韩小伟
- 作品数：9 被引量：47H指数：5
- 供职机构：川北医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省科技支撑计划南充市应用技术研究与开发资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 穿刺抽吸法诱导兔椎间盘退变模型被引量：12
- 2013年
- 目的:实验通过纤维环穿刺抽吸法建立兔椎间盘退变模型,并通过病理组织学、影像学检测分析此种方法的特点。方法:取10月龄健康日本大耳白12只,雌雄不限,利用21 G穿刺针分别在兔L3～4、L4～5、L5～6节段刺入纤维环并抽吸髓核约8～10 mg;L1～2、L2～3及L6～7节段只暴露不做穿刺抽吸。造模完毕后,实验兔分别于术后4、8、12、16周各取3只进行指标检测MRI检查,然后处死实验动物获取椎间盘,利用病理组织学观察。结果:L3～4、L4～5、L5～6椎间盘髓核MRIT2WI信号强度在术后随时间延长呈现逐渐降低趋势,髓核面积逐渐缩小,椎间隙高度也逐步下降,从术后4周开始两组差异有统计学意义(P<0.05)。随着时间的进展,番红"O"染色显示纤维环穿刺组髓核内细胞外基质含量逐渐减少。结论:纤维环穿刺法可成功建立椎间盘退变模型,比较真实地模拟了人类椎间盘损伤后的退变过程。
- 白亦光韩小伟张旭乾陈华平赵明刘康陈竹杨泽龙倪伟冯刚
- 关键词：椎间盘退变动物模型
- 关节软骨细胞体外培养及生物学特性的实验研究被引量：7
- 2013年
- 目的:探讨关节软骨细胞培养方法及其生物学特征。方法:从4周龄新西兰乳兔关节分离静置培养软骨细胞,倒置显微镜下观察原代及传代细胞形态变化,并计数绘制生长曲线。用番红-O,甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法观察蛋白多糖,碱性糖胺聚糖(GAGs),Ⅱ型胶原的分泌情况,用PCR鉴定Ⅱ型胶原,Aggrecan基因的表达。结果:成功建立兔关节软骨细胞体外培养实验方法。形态学及免疫化学染色显示体外培养3代以内的软骨细胞可保持表型稳定而3代后软骨细胞呈现增殖缓慢及衰老现象。结论:本实验建立的体外培养关节软骨细胞方法简单可行,3代内的兔软骨细胞表型稳定且生物学活性较高,具备可用于实验研究的能力。
- 赵明陈竹张旭乾刘康冯刚刘丽华韩小伟
- 关键词：细胞培养关节软骨生物学特性
- 应用AdEasy-1腺病毒载体系统构建人GDF-5基因重组腺病毒被引量：4
- 2014年
- 目的应用AdEasy-1腺病毒载体系统构建人生长分化因子-5(GDF-5)基因重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。方法将PCR获取的GDF-5基因插入到质粒pMD19-T中,基因测序鉴定后将目的基因克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,HindⅢ酶切鉴定。重组质粒经PmeⅠ酶切使之线性化并去磷酸化处理,电转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌BJ5183,使其在细菌内发生同源重组,卡那霉素筛选,HindⅢ酶切鉴定阳性克隆,扩增重组腺病毒质粒,并转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒Ad-GDF-5,分别采用Western blot、TCID50法对Ad-GDF-5进行蛋白鉴定和滴度测定。结果经PCR扩增得到的GDF-5大小约为1.7kb,基因测序结果证实该基因与GENBANK中人GDF-5基因序列相同。pShuttle-CMV-GDF-5、pShuttle-CMV-GDF-5-AdEasy-1经HindⅢ酶切后均得到大小约为1.7kb的片段,与GDF-5大小相符。Western blot证实Ad-GDF-5感染HEK293细胞后大量表达成熟GDF-5蛋白。研究结果表明成功地构建了携带人GDF-5基因的重组腺病毒载体,并制备出5.6×109 PFU/mL的重组腺病毒。结论利用AdEasy-1腺病毒载体系统成功构建了携带人GDF-5基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度值的重组腺病毒Ad-GDF-5,为进一步研究GDF-5的生物学功能及其相关疾病的基因治疗奠定了基础。
- 罗栩伟罗栩伟陈竹刘康韩小伟陈竹冯刚
- 关键词：腺病毒科生长分化因子-5基因治疗
- 兔骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定被引量：12
- 2013年
- 目的:探讨一种简便可行的兔骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)体外分离培养方法。方法:通过全骨髓贴壁分离法体外分离、扩增兔骨髓间充质干细胞,观察其增殖和生长特性,绘制生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态;并向软骨细胞诱导分化,采用番红快绿染色和甲苯胺蓝染色鉴定。结果:经全骨髓贴壁法得到的骨髓间充质干细胞性状稳定,为纺锤状,呈克隆样生长;成软骨诱导培养的骨髓间充质干细胞,表现出软骨细胞的形态特征和生物学特征。结论:采用全骨髓贴壁分离法操作简便,是培养兔骨髓间充质干细胞的理想方案,在适当的条件下BMSCs能多向分化。
- 刘康白亦光陈竹韩小伟杨泽龙赵明宋桂芹冯刚
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 椎间盘退行性变的生物学治疗进展被引量：10
- 2012年
- 椎间盘退行性变可诱发脊柱退行性改变、椎间盘髓核突出、椎管狭窄等疾病，是引起下腰痛的主要原因，因其具有高发病率和高致残率的特点，给社会和家庭带来了沉重的负担。目前的治疗措施主要包括髓核摘除、椎管减压及退变脊柱节段融合等，但只能在短期内缓解临床症状，其远期疗效并不显著，且存在并发症多的缺点^[1]。近年来，随着分子生物学、细胞生物学的深入研究，发现椎间盘细胞数量减少、压力损伤终板的微骨折、细胞外基质降解增加、炎症因子的异常表达等均可导致椎间盘的主要成分代谢失衡，从而引发椎间盘退行性变的发生、发展。研究人员以此为基础，针对退行性变的不同阶段，利用基因工程、细胞工程、组织工程手段来恢复退行性变椎间盘细胞数量或重建椎间盘解剖结构和生理功能，从根本上为治疗椎间盘退行性变提供了有效策略。
- 韩小伟冯刚(审校)
- 关键词：椎间盘退行性变基因治疗生物学治疗
- 纤维环穿刺抽吸法和纤维环切开法建立兔椎间盘退变模型的比较被引量：10
- 2013年
- [目的]通过纤维环穿刺抽吸法和纤维环切开法建立兔椎间盘退变模型,分析此两种方法的可行性及特点。[方法]取10个月龄健康日本大耳白兔24只,随机分为2组,其中A组为纤维环穿刺抽吸组,利用18 G穿刺针分别在兔L3、4、L4、5、L5、6椎间盘刺入并抽吸髓核8～12 mg;B组为纤维环切开组,利用手术刀分别在兔L3、4、L4、5、L5、6椎间盘纤维环上做水平位切口;造模完毕,两组兔分别于术后4、8、12、16周进行MRI检查,病理组织学观察和免疫组化染色观察。[结果]A、B两组退变椎间盘MRI T2加权像信号随时间延长呈现持续减弱趋势,术后4、8周纤维环穿刺组T2加权像信号强度评分较纤维环切开组低(P<0.05),组织学观察发现造模组髓核细胞逐渐减少;免疫组化染色观察Ⅱ型胶原和蛋白聚糖表达含量随时间延长逐渐降低,且B组含量明显低于A组。[结论]两种方法均能建立兔椎间盘退变模型,但纤维环切开法椎间盘的退变程度较纤维环穿刺法出现较早且较为剧烈。
- 白亦光韩小伟张旭乾陈华平赵明刘康陈竹杨泽龙倪伟冯刚
- 关键词：椎间盘退变
- 骨髓间充质干细胞和脂肪干细胞移植对椎间盘退行性变的干预实验的比较
- 目的：使用纤维环穿刺抽吸法造模兔椎间盘退变模型.探讨三种常用种子细胞髓核细胞(NPC),骨髓间充质干细胞(MSC)和脂肪间充质干细胞(ADSC)对兔子受损椎间盘髓核结构的修复作用,寻求一种最佳的种子细胞.方法：用原代细胞...
- 白亦光刘康陈竹韩小伟罗栩伟杨泽龙冯刚
- 关键词：髓核细胞脂肪间充质干细胞骨髓间充质干细胞椎间盘退行性变
- 三种干细胞移植对退变髓核的治疗效果研究
- 纤维环穿刺抽吸法造模兔椎间盘退变模型.探讨三种常用种子细胞髓核细胞(NPC),骨髓间充质干细胞(MSC)和脂肪间充质干细胞(ADSC)对兔受损椎间盘髓核结构的修复作用,寻求一种最佳的种子细胞.NP,MSC和ADSC三种细...
- 白亦光韩小伟赵明刘康陈竹杨泽龙冯刚
- 关键词：椎间盘退变干细胞移植疗效评价
- 骨髓间充质干细胞移植治疗兔椎间盘退行性变的实验研究
- 目的： 通过髓核抽吸术，建立兔椎间盘退行性变模型，观察骨髓间充质干细胞移植后椎间盘在影像学、组织学、细胞外基质蛋白表达的变化，评价利用骨髓间充质干细胞移植治疗椎间盘退行性疾病的效果。 方法： （1）兔椎间盘退行性变模型建...
- 韩小伟
- 关键词：椎间盘退行性变细胞移植骨髓间充质干细胞
- 文献传递
