秦志梅
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 双重荧光定量RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用被引量：3
- 2012年
- 目的建立检测肠道病毒(EV)、B1型柯萨奇病毒(CVB1)的双重荧光定量RT-PCR法。方法用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,优化双重荧光定量RT-PCR反应体系,建立标准曲线并评价该法的灵敏度、特异性和重复性,用该法检测150份病毒性心肌炎患儿治疗前肛拭子和29份治疗后粪便标本,并与文献提供的PCR法进行对比。结果该法对EV、CVB1型肠道病毒检测具有较高特异性,检出限均为2×10-2TCID50/mL;具有较好的重复性,CV均<2.3%;标准曲线的相关系数(r2)分别为0.999和0.997,扩增效率(%)分别为98.809和96.564;179份临床标本用该法检测95份为EV病毒,其中59份为CVB1病毒,与文献提供的PCR法结果符合率为98.88%(P均>0.05)。结论建立的双重荧光定量RT-PCR法可同时检测并区分EV和CVB1型病毒,适用于病毒性心肌炎临床标本的检测。
- 葛霞琴崔大伟谢国良陈理华王祥郑书发余斐秦志梅范剑陈凌晓王帅毛佳燕陈瑜
- 关键词：肠道病毒
- 滤泡辅助性T淋巴细胞在麻疹患儿中的表达及在免疫应答中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨滤泡辅助性T淋巴细胞（TFH）在麻疹患儿中的表达及其在免疫应答中的作用.方法 连续采集2013年4至9月浙江省宁波市北仑区人民医院收治的60例麻疹患儿急性期全血和血清样本,选择同期体检儿童17名作为对照组.利用流式细胞术检测麻疹患儿和健康体检儿童外周血中的TFH频数,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中麻疹病毒IgM和IgG的抗体含量.两组TFH频数比较采用t检验,麻疹患儿血清中IgM、IgG抗体水平与TFH所占频数的相关性分析采用Pearson法.结果 麻疹组和对照组CD4＋ CXCR5＋细胞占CD4＋T淋巴细胞的频数分别为（8.923 ±0.665）％和（4.274 ±0.182）％,两组之间差异有统计学意义（t=2.751,P＜0.01）.以CD4＋T淋巴细胞射门,麻疹组中CXCR5和ICOS双阳性细胞频数,CXCR5和PD-1双阳性细胞频数分别为（1.075 ±0.107）％和（0.656±0.074）％,对照组中则分别为（0.456±0.068）％和（0.224±0.017）％,麻疹组高于对照组（t=2.169和2.968,P值均＜0.05）.Pearson分析结果显示,麻疹患儿TFH所占频数与IgM抗体水平呈正相关（r=0.490,P＜0.05）.结论 TFH在麻疹病毒感染引起的特异性麻疹抗体的产生中发挥重要作用.
- 周方满崔大伟秦志梅叶鸿雁林碧君谢红意纪超陈瑜
- 关键词：麻疹病毒滤泡辅助性T细胞抗体
- 手足口病肠道病毒检测中两种核酸提取方法的比较被引量：3
- 2013年
- 目的对手工核酸提取法和全自动核酸提取仪法在手足口肠道病毒RNA荧光定量PCR检测中提取效率、重复性、耗时和成本进行比较。方法手工法试剂盒和全自动核酸提取仪对样本进行核酸提取,采用实时荧光定量PCR进行评价。结果提取仪法阳性46例,试剂盒法阳性43例,二者无明显差异(P>0.05)。提取仪法重复性高于试剂盒法(CV3.5%<5%)。核酸液终体积:提取仪法70μL,试剂盒法50μL。提取仪法耗时较短,成本较高;试剂盒法耗时较长,成本较低。结论两种方法结果无显著差异,均能满足临床需要,核酸提取仪法更具优势。
- 洪巧珍崔大伟杨先知秦志梅谢国良陈瑜
- 关键词：手足口病CT值
- 双重荧光定量RT-PCR检测肠道病毒方法的建立及应用
- 目的建立一种双重荧光定量RT-PCR检测并鉴定肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒B1(CVB1)型的方法。方法利用Primer Express 3.0设计PCR引物和探针,使用一系列不同滴度的病毒培养物和不同来源的病原体分别进...
- 崔大伟谢国良葛霞琴秦志梅郑书发余斐范剑楼滨陈瑜
- 关键词：肠道病毒
- 文献传递
- 五重荧光定量RT-PCR法检测呼吸道病毒被引量：14
- 2011年
- 目的建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A(Flu A)、流感病毒B(Flu B)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及新甲型H1N1流感病毒(nH1N1)的方法。方法以人细胞RNA酶P基因为内参,用Primer Express 3.0设计PCR引物和探针。用一系列不同滴度的病毒培养物和不同来源的呼吸道病毒分别进行灵敏度和特异性分析。结果该法灵敏度较好,可测半数组织培养感染剂量(TCID50/mL)为0.02～0.2的病毒量,特异性达100%,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应。已确诊的nH1N1、Flu B、RSV感染患者的样本用该法均成功地测出。结论建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度和特异性都较高,可检测出多种呼吸道病毒,对临床呼吸道病毒感染的诊断有一定的价值。
- 崔大伟郑书发范剑楼滨余斐秦志梅邹伟华吴英萍陈凌晓陈瑜
- 关键词：呼吸道合胞病毒
- 2009年至2011年新甲型H1N1流感病毒HA基因同源性比较与进化分析被引量：2
- 2011年
- [目的]分析杭州市2009年1月至2011年1月新甲型H1N1流感病毒血凝素（HA）的基因序列,探讨该病毒的遗传变异和分子特性。[方法]应用RT-PCR的方法从临床标本中扩增新甲型H1N1流感病毒HA基因片段并测序。利用DNAMAN和Sequencher4.7软件对HA基因序列进行分析,比较HA基因氨基酸亲缘系数并绘制进化树。[结果]成功地对15例新甲型H1N1病毒的HA基因进行扩增并测序,2009年1月至2011年1月新甲型H1N1流感病毒的HA基因的氨基酸序列与参考株具有高度的同源性,其亲缘系数为98.9%~100%,且HA基因氨基酸序列发生了一定的变异。[结论]2009年至2011年新甲型H1N1流感病毒的基因组HA序列与我国和其他国家的新甲型H1N1流感病毒具有高度的同源性,但HA基因的氨基酸序列发生了变异,可能与患者的病情有关,因此需密切关注新甲型H1N1流感病毒的流行情况。
- 邹伟华崔大伟吴英萍郑书发何丽许世佳余斐秦志梅李游江陈凌晓陈瑜
- 关键词：血凝素神经氨酸酶
- 浙江地区2012年麻疹病毒流行株基因特征研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨浙江地区2012年3～9月麻疹病毒(MV)的基因特征。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测麻疹患者的咽拭子标本,对部分PCR扩增阳性的片段进行基因测序并绘制系统进化树进行同源性分析。结果 88例麻疹患者咽拭子标本中经RT-PCR检测阳性76例,阴性12例;随机选择13例阳性标本进行基因测序,结果显示均为H1a亚型;系统进化树分析结果表明,13株均为H1a基因亚型,与该型参考株AF045205、AF045206核苷酸同源性为98.0%～99.0%。结论 H1a基因型是浙江地区2012年MV流行的优势亚型,无输入性的其他亚型出现。
- 秦志梅崔大伟谢国良杨先知郑书发余斐陈瑜
- 关键词：麻疹病毒基因流行株同源性分析
- 2009～2012年杭州地区甲型H1N1流感病毒HA与NA基因的进化分析被引量：5
- 2013年
- 目的研究杭州地区2009年至2012年甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)的基因进化特征,分析该病毒的遗传变异和抗原的分子水平转变。方法用RT-PCR分别扩增甲型H1N1流感病毒HA基因和NA基因片段并进行测序,用DNAMAN和MEGA 4.0生物信息学软件对HA和NA基因序列进行进化分析。结果建立的RT-PCR可成功检测HA(C)、HA(D)和NA基因,遗传进化分析结果表明,杭州地区甲型H1N1流感病毒的HA与NA氨基酸序列的亲缘系数与WHO推荐的病毒株及国内代表株的同源性均为98.9%～100%;三维构象结果表明,HA编码的蛋白质有5个位点发生改变,而NA编码的蛋白质仅发生2个位点改变。结论 2009年至2011年杭州地区甲型H1N1流感病毒HA和NA基因序列与世界范围内流行的病毒参考株具有高度同源性,但HA与NA蛋白质表位存在某些氨基酸位点的改变。
- 吴英萍崔大伟秦志梅谢国良杨先知郑书发余斐范剑陈瑜
- 关键词：甲型H1N1流感病毒血凝素神经氨酸酶
