赵君
- 作品数：32 被引量：94H指数：6
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 二硫键稳定的抗肝癌单链抗体-PE38融合基因的构建、表达与功能检测被引量：13
- 2003年
- 目的:制备高特异性有杀伤活性的新型抗肝癌免疫毒素。方法:应用适当的酶切位点,将二硫键稳定的人源化抗肝癌单链抗体(dsFv)基因及PE38基因克隆入原核表达载体pTIG中。诱导表达上清经Ni-NTA亲和层析柱纯化,用MTT比色法检测纯化表达产物的细胞毒活性。结果:目的融合蛋白在大肠杆菌中得到可溶性表达,表达产物的M,为66 000,表达 量占菌体总可溶性蛋白量的21％。细胞毒实验表明,抗肝癌免疫毒素对肝癌细胞具有杀伤作用,而对正常肝细胞无损伤。结论:抗肝癌dsFv与PE38融合基因的成功构建及表达,为其作为抗肝癌药物的进一步研究打下了基础。
- 赵君孙志伟刘彦仿俞炜源
- 关键词：肝癌免疫毒素单链抗体
- 肾综合征出血热诱导热休克反应及其与病毒感染关系和意义的研究进展
- 肾综合征出血热(HFRS)是由汉坦病毒(Hantavirus,HTV)感染引起的一类重要的流行性传染病,我国除青海、新疆外,其他各地均有流行,年发病10万人左右.HTV含有大片段L、中片段M和小片段S三段反义的单链RNA...
- 杨守京刘彦仿叶玲赵荣孙玉静赵君
- 文献传递
- 抗肝癌hdsFv融合RC-RNase重组免疫毒素的表达、纯化及活性测定
- 2006年
- 目的制备有临床应用前景的特异性高、稳定性强的新型抗肝癌重组免疫毒素。方法利用IPTG诱导抗肝癌hdsFv-RC-RNase重组免疫毒素在大肠杆菌中表达。表达产物经Ni-NTA亲合层析法纯化并复性,应用免疫细胞化学和MTT的方法分别检测其对人肝癌细胞的特异性结合和杀伤活性。结果重组免疫毒素以可溶性形式在大肠杆菌中获得表达。免疫细胞化学和细胞毒实验表明其能够特异性地结合并杀伤肝癌细胞,并且能够保持较强的稳定性。结论我们抗肝癌hdsFv-RC-RNase重组免疫毒素的成功制备,为其进一步的临床应用研究奠定了一定的实验基础。
- 付勇苏雪梅刘彦仿杨守京赵君邹赛英
- 关键词：肝细胞癌免疫毒素
- 牛蛙核糖核酸酶在大肠杆菌中的高效表达及其初步纯化
- 2004年
- 目的:利用大肠杆菌系统表达重组RC蛳RNase融合蛋白,并对其表达产物进行初步纯化。方法:以PCR方法扩增出RC蛳RNase基因,插入到融合蛋白原核表达载体PET32a中,构建重组表达载体PET蛳RC蛳RNase,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)plyS,利用异丙基硫代蛳β蛳D蛳半乳糖苷(IPTG)诱导表达。工程菌经超声碎菌,离心后,采用Ni亲合层析法在变性条件下进行初步纯化。结果:经IPTG诱导后,SDS蛳PAGE和免疫印迹分析显示,工程菌在相对分子质量为3.1×104处出现一条新生蛋白带,目的蛋白占菌体总蛋白的34%,主要以包涵体形式存在。所得包涵体经纯化,纯度可达90%以上。结论:重组融合蛋白RC蛳RNase在大肠杆菌中获得成功表达,纯化效果令人满意,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了良好的基础。
- 付勇刘彦仿杨守京赵君李锴男
- 关键词：核糖核酸酶融合蛋白纯化
- 人源化抗肝癌单链抗体与牛蛙核糖核酸酶融合基因的构建及表达被引量：3
- 2003年
- 利用RT-PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆牛蛙核糖核酸酶(RC-RNase)基因并进行序列测定;将人源化抗肝癌单链抗体scFv基因与RC-RNase基因相连接,制备scFv-RC-RNase融合基因表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导进行表达。以SDS-PAGE和免疫印迹法对表达产物进行分析鉴定。序列分析表明,扩增出的RC-RNase基因片断大小约为405bp。经SDS-PAGE和免疫印迹分析显示,scFv-RC-RNase融合基因表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达产物出现相对分子质量约为38000的一条新生蛋白带,与预期结果相符。融合蛋白表达量占菌体总蛋白量的18.5%,主要以包涵体形式存在。表明成功地构建了抗肝癌scFv-RC-RNase融合基因,并在大肠杆菌中获得有效表达,为进一步进行肝癌的导向治疗研究奠定了基础。
- 付勇刘彦仿苏勤赵君张静梅
- 关键词：肝细胞癌单链免疫毒素大肠杆菌基因表达
- DNA疫苗对小鼠HCV-C皮下移植瘤的防治被引量：4
- 2003年
- 目的:从病理组织学方面验证DNA疫苗对小鼠HCV-C皮下移植瘤的预防及治疗作用,为将来的临床应用提供动物实验依据.方法:利用脂质体转染技术将pcDNAHCV-C质粒转染SP2/0细胞并将稳定表达HCVC抗原的SP2/0细胞皮下接种于Balb/c小鼠,成瘤后取小鼠瘤组织,用病理组织学方法验证DNA疫苗对HCV-C皮下移植瘤的预防及治疗作用.结果:肿瘤组织中以T淋巴细胞浸润为主;HCV-C抗原表达主要在SP2/0细胞的细胞质和胞膜上,少数位于胞核中;对照组HCV-C抗原表达明显强于实验组.结论:HCV-CDNA疫苗对HCV的感染有预防和治疗作用.
- 孙利周永兴郝春秋冯志华赵君胡沛臻付勇马福成常吉庆王九平聂青和
- 关键词：DNA疫苗小鼠丙型肝炎
- 肝癌靶向性T细胞活化融合基因scFv-CD_(3ζ)的构建与表达
- 2004年
- 目的 :构建抗肝癌单链抗体融合CD3 ζ真核表达载体。 方法 :应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcDNA3 ,在 5′端及 3′端分别引入相应酶切位点 ;用RT PCR法从正常外周血人T细胞扩增出CD3 ζ的胞内区、跨膜区基因 ,然后将其克隆于scFv的下游 ,并在5′端及 3′端引入相应的酶切位点。以脂质体转染法将pcDNA3 scFv CD3 ζ转入T细胞 ,采用免疫细胞化学的方法 ,利用抗CD3 ζ的单克隆抗体检测转染前后T细胞中CD3 ζ的表达。 结果 :二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv的cDNA片段为 73 5bp ,与已知的序列相符 ;CD3 ζ的胞内区、跨膜区的cDNA片段为 2 94bp ,与GeneBank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。转染前后T细胞中CD3 ζ染色强度显著增强。 结论 :完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及CD3 ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcDNA3 scFv CD3 ζ的构建 。
- 李锴男刘彦仿孙妍琳付勇赵君高娟杨守京
- 关键词：T淋巴细胞
- 埃兹蛋白在肝细胞癌及其转移灶中的表达及意义被引量：8
- 2006年
- 目的:了解人埃兹蛋白(ezrin)在正常肝、肝硬化组织、肝细胞癌(HCC)及其转移灶中的表达情况,并探讨其表达与肝细胞癌侵袭转移的关系。方法:用两步免疫组化染色法检测6例正常肝,25例肝细胞癌及14例转移灶中埃兹蛋白的表达;用Westernblot检测上述组织及12例肝硬化组织中埃兹蛋白的表达。结果:在正常肝、肝细胞癌及转移灶中,埃兹蛋白的强阳性表达率分别为0%、28%、57.1%,各组织中埃兹蛋白的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。Westernblot的结果表明,转移灶中埃兹蛋白平均表达量是正常肝中的12.6倍,硬化肝中的4.7倍,肝细胞癌中的1.8倍。结论:埃兹蛋白的高表达与肝细胞癌的侵袭转移关系密切,可能是影响肝细胞癌患者预后及癌细胞转移的一个重要因素。
- 高飞赵君窦科峰罗丁陈勇
- 关键词：肝细胞癌埃兹蛋白肿瘤转移
- 抗肝癌hdsFv融合hEDN重组免疫毒素对体外培养的人肝癌细胞的杀伤作用
- 2005年
- 目的:探讨重组免疫毒素hdsFv-hEDN在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化,观察其体外杀伤作用。方法:利用IPTG诱导hdsFv-hEDN免疫毒素在大肠杆菌中的表达。诱导转化菌经超声碎菌、离心、N i-NTA Agarose亲合层析等步骤纯化,并通过SDS-PAGE和W estern-b lot进行分析及检测。采用MTT比色法观察其对人肝癌细胞的杀伤作用。结果:IPTG诱导后,hdsFv-hEDN在大肠杆菌中获得了可溶性表达,表达量为8%。表达产物纯化后,纯度达到基本均一。MTT结果表明,其对人肝癌细胞具有一定的杀伤作用。结论:本研究实现了hdsFv-hEDN重组免疫毒素在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化,获得了具有一定杀伤作用的抗肝癌重组免疫毒素。
- 付勇苏雪梅刘彦仿杨守京赵君李锴男邹赛英
- 关键词：免疫毒素单链抗体
- 抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用
- 2009年
- 目的:研究抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,评价其作用为导向治疗药物的临床应用价值。方法:将体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞接种于裸鼠皮下,建立荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为hdsFv-hEDN治疗组和对照组,分别给予尾静脉注射hdsFv-hEDN和生理盐水,1次/日,共2周。比较各组裸鼠皮下移植瘤生长速度、肿瘤体积和重量,并计算肿瘤的抑制率。取各组裸鼠肿瘤组织,心,肺,肝,肾组织HE染色,光学显微镜下观察。结果:抗肝癌hdsFv-hEDN治疗组裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用显著,肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积从42.62±0.57mm3增加到74.28±2.59mm3、瘤重为155.82±14.43mg,而对照组肿瘤体积从41.94±0.91mm3增加到127.42±4.81mm3、瘤重为283.28±15.21mg,两组比较差异非常显著。肿瘤体积抑瘤率和瘤重抑瘤率分别达到41.59±0.02%和45.51±0.09%。组织学观察抗肝癌hdsFv-hEDN组肿瘤组织出现大片坏死,凋亡明显增加,心、肝、肺、肾等重要器官未见明显异常。结论:抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长具有良好的抑制作用。
- 付勇苏雪梅刘彦仿赵君杨守京邹赛英
- 关键词：核糖核酸酶免疫毒素移植瘤
