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梁兆端
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
中山大学中山医学院免疫学教研室
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发文基金:
国家自然科学基金
广东省自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
张萍
中山大学中山医学院免疫学教研室
吴敏昊
中山大学中山医学院免疫学教研室
何军芳
中山大学中山医学院免疫学教研室
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中山大学中山医学院免疫学教研室
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中山大学中山医学院免疫学教研室
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中华微生物学...
年份
1篇
2011
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固有免疫调控蛋白PKR串联亲和纯化系统的建立及应用
被引量:1
2011年
目的构建固有免疫调控蛋白——双链RNA(dsRNA)调控的蛋白激酶(PKR)的串联亲和纯化系统(TAP),初步研究PKR蛋白功能,以用于与PKR相互作用的新蛋白的鉴定与功能分析。方法通过PCR扩增PKR目的基因,克隆至真核表达载体pcTAP—A中。将重组质粒pcTAP-PKR通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRkd)的HeLa细胞,并检测PKR对固有免疫信号通路之一,即促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)激活的调控;最后利用串联亲和纯化试剂盒纯化分离与PKR相互作用的蛋白,验证PKR蛋白复合物的纯化情况。结果将重组质粒pcTAP-PKR转染PKRkd HeLa细胞后,24h后即可检测到PKR融合蛋白,相对分子质量约为75×10^3,其表达量随着转染时间的增加而减少;PKR的过表达可发生自我磷酸化,并引起了MAPK信号通路的激活;Westernblot结果显示,小规模TAP纯化试验成功分离纯化了PKR蛋白。结论成功建立了一个PKR表达和串联亲和纯化系统,并证明PKR具有调控MAPK信号通路活性,为今后鉴定与PKR相互作用的蛋白研究奠定了基础。
李玉叶
梁兆端
吴思宇
谢炯
何军芳
吴敏昊
黄曦
张萍
关键词:
双链RNA
亲和
纯化
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