陈实平
- 作品数：16 被引量：110H指数：8
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部临床学科重点项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 磁珠双阳性分选法在阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34^+CD59^+细胞体外扩增的应用被引量：4
- 2003年
- 应用磁珠双阳性分选法在体外扩增阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)患者的CD34+ CD5 9+ 细胞 ,为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植 (ABMT)或自体外周血干细胞移植 (APBSCT)奠定基础。流式细胞术分选虽然经常用于细胞纯化 ,但难于满足大规模临床细胞分选的需要。本研究利用免疫磁珠系统 ,应用隔夜孵育法去除第一次分选时CD34+ 细胞吸附的磁珠 ,经过两次磁珠双阳性分选 ,从PNH患者骨髓中分离出足够数量的CD34+CD5 9+ 细胞 ,用于体外培养扩增。结果显示 :磁珠双阳性法分选的CD34+ CD5 9+ 细胞与磁珠 流式细胞术二步分选法比较 ,在细胞生存、增殖、扩增及形成造血集落形成单位 (CFU )的能力上均无显著性差异。结论 :磁珠双阳性分选法可能推广应用于其它双阳性或多阳性细胞的分离纯化 ,尤其是造血干
- 肖娟武永吉张之南吕照江陈实平董红燕
- 关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿症骨髓移植干细胞移植
- 抗人SUMO1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的表达重组人SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1)蛋白并制备单克隆抗体。方法构建含人SUMO1基因的重组表达质粒pET32a-HIS-SUMO1,在大肠杆菌中表达重组蛋白HIS-SUMO1;以纯化后的HIS-SUMO1蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,通过ELISA和Western blot方法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定抗体Ig的类型及亚类;取一株筛选细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore抗体纯化试剂盒进行抗体纯化,Western blot方法检测抗体效价。结果表达纯化了重组人HIS-SUMO1蛋白;3株稳定分泌特异性抗人SUMO1的单克隆抗体杂交瘤细胞株被筛选出,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得效价较高的鼠抗人SUMO1单克隆抗体。结论通过表达纯化人SUMO1重组蛋白,制备出高效价鼠抗人SUMO1的单克隆抗体,该抗体可用于蛋白质SUMO化的研究。
- 王林谭锋维陈实平陆丽芳龚燕华彭小忠
- 关键词：SUMO蛋白表达纯化单克隆抗体
- ER和PR在甲状腺乳头状癌的表达及意义被引量：9
- 2010年
- 目的探讨雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)在甲状腺乳头状癌中的表达,以及ER、PR与肿瘤生物学特征的关系。方法取新鲜甲状腺乳头状癌标本69例,结节性甲状腺肿7例,用免疫组织化学方法检测ER、PR的表达。分析受体与肿瘤生物学特征的关系。结果在甲状腺乳头状癌中,ER和PR的表达率分别为52.17%和46.38%,结节性甲状腺肿没有ER和PR表达,ER和PR的表达与患者性别、肿瘤大小以及MACIS评分无关,但是PR与肿瘤浸润甲状腺包膜以及淋巴结转移成正相关(P<0.05),ER与患者年龄成负相关。结论甲状腺乳头状癌中ER、PR的表达高于结节性甲状腺肿,甲状腺乳头状癌中PR的表达反映肿瘤浸润甲状腺包膜和淋巴结转移情况,ER表达随着患者年龄增加而减少。
- 张璐孙永亮陈实平董红燕刘跃武
- 关键词：甲状腺乳头状癌雌激素受体孕激素受体
- OLC1蛋白在非小细胞肺癌患者外周血血浆中的水平及其临床意义被引量：3
- 2014年
- 目的探讨肺癌相关蛋白OLC1在非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血血浆中的水平及其临床意义。方法取5～6周龄BalB／c小鼠，OLC1全长蛋白作为抗原免疫制备OLC1抗体。每只小鼠免疫4次，每间隔2周免疫1次，每次15～30峙抗原蛋白。通过Westernblot方法筛选抗体，制备检测血浆中OLC1蛋白的双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒，并检测281例NSCLC患者和92例健康对照者（性别年龄匹配）血浆中OLC1蛋白的水平。采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）下面积评估OLC1对NSCLC的检测效能。结果共制备了11株特异性好的OLC1单克隆抗体，并成功建立了检测血浆OLC1的ELISA试剂盒，检测范围为1．95～62．50ng／ml。NSCLC患者外周血血浆中位OLC1蛋白水平（124．69ng／m1）显著高于健康对照者（67．07ng／ml，P〈0．001）。OLC1区分NSCLC和健康对照者的ROC曲线下面积为0．69（95％C1为0．62～0．76），当OLC1的cutoff值为67．72ng／ml时，其灵敏度为84．4％，特异度为51．1％。OLC1区分早期（IA期）NSCLC和健康对照者的ROC曲线下面积为0．68（95％C1为0．6～0．77），其灵敏度为77．8％，特异度为54．4％。结论NSCLC患者血浆中OLC1蛋白水平显著升高，可成为辅助临床诊断的候选标志物。
- 杨龙海肖汀谭金晶陈实平高燕宁程书钧刘向阳孙克林
- 关键词：血浆抗体单克隆
- 检测RHBDD1蛋白的ELISA方法及试剂盒
- 本发明涉及检测RHBDD1蛋白的ELISA方法及试剂盒。进一步地，本发明涉及的试剂盒包含针对RHBDD1蛋白215‑315位氨基酸表位的单克隆抗体和多克隆抗体。另一方面，本发明涉及针对RHBDD1蛋白215‑315位氨基...
- 宋伟张梦梦赵宏王琳芳缪时英陈实平苗飞刘文杰
- 文献传递
- 雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性表达被引量：16
- 2001年
- 目的 确定雄激素受体 (AR)和卵泡刺激素受体 (FSHR)在大鼠睾丸中的细胞定位和表达变化。 方法 利用地高辛标记的cRNA探针 ,在成年大鼠睾丸冰冻切片上进行原位杂交 ;同时利用透光显微切割技术将成年大鼠曲细精管分为Ⅱ～Ⅵ、Ⅶ～Ⅷ、Ⅸ～Ⅻ、ⅩⅢ～Ⅰ 4个阶段 ,提取总RNA ,用α 32 P标记的cDNA探针进行斑点杂交 ,观察AR和FSHRmRNA表达的细胞定位和期依赖性变化。利用图像分析系统 ,对阳性杂交信号单位面积平均辉度进行定量分析。 结果 ARmRNA阳性杂交信号位于支持细胞和间质细胞 ,于Ⅶ～Ⅷ期最强 ,Ⅸ～Ⅰ期最弱 ;FSHRmRNA阳性杂交信号位于支持细胞 ,于ⅩⅢ～Ⅰ期最强 ,Ⅶ～Ⅷ期最弱。各阶段之间具有非常显著性差异 (P<0 0 1)。 结论 AR和FSHR期依赖性表达的不同规律提示T(睾酮 )和FSH(卵泡刺激素 )作用于精子发生的不同阶段 ,说明睾酮和卵泡刺激素协同作用调节成年大鼠的精子发生。
- 陈雪雁陈实平金淑敏程凯董红燕陈克铨
- 关键词：雄激素受体卵泡刺激素受体分子杂交成年大鼠睾丸精子发生
- 在甲基纤维素半固体培养基上制备抗人黄体生成素McAb被引量：10
- 1992年
- 自Khler和Milstein创建单克隆抗体(McAb)技术以来.该技术不断发展完善,其应用亦日益广泛。人黄体生成素(hLH)是脑垂体前叶促性腺细胞分泌的一种糖蛋白激素,是调节男女生殖机能的重要物质。目前,国外一些实验室已建成了hLH的单克隆抗体细胞株,并应用于临床诊断,但国内尚未见报道。本研究旨在建立自己的hLH McAb细胞株,以满足国内临床和计划生育科研工作的需要。
- 王保君陈实平陈克铨董红燕程凯宫锋杨育州陈啸梅
- 关键词：甲基纤维素抗体
- FSH与睾酮在Sertoli细胞中的信号转导通路被引量：12
- 2006年
- 卵泡刺激素(Follicilestimulatinghormone,FSH)与睾酮(Testosterone)在哺乳动物精子发生过程中起重要的调控作用。两种激素的作用靶点均为曲细精管的支持细胞(Sertoli细胞)。Sertoli细胞对生精细胞的物理支持及营养供应等是维持正常精子发生所必需的。FSH与睾酮在Sertoli细胞中有各自的胞内信号通路,近年来该领域的研究取得了较大的进展,本文将综述FSH、睾酮激活Sertoli细胞内信号通路的研究进展,讨论不同信号通路对Sertoli细胞代谢、基因表达及精子发生的调控机制。
- 熊伟鹏陈实平韩代书
- 关键词：睾酮SERTOLI细胞精子发生
- 黄体生成素和卵泡刺激素在大鼠垂体前叶的细胞共定位研究被引量：18
- 1997年
- 为探讨卵泡刺激（ＦＳＨ）与黄体生成生素（ＬＨ）分泌及基因表达与调控用抗人ＬＨ－β亚单位单克隆抗体和抗人ＦＳＨ－β亚单位单克隆抗体进行免疫细胞化学定位的研究。通过连续切片免疫酶技术，免疫细胞化学双标记及电镜免疫金双标记技术，在大鼠垂体前叶进行ＦＳＨ和ＬＨ的免疫细胞化学共定位研究。结果表明：存在着棕（ＤＡＢ显色示ＦＳＨ）、蓝（ＣＮ显色示ＬＨ）及棕蓝混合染色细胞；电镜免疫金双标记发现分别被１５ｎｍ金粒（示ＦＳＨ）、１０ｎｍ（示ＬＨ）及被１５ｎｍ、１０ｎｍ金粒同时标记的３种细胞（另文报道）；光镜连续切片染色亦发现ＦＳＨ阳性、ＬＨ阳性及ＦＳＨ－ＬＨ双阳性３种细胞。因此可以确定垂体前叶存在３种促性腺激素（ＧＴＨ）细胞，即ＦＳＨ细胞（只含ＦＳＨ）、ＬＨ细胞（只含ＬＨ）和ＦＳＨ－ＬＨ细胞（既含ＦＳＨ又含ＬＨ）。
- 郝建明刘平张平陈实平王莎丽阎月敏董红燕陈克铨
- 关键词：黄体生成素卵泡刺激素垂体前叶
- 红细胞分化相关蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 1997年
- 应用杂交瘤技术和电泳迁移超滞留技术筛选和制备红细胞分化相关蛋白单克隆抗体，以阐明此类蛋白的生物学功能。用杂交瘤技术制备了５８０株针对终末分化期红细胞，包括人胚肝中、晚幼红细胞和氯高铁血红素（ｈｅｍｉｎ）诱导分化的人红白血病（Ｋ５６２）细胞核蛋白的单克隆抗体。根据单抗以及核蛋白与ＨＳ２ＤＮＡ序列结合形成单抗－蛋白－ＨＳ２复合物的电泳迁移超滞留实验（ｓｕｐｅｒｓｈｉｆｔｅｘｐｅｒｉ－ｍｅｎｔ），从上述单抗中筛选出４种针对ＨＳ２结合蛋白的单抗，并用它们分别与ｈｅｍｉｎ诱导前、后的Ｋ５６２细胞核蛋白、ＨＳ２作同样的超滞留实验。发现这４种单抗对应的蛋白组分在分化前后的细胞中存在差异，利用差异筛选原理从诱导的ＨＳ２－蛋白复合物中筛选出特异于两种分化相关蛋白的单抗ａ和ｂ。Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹分析进一步证明，与单抗ａ和ｂ对应的ＨＳ２结合蛋白为红细胞分化相关蛋白，其分子量分别为７５ｋＤ和２２ｋＤ。
- 王鑫陈实平薛社普
- 关键词：红细胞分化单克隆抗体
