车婧
- 作品数：8 被引量：35H指数：4
- 供职机构：山东省医药生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人成骨蛋白-1的纯化及其生物学活性研究被引量：1
- 2006年
- 目的 获得高纯度的重组人成骨蛋白-1（rhOP-1），探讨大肠杆菌表达rhOP-1的生物学活性。方法 表达rhOP-1工程菌经发酵后，裂菌、提取包涵体，层析法纯化蛋白并逐步降低尿素浓度透析复性。采用改良MTT法检测rhOP-1对NIH3T3细胞增殖和对硝基苯酚法（PNPP）检测rhOP-1对细胞碱性磷酸酶（ALP）活性的影响，同时在体内通过小鼠肌袋埋植实验测定rhOP-1活性。结果 经纯化的rhOP-1纯度可达98％。体外rhOP-1浓度在0．06～6μg／ml可明显促进细胞生长和ALP活性；体内rhOP-1埋植剂植入小鼠肌间隙2周后，可明显提高体内钙含量，且成骨趋势明显。结论 原核表达的rhOP-1具有良好的生物学活性。
- 王国栋王世立韩金祥孙杰车婧赵甜娜李俊玲
- 关键词：纯化细胞增殖碱性磷酸酶生物学活性
- 重组人成骨蛋白-1在大肠杆菌中的高效表达及复性
- 近年来，骨形态发生蛋白(Bonemophorgeneticprotein，BMP)作为一种有价值的生长因子越来越受到人们的重视。OP-1又名BMP-7，便是其中备受关注的成员。OP-1是一种骨诱导形成素，在胚胎的骨骼发育...
- 车婧
- 关键词：纯化蛋白质复性大肠杆菌
- 文献传递
- 蛋白质复性的分子排阻色谱法的研究进展被引量：4
- 2004年
- 包涵体蛋白质复性是生物工程下游技术中的一个重要问题。利用传统的方法复性复性率低和步骤繁琐 ,无法用于大规模生产。最近出现的层析复性方法 ,具有较强的优势。其原理是将层析技术应用于蛋白质复性和纯化 ,使变性蛋白质在层析柱上折叠为正确的空间构象 ,在洗脱的同时实现部分纯化。在层析技术中分子排阻色谱法由于操作简便 ,复性效率高 ,成为研究的重点。文章就分子排阻色谱法的研究情况作一综述。
- 车婧韩金祥
- 关键词：蛋白质复性包涵体
- 重组人成骨蛋白-1在大肠杆菌中的高效表达及复性被引量：9
- 2005年
- 目的研究重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的发酵、纯化和复性。方法将构建好的重组质粒pBV221转化EscherichiacoliBL21,迅速升温至42℃诱导rhOP-1以包涵体的形式高效表达。裂菌后利用6mol·L-1尿素溶解目的蛋白,经SP-FastFlow离子交换色谱纯化后,利用cysteine/cystine对单体rhOP-1透析复性。结果rhOP-1的表达量占菌体总蛋白质量的33%,纯化后纯度可达98%,活性得到有效恢复。结论建立了rhOP-1发酵、纯化与复性的方法,获得高表达、高纯度、有活性的rhOP-1。
- 车婧韩金祥王世立梁浩
- 关键词：纯化复性
- 表达重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的发酵及表达产物的纯化被引量：5
- 2006年
- 目的:研究表达重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的发酵和表达产物的纯化工艺。方法:利用16L发酵罐发酵培养工程菌,设定了溶氧、搅拌速度、诱导时机、补料和培养基pH值等发酵条件;通过包涵体洗涤、离子交换层析法纯化目的蛋白。结果:工程菌目的蛋白质表达量占菌体总蛋白质的30%以上,纯化后目的蛋白的纯度可达98%。结论:建立了大肠杆菌高效表达人骨形态发生蛋白-7的发酵及纯化工艺。
- 王国栋王世立韩金祥张翠张更林车婧
- 关键词：发酵纯化大肠杆菌
- 促进包涵体蛋白复性的几种有效添加剂被引量：19
- 2004年
- 利用大肠杆菌高水平表达重组蛋白时,由于缺乏翻译后加工过程,目的蛋白通常以无活性的包涵体的形式产生。在包涵体蛋白复性过程中,溶解的蛋白质容易相互聚集生成沉淀,成为复性技术中最难以克服的问题。目前通常的做法是在复性过程中加入适当的添加剂,使其在最佳反应条件下促进蛋白质重折叠为活性形式。本文旨在介绍几种有效的促进复性的添加剂及其最佳使用条件,为研究者提供一定的借鉴。
- 车婧韩金祥王世立
- 关键词：包涵体蛋白质复性添加剂
- 重组人成骨蛋白－1的制剂制备方法
- 本发明公开了一种重组人成骨蛋白-1的制剂制备方法，是通过层析获得95%以上纯度的rhOP-1单体蛋白，在2M-6M尿素或1M-4M盐酸胍缓冲液中透析进行复性，复性缓冲液的pH值是8.0-10，复性温度室温或者4度，复性时...
- 王世立韩金祥李俊玲车婧
- 文献传递
- 重组人成骨蛋白－1的复性及其制剂制备方法
- 本发明公开了一种重组人成骨蛋白－1的复性及其制剂制备方法，是通过层析获得95％以上纯度的rhOP－1单体蛋白，在2M－6M尿素或1M－4M盐酸胍缓冲液中透析进行复性，复性缓冲液的pH值是8.0－10，复性温度室温或者4度...
- 王世立韩金祥李俊玲车婧
- 文献传递
