- 小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备被引量：10
- 2014年
- 背景:建立一种既可以大量制备,又易于保存并保持较高活性的饲养层细胞是人胚胎干细胞培养研究的重要环节。目的:建立昆明小鼠胚胎成纤维细胞的最佳分离培养方法,评价其用于人胚胎干细胞饲养层研究的可行性。方法:用不同浓度胰蛋白酶分步消化法体外分离和培养昆明小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性,制备胚胎成纤维细胞饲养层,检测人胚胎干细胞在饲养层上培养的生长状态。结果与结论:制备昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄为13.5 d。不同浓度胰蛋白酶分步消化法制备的胚胎成纤维细胞生长状态好,获得的成纤维细胞纯度高,增殖活跃。冻存2周,1,3,6个月内复苏的细胞存活率差异无显著性意义。小鼠胚胎成纤维细胞在第2-4代增殖旺盛,第5代以后细胞增殖活力明显下降。人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞长期传代后呈典型的未分化形态,碱性磷酸酶和过碘酸-雪夫染色均为阳性。结果表明建立的昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层分离培养法可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。
- 胡三强王妍妍马永宾胡嘉波
- 关键词：干细胞人胚胎干细胞小鼠胚胎成纤维细胞饲养层国家自然科学基金
- 小鼠胚胎培养在新建体外受精实验室的质量控制验证被引量：2
- 2014年
- 目的:通过小鼠胚胎的生长情况,对新建体外受精(IVF)实验室的质量控制进行验证,为人类辅助生殖技术的开展提供理论依据。方法:将体内与IVF方式得到的2细胞期胚胎放入不同培养箱中培养,观察胚胎生长情况。结果:IVF得到的2细胞期胚胎放入1、2、3号培养箱中培养,114h后囊胚形成率分别为85.44%、90.99%和89.93%,3者之间差异均无统计学意义(P>0.05)。体外受精得到的2细胞期胚胎放入2号培养箱中培养,114h后囊胚形成率为93.85%,与体内受精的2号培养箱的囊胚形成率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:3种培养箱均可运用于该实验室,该实验为人类辅助生殖技术的开展提供了可靠的基础。
- 刘云李峰陈小芳王妍妍胡杰胡嘉波
- 关键词：小鼠胚胎培养箱体外受精囊胚率
- 人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的初步研究
- 2013年
- 目的建立人胚胎干细胞(hESCs)向间充质干细胞(MSCs)分化方法,并初步鉴定hESCs来源的MSCs(hESC-MSCs)。方法用拟胚体法将hESCs分化为MSCs,对其形态进行观察;用流式细胞术检测细胞表面标志;测定细胞化学染色特性。结果 hESC-MSCs形态与人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)相似;流式细胞分析显示hESC-MSCs表达CD29、CD44、CD13,但不表达CD14、CD133、CD34、CD45、HLA-DR;细胞化学染色显示,hESC-MSCs碱性磷酸酶阴性,过碘酸-雪夫反应弱阳性。结论hESCs在体外可分化为hESC-MSCs,hESC-MSCs符合MSCs特性。
- 胡嘉波王晓慧麻全慧张微王妍妍闻向梅
- 关键词：胚胎干细胞间充质干细胞流式细胞术细胞化学染色
