目的:探索嗅鞘细胞移植实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的移植途径、可行的移植时间窗,移植后的迁移特性以及发挥保护作用的可能机制。方法:分别采用豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)与MOGIgd融合蛋白免疫Lewis大鼠,制作EAE模型;每组发病大鼠分别归入:MOG组和GPSCH组。MOG组分为:OECs空白对照组(MOG0组)4只、OECs尾静脉移植组(MOG1组)7只、OECs侧脑室移植组(MOG2组)4只;GPSCH组分为:OECs空白对照组(GPSCH0组)4只、OECs尾静脉移植组(GPSCH1组)4只。发病高峰期,按照实验分组,分别采用立体定向侧脑室细胞移植和尾静脉细胞移植,观察移植后大鼠的临床症状;移植后2周观察OECs在大鼠体内的分布情况及组织病理学方面的缓解情况。结果:OECs分别经尾静脉、侧脑室移植后,EAE大鼠症状改善,与空白对照组神经功能评分峰差值比较有显著差异(F=18.470,P<0.01;t=-7.147,P<0.01),MOG1组和MOG2组评分峰差值间无显著差异(P>0.05);Hoechst33342示踪证实了OECs能在大鼠体内存活及强大的迁移能力;OECs经尾静脉移植后,可以透过破坏的血脑屏障进入脑内,分布于软脑膜和病灶周围;经侧脑室移植的嗅鞘细胞,向病灶局部广泛迁移;组织病理学评分(HE染色和Luxol fast blue髓鞘染色),移植组与未移植组间无显著差异(P>0.05),2种途径移植组间亦无显著差异(P>0.05)。结论:纯化培养的成年大鼠嗅球嗅鞘细胞分别经尾静脉和侧脑室移植EAE大鼠,均可缓解发病大鼠的症状。
目的:探讨采用分子克隆技术诱导表达出的含硫氧还蛋白基团的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外Ig样结构域(MOGIgd-TrxA)融合蛋白免疫C57BL/6小鼠,建立多发性硬化的动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎的可行性;通过检测模型小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞的数量,初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎发病机制中的作用。方法:(1)分子克隆技术合成MOGIgd-TrxA融合蛋白,纯化、超滤浓缩后Bradford法测定蛋白浓度。(2)动物实验:C57BL/6小鼠,随机分为4组:MOGIgd-TrxA组(MOG组)、豚鼠脊髓匀浆组、硫氧还蛋白(TrxA)组及生理盐水正常对照组,每组动物12只,各组以相应抗原乳剂免疫小鼠制作EAE模型后评估其临床神经功能、组织病理(HE染色和髓鞘luxol fast blue染色)并评价模型质量。(3)流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞的百分比。结果:(1)纯化浓缩后MOGIgd-TrxA蛋白纯度达98%左右,浓度约2.3g/L。(2)MOG组小鼠与豚鼠脊髓匀浆组小鼠在临床神经功能评分等方面无显著差异(P>0.05)。2组发病动物组织切片HE染色和髓鞘染色均有不同程度的病理改变。(3)CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例MOG组为(4.71±1.61)%,豚鼠脊髓匀浆组为(1.44±0.65)%,均明显低于生理盐水正常对照组(9.22±1.24)%和硫氧还蛋白(TrxA)组(8.97±1.20)%(P<0.01)。结论:(1)分子克隆技术合成的MOGIgd蛋白免疫C57BL/6小鼠能够成功诱导出EAE模型,且模型稳定、发病率高,为进一步研究MS免疫发病机制并采取有效治疗措施奠定基础;(2)CD4+CD25+调节性T细胞数量减少可能与EAE小鼠临床表现相关。
