袁林
- 作品数：101 被引量：85H指数：4
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的C末端结构域功能及生淀粉结合位点分析被引量：1
- 2020年
- 为确定嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中参与生淀粉结合的结构区域,对Gt-amy的C末端结构域(C-terminal domain,CTD)进行缺失突变,并比较Gt-amy及CTD缺失突变体Gt-amy-T的酶学性质。在与Gt-amy相同的条件下,Gt-amy-T不能结合和降解玉米淀粉,CTD可有效结合玉米淀粉。以可溶性淀粉为底物,Gt-amy-T的kcat值约为Gt-amy的77.9%。CTD的系统进化关系分析显示CTD不是典型的淀粉结合结构域,但是本研究证实CTD属于生淀粉结合结构域,在Gt-amy结合并降解生淀粉中发挥重要作用,并且CTD有利于Gt-amy发挥可溶性淀粉酶活力。此外,本研究将CTD中Tyr残基定点突变为Ala残基,通过比较CTD与突变体的玉米淀粉结合能力以及Gt-amy与Gt-amy W501A/W514A的玉米淀粉结合率和降解率,确定CTD中W501和W514可能是生淀粉结合位点。
- 曾静郭建军涂熠坤袁林
- 定点突变提高极端嗜热α-淀粉酶ApkA的高温活性和热稳定性被引量：4
- 2017年
- 极端嗜热α-淀粉酶具有优良的高温活性和热稳定性,因此在淀粉液化工艺中具有巨大的应用潜力,并且其高温适应性机制研究可以为构建耐高温α-淀粉酶提供理论依据和设计思路。通过分析来源于极端嗜热古生菌Thermococcus kodakarensis KOD1的α-淀粉酶Apk A的氨基酸序列,构建缺失信号肽突变体ApkAds和单点突变体ApkAdsA180K。酶学性质分析表明,与ApkAds相比,突变体ApkAdsA180K的高温活性和热稳定性明显提高。其中ApkAds的最适反应温度为90℃,对应的酶比活力为2 946.75 U/mg;突变体ApkAdsA180K的最适反应温度为100℃,对应的酶比活力为4 501.08 U/mg。ApkAds于90℃的半衰期约为5 h,突变体ApkAdsA180K于90℃的半衰期约为7 h。通过同源模建得到的蛋白质三级结构显示,突变体ApkAdsA180K中氨基酸残基K180与D212间形成离子键。本研究结果表明ApkAdsA180K中K180与D212间离子键有利于其维持其高温活性和热稳定性。
- 曾静郭建军袁林
- 关键词：离子键定点突变热稳定性
- 重组减蛋综合征病毒KnobS干酪乳杆菌的构建与表达被引量：1
- 2016年
- 以干酪乳杆菌为传递载体,以开发食品级安全的减蛋综合征病毒疫苗为目标,构建了一个温度敏感型自杀型质粒系统p ORZP-UKD。将该质粒电转化到干酪乳杆菌L.casei中,经过2次升温处理和5-氟尿嘧啶抗性筛选,挑选阳性克隆,采用PCR和SDS-PAGE方法进行鉴定。KnobS基因整合到干酪乳酸杆菌基因组内,并实现融合蛋白KnobS的分泌表达。表明得到了一株具有无任何选择性标记、携带有KnobS表达盒元件的基因组整合的重组干酪乳酸杆菌KnobSΔupp L.casei,且整合的外源基因能够随着细菌的复制而进行表达,为减蛋综合征病毒免疫保护性抗原KnobS疫苗的进一步研制提供了试验数据。
- 郭建军袁林曾静邱小忠付锦楠
- 关键词：干酪乳杆菌
- 响应面法优化嗜酸乳杆菌协同发酵豆粕的条件研究
- 2023年
- 试验分别利用产α-淀粉酶、蛋白酶、植酸酶以及β-甘露聚糖酶的功能性嗜酸乳杆菌对豆粕进行协同发酵,采用单因素试验研究了菌液接种量、发酵温度、发酵时间、液料比对酸溶蛋白含量的影响。在此基础上经过Box-Behnken设计试验,建立二次回归模型,得到最佳发酵条件为菌液接种量12.3%、发酵时间78.9 h、发酵温度36.8℃、液料比0.9 L/kg。在此条件下发酵豆粕,发酵豆粕的粗蛋白含量比发酵前提高了15.13%,酸溶蛋白含量提高了66.91%,半纤维素含量下降了24.93%,游离氨基酸含量是发酵前的11.62倍,胰蛋白酶抑制剂含量下降了91.68%,脲酶活性下降了95.67%,植酸含量下降了83.87%,发酵豆粕中的活菌数为1.37×10^(10) CFU/g。研究表明,该复合菌株发酵模式能够有效增加豆粕的营养成分,去除抗营养因子,从而提高豆粕的利用率,为发酵豆粕的工业化生产提供参考。
- 王通郭浩聂俊辉岳斯源郭建军曾静袁林
- 关键词：嗜酸乳杆菌豆粕响应面法
- 组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建
- 2020年
- 该研究以高效组成型启动子P10替换pSIP401-gtamyhds中诱导型启动子,构建重组载体pSIP401Z-gtamyhds,并以其为基础框架,分别导入粪肠球菌(Enterococcus faecalis)来源的8种信号肽(s1~s8),采用电转化法将信号肽筛选载体转入具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27,构建组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重组粪肠球菌。以发酵上清液中α-淀粉酶活性为评价指标,对8种信号肽进行筛选,并对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy进行分离纯化和酶学性质研究。结果表明,信号肽s7对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高,发酵上清液中α-淀粉酶活性达到310 U/m L。重组Gt-amy的最适反应pH值为5.0,在pH 4.0~8.0范围内具有较好的稳定性,最适反应温度为80℃,于80℃的半衰期为3 h,在40℃条件下反应3 h,对玉米淀粉的降解率可达55.8%。
- 曾静袁林郭建军魏国汶
- 关键词：粪肠球菌信号肽
- 共表达分子伴侣蛋白提高III型普鲁兰水解酶在短小芽孢杆菌中的分泌表达及发酵优化
- 2024年
- 本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PUL分泌表达的分子伴侣蛋白及对应的重组短小芽孢杆菌。在此基础上采用单因素实验和响应面法优化重组短小芽孢杆菌的发酵条件。结果表明,共表达分子伴侣蛋白PrsA^(Ba)的重组短小芽孢杆菌的胞外酶活达到98.79 U/mL,提高了0.31倍。该重组短小芽孢杆菌的最佳培养基包括19.65 g/L葡萄糖、21.46 g/L酵母提取物、12.01 g/L MgCl_(2)·6H_(2)O、9.02 g/L脯氨酸、0.01 g/L FeSO4·7H_(2)O、0.01 g/L MnSO4·4H_(2)O、0.001 g/L ZnSO4·7H_(2)O。在发酵温度为35℃、起始发酵pH为7.0的条件下,该重组短小芽孢杆菌于最佳培养基中培养66 h时,其胞外酶活达到192.68 U/mL,提高了1.56倍。本研究通过共表达分子伴侣蛋白和发酵优化实现了TK-PUL在短小芽孢杆菌的高效分泌表达,为TK-PUL的应用提供了基础。
- 曾静郭建军王通袁林
- 关键词：短小芽孢杆菌发酵优化分泌表达
- 生物发酵饲料对仔猪生长的影响被引量：1
- 2023年
- 本试验探究并分析使用嗜酸乳杆菌、酿酒酵母及丁酸梭菌混合菌剂发酵饲料后的营养成分变化,以及发酵饲料对仔猪生长性能、肠道菌群以及血液代谢物的影响。结果表明:经生物发酵后的饲料中小肽含量上升78.89%(P<0.05),维生素A提高了4.54 mg/kg(P<0.05);相比于常规饲料,使用发酵饲料喂养仔猪后仔猪平均增重增加了2.62 kg(P<0.05),料肉比降低0.29(P<0.05),腹泻率降低89.91%(P<0.05),仔猪生长性能和健康状态得到改善;经生物发酵饲料喂养后仔猪的肠道菌群中厚壁菌门占比上升,变形菌门占比下降,肠道健康得到改善;对仔猪血液代谢产物进一步分析发现,两组仔猪血液差异代谢产物共71种,其中下调代谢产物10种,上调代谢产物61种。对差异代谢物进行通路分析,差异代谢物主要富集通路为色氨酸代谢、初级胆汁酸合成、苯丙氨酸代谢以及氨基酸合成通路。综上,生物发酵饲料能够调节仔猪肠道菌群和消化吸收功能,有效提高仔猪生长性能和改善仔猪健康状况。
- 聂俊辉王通岳斯源袁林曾静郭建军
- 关键词：发酵饲料仔猪嗜酸乳杆菌肠道菌群
- 一种绿色无公害育肥猪预混料及制备方法和应用
- 本发明公开了一种绿色无公害育肥猪预混料，由下述配比的原料组成：嗜酸乳酸菌大于0.5万亿cfu；粪肠球菌大于0.3万亿cfu；丁酸梭菌大于0.15万亿cfu；食盐4.8～6.2kg；磷酸氢钙6.2～10.5kg；碳酸钙8....
- 袁林郭建军曾静杨罡郭浩王林庚
- 文献传递
- 一种多角体蛋白包裹型植酸酶
- 本发明公开了一种多角体蛋白包裹型植酸酶，利用杆状病毒表达系统，同时将质型多角体蛋白基因和植酸酶基因分别构建到pFastBac Dual载体的PH与p10启动子下，并在植酸酶基因前引入SP引导基因，通过与病毒骨架重组，获得...
- 袁林郭建军曾静靳亮邱小忠杨一兵魏国汶
- 文献传递
- 金黄色葡萄菌5型荚膜多糖偶联鞭毛蛋白疫苗对小鼠乳腺炎模型的保护作用被引量：3
- 2013年
- [目的]金黄色葡萄菌5型荚膜多糖(CP5)分别与鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白Flagellin、牛血清白蛋白(BSA)进行了偶联,并在小鼠模型上比较了这2种偶联疫苗所引起的体液免疫和粘膜免疫反应。[方法]以鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白为载体蛋白,与CP5进行化学偶联,并在小鼠乳腺部位免疫,然后通过检测小鼠乳汁中的抗体分析其对小鼠的免疫保护作用。[结果]乳腺局部免疫后flagellin-CP5组在乳腺部位引起了sIgA为代表的粘膜免疫反应和IgG为主的体液免疫反应。CP5和鞭毛蛋白的偶联物能够诱导更高的体液免疫以及粘膜免疫反应。[结论]鞭毛蛋白具有较强的免疫佐剂作用。
- 袁林王贤卓郭建军
- 关键词：鞭毛蛋白粘膜免疫
