王富强
- 作品数：17 被引量：34H指数：4
- 供职机构：华北制药集团新药研究开发有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划微生物药物技术创新与新药创制产学研联盟国家技术创新计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生更多>>
- 产黄青霉谷胱甘肽S-转移酶基因PcgstA的克隆与鉴定(英文)被引量：1
- 2006年
- 从青霉素工业生产菌产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)中首次克隆了一个谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因,定名为PcgstA.该基因的开放阅读框长840bp,含有两个内含子,编码一个238氨基酸残基的蛋白质.其推断的氨基酸序列与一些已经鉴定的丝状真菌GST具有50%左右的序列一致性.PcgstA的完整编码区经RT-PCR扩增、验证,插入原核表达载体pET11a,转化大肠杆菌BL21(DE3)-RP菌株,表达得到重组PcGSTA蛋白.酶活测定证实,重组PcGSTA具有GST活性,其对底物CDNB(1-chloro-2,4-dinitrobenzene)的比活为(0.159±0.031)μmol/(min·mg).利用TaqMan探针法,对PcgstA的表达情况进行了比较.结果表明,在添加了侧链前体苯乙酸的青霉素生产培养基中,PcgstA的表达水平和在不含苯乙酸培养基中的表达相比明显下调,显示了该基因与苯乙酸代谢的关系.
- 王富强郑桂珍赵颖任志红贾茜贺建功于军
- 关键词：产黄青霉谷胱甘肽S-转移酶苯乙酸
- 工业用产黄青霉菌基因组的RAPD多态性研究被引量：1
- 2013年
- 为寻找高产菌株的分子标记,尝试利用RAPD(random amplified polymorphic DNA)技术,对青霉素生产菌株进行基因组多态性分析,分别以9株不同产量的产黄青霉菌基因组DNA为模版,筛选引物23条,并且对一条高产菌株特异条带进行了克隆与杂交验证.
- 刘静戴梦章丽赵颖张佳王富强
- 关键词：产黄青霉RAPD基因组多态性
- 丝状真菌产黄青霉DNA提取方法的改进被引量：4
- 2010年
- 为探索提取产黄青霉基因组DNA的简便方法,采用起始菌体量0.2 g,10 g/L十六烷基三甲基溴化铵裂解液,通过液氮/65℃反复冻融对菌种破壁,代替了液氮研磨,且不需要玻璃珠,操作简便,重复性好,提取的DNA质量高,极大地方便了后续基因操作.
- 赵颖刘静戴梦郑桂珍章丽张佳王富强
- 关键词：十六烷基三甲基溴化铵
- 编码产黄青霉苯乙酸羟化酶的基因及其应用
- 本发明涉及来自产黄青霉的新的编码苯乙酸羟化酶的基因(pahB)，该基因编码的多肽及含有该基因的表达载体，并证明了苯乙酸能显著诱导该基因的表达。本发明为利用基因工程手段改造产黄青霉菌从而提高青霉素产量提供了方向和靶点，对于...
- 王富强任志红刘静戴梦郑桂珍王泽建赵颖王红怡贾茜贺建功
- 文献传递
- 编码产黄青酶苯乙酸羟化酶的基因及其应用
- 本发明涉及来自产黄青霉的新的编码苯乙酸羟化酶的基因(pahB)，该基因编码的多肽及含有该基因的表达载体，并证明了苯乙酸能显著诱导该基因的表达。本发明为利用基因工程手段改造产黄青霉菌从而提高青霉素产量提供了方向和靶点，对于...
- 王富强任志红刘静戴梦郑桂珍王泽建赵颖王红怡贾茜贺建功
- 文献传递
- 四羟基环孢菌素衍生物转化菌株发酵条件优化被引量：2
- 2014年
- 目的对四羟基环孢菌素衍生物([γ-HyMeLeu4]CyA)转化菌Nonomuraea dietziae的发酵条件进行优化。方法采用均匀设计对发酵培养基进行优化,考察糊精、黄豆饼粉、葡萄糖、酵母粉和蛋白胨对发酵单位的影响,同时对底物环孢菌素A的添加时间、添加量和发酵培养时间进行了摸索。结果得到了最优培养基配方为:糊精1.2%、葡萄糖3.0%、酵母粉0.9%、蛋白胨0.5%、黄豆饼粉1.5%;底物添加最佳时间是36h,添加量是400μg/mL,最佳放瓶时间是96h。在优化后的培养条件下,[γ-HyMeLeu4]CyA的产量提高了63%左右。结论优化后的发酵条件更适合转化菌的生长,有利于目的产物产量的提高,该发酵条件的优化为[γ-HyMeLeu4]CyA的工业化生产奠定了基础。
- 章丽戴梦郑桂珍赵颖刘静张佳王富强
- 关键词：发酵条件优化均匀设计
- 编码产黄青霉谷胱苷肽转移酶的基因及其应用
- 本发明涉及来自产黄青霉的新的编码谷胱苷肽转移酶的基因(PcGSTA)，该基因编码的多肽及含有该基因的表达载体。本发明同时提供了苯乙酸对本发明的新基因PcGSTA的表达的影响，进而提供了将本发明的新基因PcGSTA应用于产...
- 王富强郑桂珍赵颖任志红穆岷丰玫玫苏彩云张春珍贾茜贺建功
- 文献传递
- 编码产黄青酶谷胱苷肽转移酶的基因及其应用
- 本发明涉及来自产黄青霉的新的编码谷胱苷肽转移酶的基因(PcGSTA)，该基因编码的多肽及含有该基因的表达载体。本发明同时提供了苯乙酸对本发明的新基因PcGSTA的表达的影响，进而提供了将本发明的新基因PcGSTA应用于产...
- 王富强郑桂珍赵颖任志红穆岷丰玫玫苏彩云张春珍贾茜贺建功
- 文献传递
- 一个新的产黄青霉谷胱甘肽转移酶基因的克隆和鉴定被引量：1
- 2007年
- 以产黄青霉(Penicillium chrysogenum Thom)cDNA为模板,克隆得到一个新的谷胱甘肽转移酶基因PcgstB,其开放阅读框长651bp,编码216个氨基酸的蛋白质。与已知序列进行BLASTp比较显示,该蛋白具有保守的GST结构域,与烟曲霉GstB的序列一致性最高,达65%。将PcgstB与原核表达载体pTrc99A连接得到表达质粒pTrc-gstB,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导后获得以可溶形式表达的重组PcGstB蛋白。以1-chloro-2,4-dinitrobenzene(CDNB)为底物检测,确认该蛋白具有GST活性。
- 张媛王富强郑桂珍戴梦刘静赵颖任志红赵宝华贾茜
- 关键词：谷胱甘肽转移酶产黄青霉原核表达活性测定
- 新的产黄青霉苯乙酰辅酶A连接酶基因及提高青霉素产量的方法
- 本发明涉及分离的来自产黄青霉的新的苯乙酰辅酶A连接酶基因(pclB)、其氨基酸序列和表达载体，并证明了该基因的表达受苯乙酸的诱导，进而构建了含有本发明新基因的表达载体和产黄青霉工程菌菌株，该转基因菌株的青霉素产量明显提高...
- 王富强刘静戴梦任志红韦春玲张佳赵颖代明伟贾茜贺建功
- 文献传递
