栗俊杰
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肺炎链球菌pbp2b和pbp1a基因突变与青霉素耐药的相关性研究被引量：8
- 2010年
- 目的探讨耐青霉素肺炎链球菌pbp2b和pbp1 a基因的突变与青霉素耐药的关系,为明了肺炎链球菌的耐药性变异机制,防治其感染提供实验依据。方法从呼吸道感染患儿痰标本中分离肺炎链球菌163株,液体培养基连续稀释法测定其对青霉素的最小抑菌浓度(M IC),套式聚合酶链反应(nPCR)扩增pbp2b和pbp1 a基因,扩增产物直接DNA测序,所测序列与青霉素敏感株(SPN R6)的基因序列进行比较,并分析其氨基酸结构的改变。结果 163株肺炎链球菌中检出青霉素敏感菌75株,中度敏感17株,青霉素耐药菌71株(44%)。耐药菌中58株存在pbp2b突变(81.7%),其中,56株为点突变,2株为CCT插入突变;在27株有pbp2b基因突变的B型和C型耐药菌中,21株出现了不同程度的pbp1 a基因突变。PBP2B氨基酸结构改变以苏氨酸变为丙氨酸、精氨酸变为赖氨酸为主,PBP1A以丙氨酸变为苏氨酸、谷氨酸变为天门冬氨酸为主。结论肺炎链球菌的pbp2b和pbp1 a基因突变与对青霉素的耐药性密切相关,PBP2b突变导致低水平耐药;PBP2b和PBP1A突变导致高水平耐药。
- 周侠杨致邦栗俊杰栗俊杰苏善平于拽拽
- 关键词：肺炎链球菌突变
- 幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析被引量：4
- 2009年
- 目的探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性。方法克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白。SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液以及不同的染色时间染色电泳蛋白条带,分析切胶纯化的最佳条件。Western blot鉴定重组HpaA蛋白的抗原性。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,双向免疫扩散法检测血清抗HpaA抗体,鉴定重组蛋白的免疫原性。结果4 mol/L醋酸钠溶液、pH13.0、作用1 h为切胶纯化的最佳条件。经切胶纯化法获得的重组HpaA蛋白体积为6 ml,浓度为0.2942 mg/ml,蛋白量为1.7652 mg,得率为77.1%,West-ern blot显示该蛋白具有良好的抗原性。小鼠免疫血清能与重组HpaA蛋白反应,双扩效价大于等于1∶16,具有良好的免疫原性。结论切胶能够纯化重组HpaA蛋白包涵体,获得高纯度的可溶性重组HpaA蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于进一步的科学研究。
- 范贵荣杨致邦栗俊杰郭丽媛向瑜韩飞
- 关键词：幽门螺旋杆菌粘附素
- 氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏的保护作用被引量：1
- 2008年
- 目的:观察氯沙坦对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法:采用链脲霉素诱导SD大鼠造模,大鼠分为3组:正常对照组、DM模型组和氯沙坦治疗组。12周末时,采用HPLC-荧光分析法测定血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)含量;常规方法检测各组大鼠肾重/体重、血糖、尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率;放射免疫法检测肾组织血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)含量;免疫组化法检测肾组织结缔组织生长因子(connective tissue growth fac-tor,CTGF)表达;透射电镜观察肾脏超微结构。结果:12周末时,DM模型组大鼠血浆Hcy的含量明显增加,肾皮质CTGF表达显著升高,肾组织AngⅡ含量显著增多,肾重/体重、血糖、尿白蛋白排泄率、尿素氮、血肌酐显著增高,肾脏超微结构改变明显。氯沙坦治疗组上述指标显著低于DM模型组(P<0.01),肾脏超微结构改变明显较轻。结论:氯沙坦对DM大鼠肾脏形态和功能有明显保护作用,其机制值得进一步研究。
- 李小彦武文明栗俊杰廖飞陈全
- 关键词：糖尿病肾病氯沙坦结缔组织生长因子
- 幽门螺杆菌重组HpaA蛋白的表达及其包涵体纯化方法的探讨
- 研究目的：用基因工程技术克隆和表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H.pylori)的hpaA基因，以期获得重组蛋白HpaA，并鉴定其抗原性和免疫原性，为进一步制备预防H.pylori感染的HpaA制剂...
- 栗俊杰
- 关键词：幽门螺杆菌包涵体
- 文献传递
- 幽门螺杆菌重组vacA-ctxB蛋白的基因克隆与表达
- 2008年
- 目的构建幽门螺杆菌(H.pylori)vacA毒性片段与霍乱毒素B亚单位(ctxB)基因的原核表达载体,并诱导表达VCTB重组蛋白,为制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础。方法以H.pylori基因组DNA为模板,PCR扩增vacA毒性片段基因,克隆至质粒pQE30中,获得重组质粒pQE30-vacA。再以pET32(a)+-ctxB质粒为模板PCR扩增ctxB目的基因并插入pQE30-vacA中,构建含双基因的表达质粒pQE-vctB。克隆至大肠埃希菌Top10,并在DH5α中诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果,Ni-NTA柱纯化后Western blot鉴定其抗原性,免疫家兔后ELISA法检测血清中VacA和CtxB抗体鉴定其免疫原性。结果vacA的DNA片段为723 bp左右。ctxB基因的DNA片段为372 bp左右,与预计长度相符合。测序结果vctB融合基因由1092 bp组成,编码364个氨基酸残基的多肽,与基因文库相符。表达蛋白VCTB经SDS-PAGE分析,相对分子量为40 000,与预期的一致;表达量约占菌体总蛋白的20%,提纯后SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92%以上。Western blot鉴定能与抗VacA人血清发生特异性反应,ELISA测定能与抗ctxB兔血清发生特异性反应。结论含vctA和ctxB融合基因的表达载体构建成功,并在大肠埃希菌DH5α中表达了重组蛋白质VCTB,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于制备口服疫苗。
- 张任飞杨致邦栗俊杰夏丽君李昌庆陈瀑
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素霍乱毒素B亚单位融合蛋白
- 幽门螺杆菌定植机制的研究进展
- 2007年
- 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种定植于人类胃和十二指肠中的革兰阴性细菌,世界上有1/2以上的人携带Hp,且大多数分布在发展中国家[1].……
- 栗俊杰杨致邦
- 幽门螺杆菌HpaA重组蛋白的表达及免疫效果检测被引量：3
- 2008年
- 目的表达幽门螺杆菌hpaA基因的重组蛋白,并检测其抗原性和免疫原性。方法用PCR方法从H.pylori DNA中扩增hpaA基因片段,插入原核表达载体pQE-30,转化大肠杆菌DH5α,进行诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白的相对分子质量和表达形式,Ni2+-NTA树脂纯化后,用Westernblot鉴定其反应原性。用重组蛋白免疫家兔,检测其免疫原性。用重组蛋白免疫小鼠,分别检测胃黏膜、PP细胞悬液及小肠黏液中的IgG和sIgA的含量。结果重组表达质粒pQE30-hpaA构建正确,所得序列完整,插入的基因片段全长783bp,与基因文库中的hpaA基因同源性达97.3%。表达产物相对分子质量为30000,目的蛋白表达量占全菌总量的31.67%,主要存在于碎菌后上清中,纯度在90%以上。Westernblot显示该蛋白可与病人血清特异性结合,免疫血清能与重组蛋白反应,双扩散效价为1:16。小鼠体内IgG、IgA、sIgA含量明显高于PBS对照组。结论已获得高纯度的HpaA重组蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于研制幽门螺杆菌疫苗。
- 栗俊杰杨致邦张任飞周侠夏丽君
- 关键词：幽门螺杆菌免疫效果
- 酸性条件下糖对抗HpaAIgY的保护作用
- 2010年
- 目的探讨酸性条件下5种糖对抗HpaA蛋黄抗体(IgY)的保护作用,为寻找提高IgY耐酸性的保护剂,制备口服防治幽门螺杆菌(H.pylori)感染的IgY制剂提供理论依据。方法建立检测抗HpaAIgY的间接ELISA法,用不同pH值的模拟胃液分别配制IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml),以pH1.0、2.0和3.0的模拟胃液分别配制含20%菊糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖的IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml),用pH2.0的模拟胃液分别配制含不同浓度的菊糖、山梨醇的IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml)。上述IgY液均于37℃孵育2h,采用间接ELISA法测定IgY的抗体效价。结果 IgY的活性随着模拟胃液pH值的降低而明显下降;在酸性环境下,5种糖对IgY均有一定的保护作用,以山梨醇和菊糖的保护作用较强;在pH2.0时,40%山梨醇和30%菊糖对IgY的保护作用最强,分别能保存80.3%和73.4%的IgY活性。结论在酸性条件下,糖对IgY均有一定的保护作用,菊糖和山梨醇可作为特异性IgY的保护剂。
- 夏丽君杨致邦黄伟张任飞栗俊杰田一玲
- 关键词：蛋黄抗体菊糖山梨醇酸性保护剂
