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氩氦冷冻胶质瘤细胞致敏树突状细胞诱导肿瘤杀伤效应的实验研究被引量：1: 2013年; 目的探讨氩氦冷冻胶质瘤细胞冻融产物对C57BL／6小鼠骨髓源树突状细胞（DCs）成熟的影响．以及致敏DCs诱导肿瘤杀伤效应的作用机制。方法采用氩氦冷冻法冻融GL261胶质瘤细胞为实验组，只插入探针不冷冻为阴性对照组，冻融等量PBS为空白对照组，采用BCA法测定冻融产物蛋白浓度；体外诱导小鼠骨髓细胞为DCs，加入各组冻融产物后观察其形态学变化。流式细胞仪检测DCs表面CD80、CD86、MHC—I、MHC-Ⅱ的表达。ELISA检测其上清液中IL．12p70的含量；提取小鼠脾脏T细胞，与各组抗原致敏的DCs共培养后活化，流式细胞仪检测活化T细胞CD3、CD4、CD8的表达；以GL261细胞为靶细胞，以活化的T细胞即细胞毒性T细胞（CTLsl作为效应细胞，效靶比分别为10：1、50：1和100：1时CCK-8法检测CTLs对GL261的杀伤率。结果实验组冻融产物即肿瘤抗原浓度[（1071±240．94）μg／mE]高于阴性对照组[（91．42±55．75）μg／mL]及空白对照组（0Ixg／mL），差异有统计学意义（JD〈O．05）；实验组DCs有典型成熟DCs形态，表型CD80、CD86、MHC-I、MHC—II的表达率及IL-12p70分泌量高于阴性对照组及空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；实验组CD80细胞表达率高，CD4＋T细胞表达率低，与阴性对照组及空白对照组相比差异有统计学意义（p〈0．05）；不同效靶比时实验组CTLs对GL261细胞的杀伤率显著高于阴性对照组及空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论氩氦冷冻胶质瘤细胞可获取大量肿瘤抗原并促进DCs成熟，冻融产物致敏DCs后可有效负载肿瘤抗原产生抗肿瘤效应，其机制与DCs表面分子CD80、CD86、MHC-I、MHC-Ⅱ的表达上调并诱导T细胞转化为CTLs有关。; 殷志林卢国辉肖振勇刘天助何骁征王其福林春南张世忠; 关键词：氩氦冷冻神经胶质瘤树突状细胞细胞毒性T细胞

氩氦冷冻胶质瘤细胞致敏树突状细胞诱导肿瘤杀伤效应的实验研究: 胶质瘤是脑部最常见的恶性肿瘤,尽管手术最大切除加放疗和化疗,但复发几乎不可避免,预后极差,平均生存期只有15-18个月。氩氦冷冻是近年来兴起的一种新的肿瘤微创靶向治疗手段,已经广泛应用于各种肿瘤的治疗,比如前列腺癌、肾癌...; 殷志林; 关键词：氩氦冷冻胶质瘤树突状细胞细胞毒T细胞; 文献传递

人胎盘底蜕膜间充质干细胞抗炎特性对帕金森病模型大鼠的神经保护作用被引量：2: 2013年; 目的研究人胎盘底蜕膜间充质干细胞（hPDB-MSCs）抗炎特性对帕金森病（PD）模型大鼠多巴胺能神经元的影响。方法体外培养hPDB-MSCs，6．羟基多巴（6-OHDA）制备大鼠PD模型并按照随机数字表法分为模型组与移植组，每组32只。hPDB-MSCs尾静脉移植观察各组大鼠行为学改变。免疫组化检测移植后3d、1周、2周及4周各组大鼠损伤侧黑质酪氨酸羟化酶（TH）、离子钙接头蛋白（Ibal）表达。实时荧光定量PCR检测各时间点各组大鼠损伤侧黑质抗炎因子人白细胞介素-10（hIL-10）、人转化生长因子-β（hTGF-β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达。结果hPDB-MSCs移植后1周、2周、4周，移植组大鼠阿朴吗啡诱导的平均旋转圈数明显低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化结果显示移植组大鼠损伤侧黑质部位TH阳性细胞数较模型组明显增加，1周、2周、4周时差异有统计学意3Z（P〈0．05）。移植组大鼠损伤侧黑质部位Ibal阳性细胞则明显减少，4周时最为显著。mRNA水平，移植组大鼠hIL-10及hTGF-β表达均较模型组增加，而TNF-α表达量则逐渐降低。结论hPDB-MSCs尾静脉移植后能够通过抗炎机制抑制PD模型大鼠多巴胺能神绎元丧失，改善PD模型大鼠症状。; 肖振勇卢国辉殷志林卢凤飞何骁征郭燕舞姜晓丹张世忠; 关键词：间充质干细胞神经保护帕金森病

冷冻治疗对胶质瘤细胞凋亡影响的实验研究: 2015年; 目的探讨冷冻治疗诱发肿瘤细胞凋亡的原因。方法（1）将GL261胶质瘤细胞（1×10^7个／10μL）注入C57小鼠背部皮下，建立荷瘤小鼠模型，肿瘤直径达15～20mm时将小鼠按随机数字表法分为冷冻治疗组m=17）和假手术组（n=15），前者行冷冻手术治疗，后者只插入冷冻刀但不进行冷冻操作。术后2h提取冷冻肿瘤组织释放物；术后12h、24hTUNEL染色检测肿瘤组织凋亡情况；术后24hWesternblowing实验检测肿瘤组织前体（pro）-Caspase．8、pro．Caspase-8、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）的表达。（2）将GL261胶质瘤细胞分为冷冻释放物组、对照组，分别加入1倍浓度的冷冻释放物和等量DMEM，培养12h后TUNEL染色检测细胞凋亡，Westembloaing检测细胞上述凋亡相关蛋白的表达。结果（1）TUNEL染色显示术后12h冷冻治疗组小鼠胶质瘤组织切片S1区呈均一性坏死，S2区出现明显凋亡带（早发凋亡），术后24hS1区呈均一性坏死，S2区凋亡消退，S3区近靶区侧出现一新发凋亡带（迟发凋亡）。Westernblouing检测显示，冷冻治疗组小鼠肿瘤组织S2区pro—Caspase-9和PARP蛋白的表达明显少于S1、S3、S4区，S3区pro—Caspase-8的表达低于S1、S2、S4区，差异均有统计学意SL（P〈0．05）。（2）TUNEL染色显示，与对照组比较，冷冻释放物组GL261胶质瘤细胞凋亡率增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。WestembloRing检测显示，与对照组相比，冷冻释放物组细胞pro—Caspase_8、pro—Caspase．9表达下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论冷冻治疗后肿瘤组织释放物具有诱发胶质瘤细胞凋亡的作用。; 刘天助卢凤飞潘俊殷志林张世忠; 关键词：冷冻治疗神经胶质瘤凋亡

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殷志林

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