高丽芹
- 作品数：8 被引量：21H指数：2
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目长江学者和创新团队发展计划四川省教育厅自然科学科研项目更多>>
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- 天府肉鹅IFN-a基因克隆表达及抗病毒活性的研究
- 此文对天府肉鹅IFN-α(TFGoIFN-α)基因(GenBank登录号HQ115583)开展了以下系列研究:TFGoIFN-α基因克隆、TFGoIFN-α原核表达、重组蛋白复性、复性蛋白抗病毒活性的研究。
1.T...
- 高丽芹
- 关键词：天府肉鹅原核表达克隆表达抗病毒活性
- 天府肉鸭IFN-α基因的密码子使用法特征分析被引量：1
- 2011年
- 密码子简并性特征造成了不同物种密码子使用的偏好性不同,这对外源基因的表达强度有着较大的影响。运用软件对选取的16种IFN-α和天府肉鸭IFN-α基因(EU925650)进行了密码子偏爱性分析。通过进化树的构建结果显示天府肉鸭IFN-α,与北京鸭、河南肉鸭以及绍兴鸭IFN-α的亲缘关系最为接近。通过CAI,ENC,GC3S等数据分析进行了密码子偏爱性特征的分析。结果显示,天府肉鸭IFN-α系统保守基因,与禽类IFN-α基因的密码子使用类似。
- 刘菲高丽芹程安春汪铭书韩清林赵婷婷唐卫杰
- 关键词：IFN-Α密码子偏爱性
- 天府肉鹅IFN-α基因的克隆及生物信息学分析被引量：10
- 2010年
- 采用RT-PCR方法从天府肉鹅外周血单核细胞中扩增了IFN-α基因;并将上述扩增片段克隆到pMD18-T载体中,构建了重组质粒。用生物信息学软件及在线分析方法对IFN-α基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行了分析,同时与13个物种的IFN-α基因进行了同源性比较。结果表明,成功地克隆了IFN-α基因,该基因与同类水禽(鸭、鹅)的IFN-α基因有90%以上的同源性,在进化树中位于同一分支,研究结果为开发鹅的干扰素制剂奠定了基础。
- 刘菲赵婷婷程安春汪铭书韩清林高丽芹唐卫杰
- 关键词：干扰素克隆生物信息学
- 抗鹅细小病毒卵黄IgG的制备及其间接ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提与DEAE50纤维素层析相结合的方法从免疫鹅细小病毒(GPV)的鹅卵内提取鹅卵黄IgG,通过核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG的浓度和纯度后,制备兔抗鹅IgG酶标抗体;建立了针对GPV的间接ELISA抗体检测方法,确定其最佳工作条件,并对该ELISA的特异性及重复性进行检测;应用该间接ELISA检测了GPV VP3基因疫苗的免疫效果。结果显示,获得的纯化鹅卵黄IgG浓度为10mg/mL,抗体纯度达到94.5%,兔抗鹅IgG的血清琼脂扩散效价约为1∶32;经筛选确定该ELISA的最佳工作条件为:最适抗原包被浓度为20μg/mL,最适血清稀释度为1∶100,酶标抗体的最佳工作浓度为1∶3 000。用建立的间接ELISA检测禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒的阳性血清均为阴性,表明该方法特异性强、重复性好。经临床初步应用,能检出GPV VP3基因疫苗产生的抗体,在肌肉注射100μg与200μg基因疫苗的鹅血清中,IgG均从第14天开始上升,并分别在第35、21天达到最大值。表明本试验制备的兔抗鹅IgG酶标抗体具有较好的应用价值。
- 刘菲唐卫杰程安春汪铭书赵婷婷韩清林高丽芹
- 关键词：纯化间接ELISA
- 天府肉鹅IFN-α基因克隆表达及抗病毒活性的研究
- 此文对天府肉鹅IFN-a （TFGoIFN-a）基因（GenBank登录号HQ115583）开展了以下系列研究：TFGoIFN-a基因克隆、TFGoIFN-a原核表达、重组蛋白复性、复性蛋白抗病毒活性的研究。 1....
- 高丽芹
- 关键词：复性生物学活性
- 文献传递
- 兔抗鹅IgG酶标抗体的制备及初步应用被引量：2
- 2011年
- 为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅IgG抗血清效价约1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。
- 刘菲唐卫杰韩清林赵婷婷高丽芹严晓玲
- 关键词：酶标
- 鹅α干扰素基因在COS-7细胞中的瞬时表达及抗病毒功能初探
- 2011年
- 为了研究鹅α干扰素(goIFN-α)基因的特性和功能,将天府肉鹅的α干扰素基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建重组质粒pcDNA3.1-goIFN-α,脂质体介导将其转入COS-7细胞中;应用间接免疫荧光、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫印迹(Western-blot)法检测goIFN-α基因在COS-7细胞中的转录和表达情况,并对COS-7细胞表达上清液进行抗病毒活性检测.结果表明:目的蛋白在转染12 h后就可以被检测出,36 h前目的蛋白在上清液中快速增加,之后增加速度变慢;重组质粒能够在COS-7细胞内得到高效表达,表达的蛋白分子质量为38ku,比预测的分子质量(约21 ku)大;间接免疫荧光显示,细胞内出现黄绿色荧光,胞核附近最亮;表达产物经细胞病变抑制法测定,显示出具有明显的抗猪水泡性口炎病毒(VSV)及小鹅瘟病毒(GPV)的活性.
- 刘菲唐卫杰程安春汪铭书赵婷婷高丽芹
- 关键词：COS-7细胞免疫印迹间接免疫荧光
- 天府肉鹅IFN-α成熟肽基因的原核表达及抗病毒活性被引量：2
- 2011年
- 参照已克隆的天府肉鹅IFN-α完整ORF基因序列设计引物,克隆成熟肽基因,与载体pET32a连接,构建原核表达载体,并在表达菌Rosetta中表达,SDS-PAGE分析鉴定,通过Ni-IMAC亲和层析纯化和稀释透析复性后,采用微量细胞病变抑制法分析测定IFN的抗病毒活性。结果显示,IFN-α成熟肽基因全长486 bp,共编码161个氨基酸;成功构建了原核表达载体pET32a-mGoIFN-α并得到表达,SDS-PAGE和Western-blot分析表达蛋白的大小为38 ku;纯化复性后的表达蛋白抗水泡性口炎病毒(VSV)活性的比活力为5.52×103U/mg,表明重组蛋白具有良好的抗病毒活性。
- 刘菲高丽芹程安春汪铭书韩清林赵婷婷唐卫杰严晓玲
- 关键词：天府肉鹅Α干扰素原核表达抗病毒活性水泡性口炎病毒
