石锦平
- 作品数：8 被引量：11H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多重PCR在质粒拷贝数检测中的应用被引量：4
- 2011年
- 聚合酶链式反应(PCR)作为常规分子克隆技术已在分子生物学的各个领域得到广泛应用。然而,多重PCR技术应用于质粒拷贝数检测的研究尚未见报道。为深入探索多重PCR在质粒拷贝数测定中的应用,首先利用构建的多重PCR引物设计及评估体系分别针对细菌基因组DNA和质粒载体DNA序列设计多重PCR引物;然后以转化有不同质粒载体的大肠杆菌菌液为模板进行多重PCR反应;最后利用凝胶成像仪采集图像后进行积分光密度分析以获得质粒的相对拷贝数。结果显示通过多重PCR得到的质粒相对拷贝数与Real-time PCR和Southern blot的检测结果基本一致,说明多重PCR可用于质粒拷贝数的定性检测。利用多重PCR技术建立了一种便捷的质粒拷贝数检测方法,为在宿主细胞中快速确定克隆载体或表达载体的相对含量提供了参考。
- 李媛任长虹吴永红叶巧石锦平屈武斌郑晓飞刘虎岐张成岗
- 关键词：质粒拷贝数多重PCR菌液实时定量PCRSOUTHERNBLOT
- 秀丽隐杆线虫双突变株系hif-1(ia04);glb-13(tm2825)的制备与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的以秀丽隐杆线虫为模式生物研究珠蛋白(globin)13(glb-13)的生理作用,以回交2次的glb-13(tm2825)突变株系和hif-1(ia04)构建线虫双突变株系hif-1(ia04);glb-13(tm2825)。方法 glb-13(tm2825)与野生型N2株系交配获得glb-13(tm2825)的雄虫,再与N2的雌雄同体线虫进行交配,回交2次后,通过单只线虫基因组PCR法鉴定出交配后的纯合体。使用hif-1(ia04)和野生型线虫N2进行交配得到hif-1(ia04)的雄虫,然后再与glb-13(tm2825)雌雄同体线虫交配,通过单只线虫基因组PCR法鉴定出交配后的纯合体。结果获得hif-1(ia04);glb-13(tm2825)双突变株系。结论通过线虫交配回交可以使突变株系线虫保持稳定性状,而突变株系之间的交配可以制备出双突变株系,为深入开展glb-13的功能研究奠定了物质基础。
- 石锦平任长虹李媛张成岗
- 关键词：秀丽隐杆线虫突变珠蛋白两性畸形低氧诱导因子1
- 秀丽线虫物理低氧损伤模型的建立与应用
- 2011年
- 目的:利用秀丽线虫研发合适的低氧损伤模型,以更好地揭示低氧生理和低氧病理的分子机制。方法:通过对秀丽线虫进行不同时间的低氧处理,系统观察线虫的死亡率、运动功能、细胞形态及相关蛋白表达水平的变化,分析低氧对线虫的损伤情况。结果:氧浓度为0.2%的物理性低氧可引起秀丽线虫多种细胞形态发生变化,进而导致线虫死亡,且死亡率随低氧时间延长而持续增加,同时低氧诱导因子(HIF-1)的表达显著上调。进一步通过神经元特异性转基因(绿色荧光蛋白)株系观察到低氧可引起神经元特征性损伤。结论:成功建立有效、简便易行的线虫物理低氧损伤模型,可用于低氧病理和低氧应答分子机制研究。
- 任长虹张继业石锦平蒋斌赵娜刘虎岐张成岗
- 关键词：秀丽线虫
- 利用秀丽线虫研究脑红蛋白的抗氧化损伤作用及细胞骨架蛋白的缺氧应答机制
- 秀丽线虫(Caenorhabditis elegans,C. elegans)是1974年Brenner首次公开报道的模式生物,其优点很多,是进行遗传、基因研究方面的首选模式生物。线虫生长周期短,实验室饲养简便,具备完整...
- 石锦平
- 关键词：秀丽线虫脑红蛋白细胞骨架
- 文献传递
- 线虫PCR:直接针对秀丽线虫进行PCR扩增基因组DNA的新方法被引量：3
- 2011年
- 目的:直接针对秀丽线虫进行PCR反应,以便快速扩增基因组DNA,从而提高钓取目的基因和鉴定基因组是否发生突变的效率。方法:根据生物信息学分析,针对不同基因设计单重或多重PCR引物;在不含Taq DNA聚合酶的PCR反应体系中加入蛋白酶K消化秀丽线虫染色体中的组蛋白,然后加入Taq酶,直接针对野生型或突变型秀丽线虫个体进行PCR反应,无须提前制备基因组DNA。结果:用该方法能直接从秀丽线虫体内的基因组DNA中扩增出目的基因片段,与常规预先制备基因组DNA为模板的扩增产物条带位置一致,且特异性更高。同时,针对不同基因的多重PCR亦能扩增出理想的目的基因片段。结论:直接针对秀丽线虫进行PCR能够实现基因组DNA的快速扩增和鉴定,在保证反应特异性的同时,还能显著提高PCR反应的灵敏度,为秀丽线虫基因组的快速鉴定提供了一种便捷方法。
- 李媛任长虹石锦平李伟光刘虎岐张成岗
- 关键词：秀丽线虫多重PCR基因扩增
- 人源脑红蛋白转基因秀丽线虫的制备、鉴定及生理功能分析
- 2011年
- 目的以秀丽隐杆线虫为模式生物制备人源脑红蛋白(human neuroglobin,hNgb)转基因线虫,初步探讨外源性hNgb对线虫寿命和产卵率的影响。方法通过显微注射方法制备hNgb转基因线虫,使用蛋白印迹和免疫组织化学进行鉴定。使用野生型N2和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因线虫作为对照组,测量转基因线虫的寿命和产卵率。结果成功获得hNgb转基因株系线虫,其寿命和产卵率与野生型N2和EGFP转基因线虫相比,差异无统计学意义。结论外源性hNgb转基因不影响线虫的发育和正常生理功能,可用于Ngb功能的深入研究。
- 石锦平石锦平任长虹李媛张继业张成岗
- 关键词：脑红蛋白秀丽隐杆线虫转基因株系产卵率
- 利用秀丽线虫研究Ngb的抗氧化损伤作用及细胞骨架蛋白的缺氧应答机制
- 秀丽线虫(Caenorhabditis elegans,C. elegans)是1974年Brenner首次公开报道的模式生物,其优点很多,是进行遗传、基因研究方面的首选模式生物。线虫生长周期短,实验室饲养简便,具备完整...
- 石锦平
- 关键词：抗氧化损伤细胞骨架蛋白
- 文献传递
- TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白的跨膜转导研究被引量：3
- 2011年
- TAT蛋白转导肽是HIV-1病毒编码的一段富含碱性氨基酸序列的多肽,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,如细胞质膜和血脑屏障等。为探索TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白跨膜转导作用,以EGFP为报告基因结合常规分子克隆技术构建了原核表达载体pET28b-EGFP和pET28-TAT-EGFP,继而利用诱导剂IPTG(终浓度1mmol/L)诱导表达了靶蛋白并结合荧光显微观察、SDS-PAGE和Western blot等鉴定技术获得表达靶蛋白的大肠杆菌BL21(DE3)细胞,最后将其涂布到含有Kana+的LB固体培养基上直接饲喂野生型N2株系线虫,利用荧光显微镜观察绿色荧光信号在线虫体内的分布。结果证明,TAT-EGFP融合蛋白较之于EGFP可高效、可溶性表达,而且通过直接饲喂秀丽线虫表达靶蛋白的大肠杆菌48小时后,TAT-EGFP荧光信号明显分布于线虫肠壁细胞,而EGFP荧光信号则分布在秀丽线虫肠腔,空载体对照组未见任何荧光信号,说明TAT蛋白转导肽能够高效介导外源蛋白在秀丽线虫体内跨膜转导。同时,通过比较空载体对照组与实验组线虫微分干涉图像,未见线虫出现明显的细胞形态变化,说明TAT蛋白转导肽介导的外源蛋白跨膜转导作用是安全的,为在秀丽线虫体内直接研究外源蛋白的功能以及进行蛋白药物的研发提供了重要参考。
- 吴永红石锦平何国维任长虹高艳张成岗
- 关键词：原核表达线虫跨膜转导
