逯莉
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
- 供职机构：郑州大学医学院寄生虫学教研室更多>>
- 发文基金：河南省高校杰出科研人才创新工程基金国家自然科学基金吉林省科技厅基础研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 纳氏旋毛虫肌幼虫细胞的体外培养及多重PCR鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的研究纳氏旋毛虫（Trichinella nelsoni，T7）肌幼虫细胞的分离和体外培养方法。方法消化法分离纳氏旋毛虫肌幼虫，用研磨法分离其细胞，倒置相差显微镜下观察分离细胞的形态并测量细胞核与细胞直径。用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液进行细胞培养，并通过多重PCR对培养的细胞进行鉴定。结果纳氏旋毛虫肌幼虫细胞平均直径为11．72±1．13μm，细胞核平均直径为5．76±0．68μm。细胞在接种于培养液后24～72h开始贴壁生长，培养8～12d后单层细胞形成，贴壁细胞多为发亮、饱满、圆形细胞。对培养14d的细胞进行多重PCR分析，结果与纳氏旋毛虫肌幼虫具有相同的DNA条带。结论纳氏旋毛虫肌幼虫细胞在含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中至少可存活20d。
- 李宛青崔晶赵桂花牛洪涛侯小君逯莉张西臣王中全
- 关键词：肌幼虫细胞培养多重PCR
- 旋毛虫抗原基因Ts21的原核表达与重组蛋白鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的原核表达旋毛虫相对分子质量(Mr)21000抗原基因(Ts21)并对重组蛋白进行纯化和抗原性鉴定。方法将旋毛虫抗原基因Ts21亚克隆入原核表达载体pMAL-c2X,构建重组表达质粒pMAL-c2X-Ts21,经酶切鉴定正确后转化大肠埃希菌TB1,以异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。亲和层析法纯化表达产物。应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定重组蛋白的抗原性。将重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清,ELISA检测抗体滴度,免疫荧光检测(IFA)确定Ts21蛋白在肌幼虫体内的分布。结果SDS-PAGE结果显示,表达产物为Mr63500的重组融合蛋白,IPTG诱导4h后表达量最大,薄层凝胶光密度扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18.2%。Western blotting结果显示该重组蛋白可被旋毛虫、纳氏旋毛虫感染小鼠血清及旋毛虫病患者血清识别,但不能被乡土旋毛虫、布氏旋毛虫及伪旋毛虫感染小鼠血清识别;与钩虫病、囊尾蚴病、日本血吸虫病患者血清无交叉反应,但与并殖吸虫病、华支睾吸虫病及棘球蚴病患者血清有交叉反应。重组蛋白免疫小鼠可产生高滴度的血清抗体,IFA显示Ts21蛋白主要分布于肌幼虫体壁。结论成功制备了旋毛虫Ts21基因的重组蛋白,该蛋白具有较好的抗原性。
- 王中全逯莉崔晶王来王睿
- 关键词：旋毛虫原核表达重组蛋白抗原性
