学标志物的有力工具。
转移是肿瘤致死的一个重要因素,其发生需要多基因参与、多步骤调控,相关基因及其作用机制的发现对肿瘤转移的预防与治疗具有重要意义。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)是一种非组蛋白染色质结合蛋白,在DNA复制、修复、重组和基因转录中起重要作用,在细胞损伤和炎症发生时释放至胞外参与信号转导,调节细胞的生长和分化等。近年研究表明,HMGB1在多种肿瘤细胞和组织中高表达,增强肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,促进肿瘤的发生、发展,提示HMGB1有可能成为治疗和预防肿瘤转移的靶标。现就HMGB1在肿瘤转移中的作用及其机制的研究进展作一综述。
目的建立基于SELDI-TOF-MS技术的蛋白质分离、纯化、鉴定技术,用于鉴定运用SELDI技术发现的肝硬化相关血浆差异蛋白。方法采用尿素预处理血液样本,结合离子交换层析、SELDI芯片检测及芯片上酶解、质谱鉴定等多种技术手段,对肝硬化相关的差异蛋白质进行了分离、纯化和鉴定。结果选用阳离子交换剂对血浆样品进行分离,并对分离的各组分进行芯片检测,在300 mM NaCl洗脱组分中,含有与目标蛋白荷质比相同、理化性质相同的蛋白质峰,并且该目标蛋白得到富集。采取芯片原位酶解的方法对目标蛋白进行快速酶解和质谱鉴定,鉴定该差异蛋白为人血浆结合珠蛋白。结论这一技术路线可以对前期运用SELDI技术检测到的疾病相关的差异蛋白质峰进行分离、纯化和鉴定,从而开展进一步的机制研究和应用研究。
