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金洪涛: 作品数：72 被引量：102H指数：6; 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金吉林省应用基础研究项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>

合作作者

新型抗病毒蛋白CVN的构建及原核表达被引量：3: 2007年; 目的构建重组抗病毒蛋白CVN原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法采用全基因合成的方法合成目的基因CVN(Cyanovirin-N),将该片断插入到pBluescriptⅡSK(+)载体中后,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET-CVN表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。用SDS-PAGE,Western-blot等方法分析鉴定表达产物。结果合成的目的基因全长303bp,重组载体pET-CVN经PCR和双酶切鉴定,证实构建成功。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物相对分子量为17 000左右,与理论预期值完全相符。凝胶成像分析表明最高表达量可占菌体总蛋白的46.4%。SDS-PAGE,West-ern-blot分析表明目的蛋白得到了很好的表达。结论成功构建了pET-CVN原核表达载体,并得到了大量的表达,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。; 刘玉生李昌金宁一于芳金洪涛; 关键词：抗病毒蛋白原核表达 CYANOVIRIN-N

单链抗体标联SEA的抗HIV基因工程靶向药物构建与活性研究: 如何根除 HIV 感染者或 AIDS 患者体内的病毒细胞储存池,是当前限制 AIDS 治疗的最大瓶颈问题。本研究立足于靶向杀伤 HIV 感染细胞的目的,通过合成可作为导向的抗 HIV-1gp120(gp41)单链抗体基因...; 李昌金宁一金洪涛王宏刘玉生于芳佟敬山胡宁宁; 文献传递

SARS病毒N蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定: 将编码SARS病毒核衣壳蛋白(N蛋白)全基因进行人工合成,克隆到pET-28a(+)和pETcks载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达.利用SARS患者恢复期已知的SARS抗体阳性血清,鉴定重组蛋白.SDS...; 王瑞琳金宁一赵博金洪涛王宏郑敏; 关键词：严重急性呼吸道综合症 SARS 核衣壳蛋白大肠杆菌免疫应答重组疫苗; 文献传递

军用动物福利保障措施探讨: 2011年; 军用动物是一个特殊的动物群体,是世界各国军事装备的重要组成部分。本文分析和借鉴了《美军军犬计划》等文献中对动物福利保障的措施,依据军用动物在实验、训练、执行演习和作战任务的特殊性,探讨了保障其福利的办法。; 侯延光金洪涛杨松涛钱军韩铁夏志平张勇刘林娜孙玉成岳玉环; 关键词：福利

DNA疫苗研究进展: DNA疫苗研究起始于17年前,1990年研究人员第一次发现DNA质粒注射入动物体内之后能够启动质粒自身编码基因的表达并诱导适当的免疫反应。从那以后,科学家们以极大的热情投入到此项技术的研发工作中,期望创造新一代的无任何毒...; 金洪涛金宁一; 文献传递

链重叠PCR构建抗HIV免疫毒素及其表达与鉴定被引量：3: 2007年; 目的提高抗HIV免疫毒素DT-ScFv原核表达的可溶性与生物活性。方法利用链重叠PCR融合的方法,构建了免疫毒素DT-ScFv,二者之间添加了connector序列,免疫毒素基因PCR连接测序以后,将其克隆入pET28a质粒,在BL21(DE3)工程菌中诱导表达,通过免疫印迹鉴定表达的重组蛋白,并通过与表达HIV-1gp120的靶细胞的间接免疫荧光实验,验证免疫毒素的细胞识别结合能力。结果本研究成功地构建了免疫毒素DT-ScFv,经原核表达证明目的蛋白以部分可溶的形式存在于表达菌中,添加的connector序列有助于DT-ScFv在细胞中获得正确折叠,重组免疫毒素能与表达gp120的细胞发生特异性的识别结合。结论利用链重叠PCR融合的方法,添加connector序列,有助于提高免疫毒素表达的可溶性与生物活性。本研究对抗HIV免疫毒素的活性研究与应用研究具有重要的意义。; 金洪涛金宁一李臻李昌付延军王宏; 关键词：免疫毒素原核表达

流感复合多表位疫苗的设计及小鼠免疫研究: 鉴于目前出现了多种亚型禽流感病毒共存的局面,研究多价流感疫苗具有重要意义.根据各表位的免疫学特性,结合分子生物学信息软件的模拟功能,以H3、H9亚型流感病毒的HA抗原表位、流感病毒的其他主要抗原(NP、NA、M)表位的基...; 贾雷立李霄马明潇金扩世金宁一鲁会军金洪涛王瑞琳田明尧陈义峰郑敏李昌; 关键词：疫苗禽流感病毒抗原表位; 文献传递

日本脑炎病毒囊膜蛋白的基因原核表达及抗原性分析被引量：1: 2010年; 参照GenBank中的日本脑炎病毒序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR法扩增E基因得到cDNA,克隆至pMD-18T载体,经测序证实后亚克隆至原核表达载体pET-28a中,转化入BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果表明,成功构建了重组质粒pET-28a/JEV E,目的蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot检测表明,表达产物与兔抗JEV多克隆抗体呈阳性反应,在ELISA试验中,用表达出的E蛋白包被,能够很明显地区分出猪日本脑炎阴性、阳性血清。; 张宁金洪涛夏志平张瑞岩刘雯李勇薛慧亮李丹丁壮; 关键词：日本脑炎病毒 E蛋白原核表达抗原性

抗HIV-1 gp41单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控表达及活性检测被引量：1: 2004年; 目的　获得抗HIV 1gp4 1单链抗体与葡萄球菌外毒素A融合表达的重组导向毒素蛋白。方法　人工合成能广泛识别HIV 1gp4 1的单链抗体 (ScFv4 1)基因和金黄色葡萄球菌外毒素A(SEA)基因 ,将SEA基因第 2 2 7位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT ,并对两基因进行密码子优化。以大肠杆菌温控型表达质粒pBV2 2 0为载体 ,分别构建单表达ScFv4 1的质粒pBV 4 1和SEA与ScFv4 1融合表达的质粒pBV SL4 1,转化大肠杆菌感受态细胞 ,通过提高温度诱导表达 ,表达产物经分子筛层析折叠复性后 ,检测单链抗体结合活性及重组导向毒素介导的细胞毒淋巴细胞 (CTL)杀伤活性。结果　表达质粒pBV 4 1和pBV SL4 1分别在E .coliBL2 1(DE3)plys中 4 4℃诱导 6h、4 2℃诱导 7h得到较高表达 ,经SDS PAGE、薄层扫描分析表明 ,目的蛋白分别占菌体总蛋白的14 .35 9%和 2 3.4 82 % ,目的蛋白经复性后可与HIV 1抗原条发生良好的结合反应 ,并且SL4 1可激活外周血淋巴细胞 (PBMC)并介导其杀伤稳定表达HIV 1gp16 0蛋白的靶细胞。结论　成功得到ScFv4 1与SEA融合表达蛋白SL4 1,为研制抗HIV 1重组导向毒素奠定基础。; 王宏金宁一徐一鸣金洪涛张立树江文正; 关键词：活性检测淋巴细胞