樊淼
- 作品数：6 被引量：50H指数：4
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- L6细胞胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型被引量：11
- 2009年
- 背景:在胰岛素抵抗的细胞模型中,以游离脂肪酸诱导3T3-L1脂肪细胞和高胰岛素诱导的HepG2肝癌细胞最为常见,对分布最为广泛靶组织骨骼肌的胰岛素抵抗模型报道较少。目的:拟使用L6细胞株建立胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-05在辽宁医学院生物化学与分子生物学教研室完成。材料:L6细胞株由中国协和医科大学细胞中心提供。α-MEM培养基为美国Gibco公司产品。方法:复苏后的L6细胞置于α-MEM培养基中诱导培养14d,以考马斯亮蓝染色观察肌管出现来确定L6成肌细胞株分化完成。将分化后的细胞建立胰岛素抵抗模型,按1×106/孔接种于24孔板内,用含体积分数为0.02胎牛血清的α-MEM培养,以L6细胞贴满24孔板的板底为宜。换液后,向各孔内分别加入含体积分数为0.02牛血清白蛋白的α-MEM无血清培养基饥饿培养5h。设立2组,实验组的板孔内加入含1×10-7mol/L胰岛素的HEPES缓冲液(136mmol/LNaCl,4.7mmol/LKCl,1.25mmol/LMgSO4,1.2mmol/LCaCl2,0.2%牛血清白蛋白,20mmol/LHEPES,pH7.4)孵育1h;对照组的板孔内加入不含胰岛素的HEPES缓冲液孵育1h。弃上清后用HBS缓冲液冲洗,每孔内分别加入含0.1mol/L葡萄糖的HBS缓冲液100μL,孵育10min后取出置于冰板上快速回收上清。主要观察指标:考马斯亮蓝染色观察L6细胞出现肌管结构情况,葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖浓度。结果:诱导前L6细胞未见肌性结构出现,诱导分化后L6细胞内出现肌管结构。使用α-MEM无血清培养基饥饿培养1,3h,两组上清中葡萄糖浓度基本相似(P>0.05);使用α-MEM无血清培养基饥饿培养5h后,实验组上清中葡萄糖浓度明显高于对照组(P<0.05)。结论:诱导分化成肌后的L6骨骼肌细胞经α-MEM无血清培养基饥饿培养5h,在胰岛素浓度为1×10-7mol/L的刺激下可形成胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型。
- 杨亮迟戈张俊王良君刘丽娜樊淼刘海东李伟伟张健飞杨菁隋鸿锦
- 关键词：胰岛素抵抗
- 邻苯二甲醛柱前衍生化高效液相色谱法测定组织中肌肽含量被引量：13
- 2009年
- 目的建立测定小鼠各组织肌肽含量的高效液相色谱法。方法采用c18色谱柱，以甲醇和0．05mol／L磷酸盐缓冲液（pH3．5）为流动相，用邻苯二甲醛为柱前衍生剂，在柱温38℃下采用二元梯度洗脱，对小鼠各组织中的肌肽含量进行了测定。结果肌肽在0．63—10．00μg／mL时峰面积与进样质量浓度有良好的线性关系，其相关系数为0．9996。回收率在98．2％～99．7％之间。检测限为0．05pg／mL（S／N=10）。结论该法灵敏可靠、专属性强、重现性好。小鼠心脏、肝脏、肾脏、大脑皮层和海马中肌肽含量分别为123．67，22．86，158．86，76．57，81．86mg／g。
- 杨菁吴国强白剑樊淼刘春娜王洪新
- 关键词：肌肽高效液相色谱法荧光检测邻苯二甲醛
- 肌肽对ECV304细胞缺氧损伤的保护作用被引量：4
- 2009年
- 目的研究肌肽对缺氧所致人体内皮细胞系ECV304细胞损伤的影响。方法建立缺氧条件下ECV304细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对缺氧损伤的ECV304细胞活性的影响,测定细胞培养基中乳酸脱氨酶(LDH)活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观测其细胞结构。结果浓度为10～20 mmol/L肌肽孵育ECV304细胞6 h后,可以抑制缺氧12 h和24 h引起的ECV304细胞活性下降,同时减少LDH的释放,保持细胞骨架完整。结论肌肽对缺氧所致的ECV304细胞伤具有保护作用。
- 白剑张俊迟戈刘丽娜樊淼刘海东李伟伟杨菁
- 关键词：肌肽细胞骨架ECV304细胞缺氧
- 肌肽对低氧所致大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用被引量：11
- 2010年
- 目的:研究肌肽对低氧所致大鼠血管内皮细胞损伤的影响。方法:建立低氧条件下大鼠血管内皮细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对低氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞培养基中LDH活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观测其细胞结构。结果:浓度为10mmol/L～20mmol/L肌肽孵育血管内皮细胞6h后,可以抑制缺氧12h和24h引起的血管内皮细胞活性下降,同时减少LDH的释放,保持细胞骨架完整。结论:肌肽对低氧所致的血管内皮细胞损伤具有保护作用。
- 白剑迟戈张俊刘丽娜樊淼刘海东李伟伟杨菁
- 关键词：肌肽细胞骨架血管内皮细胞损伤
- 生地黄中梓醇纯化工艺优选被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨生地黄中梓醇的最佳纯化工艺。方法:采用高效液相色谱法检测梓醇含量。以梓醇含量为指标,比较不同型号的大孔树脂、活性炭对梓醇的分离效果,再对所含梓醇的部分应用不同的葡聚糖凝胶进行分离。结果:优选确定的工艺为:用15%活性炭对梓醇粗提物吸附后,活性炭用20%乙醇洗脱,将收集洗脱液浓缩后用葡聚糖凝胶G-15进行分离,所得产物中梓醇含量在85%以上。结论:优化确定的梓醇化化工艺简单可行。
- 杨菁刘影白剑樊淼安阳岳春丽
- 关键词：生地黄梓醇HPLC
- 地黄寡糖及其主要成分对大鼠脑片氧化应激损伤保护作用研究被引量：11
- 2009年
- 目的:探讨地黄寡糖及其主要组分对H2O2所致大鼠大脑皮质和海马脑片氧化应激损伤的保护效果。方法:取SD大鼠大脑皮质和海马制作脑片,然后随机分为对照组(Control);单纯地黄寡糖用药组(ROS);单纯水苏糖组(stachyose);单纯梓醇组(catalpol);H2O2损伤组(H2O2);损伤前地黄寡糖预处理组(ROS+H2O2);损伤前水苏糖预处理组(stachyose+H2O2);损伤前梓醇预处理组(catalpol+H2O2)。TTC染色法检测脑片组织损伤百分率,比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:H2O2孵育30min明显损伤大鼠海马和皮质脑片,组织损伤率明显升高,LDH释放增加(P<0.01)。8、40、200 mg/L的地黄寡糖或120 mg/L的水苏糖、20 mg/L的梓醇可不同程度改善H2O2所致的氧化应激损伤引起的组织损伤,减少LDH的漏出,但各成分均对对照组脑片无影响。结论:地黄寡糖、水苏糖、梓醇均能减轻H2O2所造成的氧化应激损伤。梓醇相比水苏糖在地黄寡糖中起主要作用。
- 樊淼杨菁白剑于涛宋扬
- 关键词：地黄寡糖水苏糖梓醇脑片乳酸脱氢酶
