陈凌晓
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 双重荧光定量RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用被引量：3
- 2012年
- 目的建立检测肠道病毒(EV)、B1型柯萨奇病毒(CVB1)的双重荧光定量RT-PCR法。方法用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,优化双重荧光定量RT-PCR反应体系,建立标准曲线并评价该法的灵敏度、特异性和重复性,用该法检测150份病毒性心肌炎患儿治疗前肛拭子和29份治疗后粪便标本,并与文献提供的PCR法进行对比。结果该法对EV、CVB1型肠道病毒检测具有较高特异性,检出限均为2×10-2TCID50/mL;具有较好的重复性,CV均<2.3%;标准曲线的相关系数(r2)分别为0.999和0.997,扩增效率(%)分别为98.809和96.564;179份临床标本用该法检测95份为EV病毒,其中59份为CVB1病毒,与文献提供的PCR法结果符合率为98.88%(P均>0.05)。结论建立的双重荧光定量RT-PCR法可同时检测并区分EV和CVB1型病毒,适用于病毒性心肌炎临床标本的检测。
- 葛霞琴崔大伟谢国良陈理华王祥郑书发余斐秦志梅范剑陈凌晓王帅毛佳燕陈瑜
- 关键词：肠道病毒
- 杭州地区2009-2010年急性腹泻患者中杯状病毒的检测和分型被引量：6
- 2011年
- 目的了解2009--2010年杭州地区急性腹泻患者中杯状病毒基因型别和分子流行病学特征。方法收集2009--2010年杭州地区920例急性腹泻患者的粪便标本和流行病学资料，用多重PCR方法进行杯状病毒检测，测定部分标本的阳性扩增片段基因序列，并对序列进行系统进化分析。结果急性腹泻患者杯状病毒检出率为21．8％（201／920），其中诺如病毒（Nv）GI型25例、GⅡ型170例、札如病毒（SAV）11例，4例为NVI型和Ⅱ型混合感染、1例为NVⅡ型和SAV混合感染。NV基因型别包括：GI-1（3株）、GI-2（1株）、GⅡ-4／2006b变异株（7株）、GⅡ-2（1株）、GⅡ-7（1株）和GⅡ-4／2008变异株（2株）；SAV基凶型别包括：GI-2（5株）、GI-1（4株）和GⅡ-1（1株）。杯状病毒的流行在不同季节、年龄组人群均有发病。结论杯状病毒是2009—2010年引起杭州地区急性腹泻的主要病原之一，其病原具有病毒多样性和基因型别多样性，NVGⅡ-4／2006b变异株或类似株可能是2009--2010年杭州地区流行的优势株。
- 诸葛小玲崔大伟吴英萍郑书发靳淼段招军余斐许世佳陈凌晓陈瑜
- 关键词：杯状病毒诺如病毒札如病毒基因型别
- 五重荧光定量RT-PCR法检测呼吸道病毒被引量：14
- 2011年
- 目的建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A(Flu A)、流感病毒B(Flu B)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及新甲型H1N1流感病毒(nH1N1)的方法。方法以人细胞RNA酶P基因为内参,用Primer Express 3.0设计PCR引物和探针。用一系列不同滴度的病毒培养物和不同来源的呼吸道病毒分别进行灵敏度和特异性分析。结果该法灵敏度较好,可测半数组织培养感染剂量(TCID50/mL)为0.02～0.2的病毒量,特异性达100%,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应。已确诊的nH1N1、Flu B、RSV感染患者的样本用该法均成功地测出。结论建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度和特异性都较高,可检测出多种呼吸道病毒,对临床呼吸道病毒感染的诊断有一定的价值。
- 崔大伟郑书发范剑楼滨余斐秦志梅邹伟华吴英萍陈凌晓陈瑜
- 关键词：呼吸道合胞病毒
- 2009年至2011年新甲型H1N1流感病毒HA基因同源性比较与进化分析被引量：2
- 2011年
- [目的]分析杭州市2009年1月至2011年1月新甲型H1N1流感病毒血凝素（HA）的基因序列,探讨该病毒的遗传变异和分子特性。[方法]应用RT-PCR的方法从临床标本中扩增新甲型H1N1流感病毒HA基因片段并测序。利用DNAMAN和Sequencher4.7软件对HA基因序列进行分析,比较HA基因氨基酸亲缘系数并绘制进化树。[结果]成功地对15例新甲型H1N1病毒的HA基因进行扩增并测序,2009年1月至2011年1月新甲型H1N1流感病毒的HA基因的氨基酸序列与参考株具有高度的同源性,其亲缘系数为98.9%~100%,且HA基因氨基酸序列发生了一定的变异。[结论]2009年至2011年新甲型H1N1流感病毒的基因组HA序列与我国和其他国家的新甲型H1N1流感病毒具有高度的同源性,但HA基因的氨基酸序列发生了变异,可能与患者的病情有关,因此需密切关注新甲型H1N1流感病毒的流行情况。
- 邹伟华崔大伟吴英萍郑书发何丽许世佳余斐秦志梅李游江陈凌晓陈瑜
- 关键词：血凝素神经氨酸酶
